Способ отбора лизогенных штампов холерных вибрионов

 

СПОСОБ ОТБОРА ЛИЗОГЕННЫХ ШТАММОВ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ, включающий выращивание в питательном бульоне и на поверхности двухслойных агаровых питательных сред в присутствии индикатора в верхнем слое среды , отличаю щ И и с я тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, полученную бульонную культуру непосредственно высевают на агаровые среды, содержащие в качестве индикатора основной фуксин в концентрациях 0,1 0,2 и 0,3 мг/мл среды, и отбирают лизогенные штамл« по наличию роста на средах в присутствии всех концентраций фуксина.

СО1ОЭ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) 3(511 С 12 N 15/00

"1 1 д,:, 1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPGHGMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3213746/28-13 (22) 10.12.80 (46) 30.06.84. Бюл. М 24 (72) Т.A.Êóäðÿêîâà (71) Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт (53) 575. 243 (088. 8) (56) 1. Микробиология и лабораторная диагностика холеры. Сборник. Ростовн а-Дону, изд. РПЧИ, 1975, 109-110 . (5 4 ) (5 7 ) СПОСОБ ОТБОРА ЛИЗОГЕ ННЫХ

ШТАИИОВ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ, включающий выращивание в питательном бульо не и на поверхности двухслойных агаровых питательных сред в присутствии индикатора в верхнем слое среды, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, полученную бульонную культуру непосредственно высевают на агаровые среды, содержащие в качестве индикатора основной фуксин в концентрациях 0,1 0,2 и 0,3 мг/мп среды, и отбирают лйзогенные штамьы по наличию роста на средах в присутствии всех концентраций фуксина.

0 40. . 20

Составитель

Техред C.Ëåãåçà

Корректор .«1. 0«е н ьо

Реда«<тор 1. 10ркова

За<аз 4023/4 Тираж 522

В;!!",!,1И Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

11 10 3, Москва, Ж-35, Рау««,ская наб., д. 4, 5

Подписное

;,««па «111!11 "Патент", г ° ужгород, ул.Проектная, 4

Изобретение относится к области медицины . а име нн о к ми Kpoáèoë îãèè.

Известен способ отбора лизогенных шгаммон холерных вибрионов, нключаю«ций ныращина.«ие в питательном буль— о««е и ««а поверхности двухслойных 5 агаровых питательных сред в присут— ствии и««дикатора в верхнем слое среды (1) .

Сднако из вест ны и способ является довольно сложным.

Целью изобретения является ускорение и упрощение отбора лизогенных щтаммов холерных вибрионов.

Цель достигается тем, что н способе отбора лизогенных штаммон, включающем выращивание и питатель— ном бульоне и на поверхности двухслойных агаровых сред в присутствии индикатора н -.ерхнем слое среды, полученную больонную культуру непосредственно нысенают на агаровые среды, содержащие в качестве индикатора основной фуксин в концентрациях

0,1„ 0,2 и 0,3 мг/мп среды, и от бирают лизогенные штамиы по нали— чию роста на средах н присутствии нсех концентраций фуксина.

Способ осуществляют следующим об— разом.

10 мг основного фуксина растворяют в 10 мл дистиллированной воды, 30 подогревая н ад пламенем горел ки до полного растворения. Затем возрастаю- .,!не количества приготовленного растьора фуксина. О, 5 мл (1), 1 мл 1), 1,, 5 мл (!О), что соответстнует

0,1„: 0,2; 0,3 мг/мл основного фукси«;а, вносят в 3 пробир1<и растопленного

0,7Ъ-ного мясопептонного агара (pH 7,6-7,8) и выливают вторым слоем на поверхнос=ь 1,53-ного агара в чашки !., П, !!1 соответственно. Среда

::меет малиновую окраску. На поверхность застывшего агара наносят к аплю етыре хч àсон ой бул ьон ной кул ь— туры лизогенногo и .. «елизогенного

45 штам«хов н виде "дорожки". Результаты учитывают через 1 сутки ныращинания при 37 . Рост лизогенных куль— тур, имеющих колонии роэового цве— та, отмечается на всех средах, содержащих фуксин, с уме««ьшениеи интенсивности роста к 111 чашке, «.äå наибольшая доза препарата. Рост не— лиэогенных штаммон отсутствует, иногда присутствуют единичные коло-нии только на 1 концентрации. Через сутки выращивания посев он петлей снижают колонии с чашки, содержа щей наибольшую концентрацию фуксина и пересевают на обычну«о пита; < эь««ую среду . Выросшие лиз оге «««ы» колонии сохраняют все свойства исходных шт аммо в .

Пример, Отсенают в бульон по 1 петле односуточные. агароные культуры вибрионов ": льтор 381-В (лизогенный) и 5879,;íæ êçoãå««««ûé) и выращивают в течение 4 ч при

37 С.

Готовят глотную <:ëòàòåëüную сре— ду, содержащую фуксин. Для этого

10 Mx оси<>.. «.«<. "о фуксина в 10 мп дистиллированной воды, подогреная над ламенем горелки до полного растворения. Затеи отбирают иэ горячего раствора фуксина 0, 1 ил (1) и 1 мл (П), 1, 5 мп (11) вносят н три пробирки с 4 мл растопленного

0,79-ного агар а (1, Й, 111 соотве -— ственно) и выливают вторым слоем н;. поверхность 1,5Ъ-ного мясопепто««!«ого агара н чашки Петри (<, П, «1! соответственно) . На хорошо подсушенные чашки с агаром фуксина накосят

1 каплю четырехчасовых бульонных культур 381-B и 5879 в виде "дорожек" параллель««о друг другу. Посе— вы ныр ащи вают при 37 С H у чит H а«с.<« цвета отмечается на всех агарсвых пластинках, рост нелизогенной куль— туры 5879 отсутстнует.. 1изоген: у с культуру снимают петлей с чашки 1«! и пересенают на обычный агар;< я дальнейших опытон. « .епизогенную культуру пересевают в исхо-.,íîé чаш— ки без фуксина.

Изобретение поз ноляет у. скорить и упростить отбор лизогенных, ., таммон холерных вибрионов при проведе— нии генетических исследований.