Штамм плесневого гриба aspergillus аwамоri-10-3-продуцент @ -галактозидазы

 

C4Io3 Советсииа

Социалистических

Респубпии

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (iii9585G3 (61) Дополнительное к авт. саид-ву (22) Завалено 24.10.80 (2 I ) 3213348/28 — 13 (51)М. Кл. с присоединением заявки №

С 12 и 15 00

3Ьвудерствопвй кеинтвт

CCCP

OO йвяэи нэобретеннй н вткритнй (23) П риоритет

Опубликовано. 15.09,82. Бюллетень № 34

Дата опубликования описания 15.09,82 (53) УДК 577.15 (088.8) (72) Авторы изобретения

Н. С. Миронова, Л. С. Лосякова, Л. Н. Соламасов и И. С. Коршунов (3

) (7I ) Заявитель

Всесоюзный научно — исследовательский биотехничес институт (54) ШТАММ ПЛЕСНЕВОГО ГРИБА ASPERGILLUS

AWAMOR I — 10 — 3-ПРОДУЦЕНТ а — ГАЛАКТОЗИДАЗЫ

1 ,Изобретение относится к ферментной отрас ли микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм плесневого гриба, который может быть использован для получения фермента а -галактоэицазы применя5 еМого в пищевой промышленности и сельском хозяйстве с целью гидролиза трудноусвояемых и несбраживаемых а-галактозидов (рафинозы, стахиозы, мелибиозы и т. п.}.

Известны различные штаммы микроорганизмов-нродуцентов а-галактоэидазы, например штамм плесневого гиба Aspergi11us awamori-16, полученный действием этиленимина и ультрафиолета на колонии гриба Asp. awamori.

При поверхностном культивировании на пшенич-15 ных отрубях на 7-ые сутки дает активность а -галактозидаэы при действии на мелибнозу

15 — 18 ед/г (1).

Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому результату является 2о штамм Asperg 11us awamori — 22, который используют как продуцент глюкоамилазы. Однако при дальнейшем исследовании штамма установлено, что при определенных условиях он продуцирует и ф-галактозидазу с активностью 20-25 ед/г

f 2).

Недостатком известных штаммов является их сравнительно невысокая активность.

Цель изобретения — выделение нового штамма плесневого гриба Asperg i11us awa — . воп — 10 — 3, обладающего повышенной способностью к биосинтезу а-галактоэидазы при поверхностном способе культивирования.

Предлагаемый штамм плесневого гриба AsрегяН1цв awamori-10-3 выделен из гниющего растительного субстрата, подвергнут рассеву с выделением моноспоровой культуры, многократным пассажем на сусло — агар и увлажненные стерильные пшеничные отрубки, а также длительному хранению с последующими пересевами.

Штамм плесневого гриба Aspergi11us awamori — 10 — 3 — продуцент а-галактоэидаэы хранится в коллекции Центрального музея промьпцленных микроорганизмов, регистрационный номер

ЦМПМ Е вЂ” 148.

Морфологические признаки. Мицелнй хорошо развит, септированный, бесцветный. Конидиенос3 958503 цы длиной 800 — 1000 мкм ф 5 — 20 мкм обособленные, простые, подымающиеся над субстратом, оплетены тонкими ф 1 — 2 мкм воздушными вегетативными гифами. Конечный пузырь (веэикула) круглый с двурядными стеригмами, плодоносит по всей поверхности, образуя головку 100—

200 мкм. Верхне конец конидиеносца, веэикульт и стеригмы окрашены в коричневый цвет. Конидии крутлые, одноклеточные, ф 4 — 6 мкм, имеют окрашенную в серый цвет гладкую обо- 10 почку.

Культуральные признаки. Сапрофит на растительных остатках. На синтетической среде Чапека с агаром образует быстро растущую со сла(.

I бой радиальной складчатостью колонию, достига- 15 ющую за 10 дней 5 — 7 см в диаметре. Субстратиый мицелий белый, спороносная эона колонии серая, край колонии белый, зональность. выражена слабо. Эксудат отсутствует. 3апах слабы9, Активность а-галактозидазы, ед/г"

Выход агалактозидазы усл; . кг/т. культуры

Продуцент

637-765

15 — 18

20 — 25

30 — 35

850 — 1062

1275-2125

10 — 3 активность выражена в международных единицах и определяется по гидролизу мелибиозы в стандартных условиях.

Использование предлагаемого штамма дает возможность при организации производства а -галактозидазы в СССР получать культуру гриба с повышенной в 1,5-2 раза активностью.

Ожидаемый экономический эффект от применения а-галактозидаэы только в спиртовой промышленности составляет 72 руб. на

1000 дал спирта.

Штамм .плесневого гриба Aspergil lus awamori — 10 — 3 (Коллекция музея культур промьппленных микроорганизмов института "ВНИИгенетика" коллекционный номер ЦМПМŠ— 148) — продуцент а-галактозидаэы.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство .СССР N 164006, кл. С 12 К 3 00, 1963.

2. Калунянц К. А., Голгер Л. И. Микробные ферментные препараты. М,, "Пищевая промышленность," 1979, с. 10-11 (прототип).

ВНИИПИ Заказ 6983/37 Тираж 505 Подписное

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 грибной.

На естественной среде из солодового сусла с агаром, колонии за 7 дней достигают диаметра

8 — 9 см, имеют радиальную складчатость. Спороносная зона серая. Субстратный мицелий белый, воздушный бесцветный, одинаковой высоты с конидиеносцами.

На картофеле растет хорошо, спороносит.

Желатину разжижает.

Молоко цептонизирует.

Отношение к углеродному питанию: ассимилирует крахмал, глюкозу, мальтозу, сахароэу, мелибиозу, лактозу, галактозу, органические кислоты.

Отношение к азотному питанию: растет на нитратиых, аммонийных и органических источниках азота. 35

Отношение к кислороду: аэроб.

Отношение к температуре: мезофилл, оптимум роста — 28 — 32 С.

Отношение к кислотности среды: рН-оптимум 4,5 — 5,5, через 4 — 5 сут роста рН-оптимум 6 — 7.

Культивирование Aspergi11vs awamori — 10 -3 проводят в поверхностных условиях на среде, состоящей из пшеничных отрубей, при 30 С в течение 7 сут. Фермент экстрагируют водой.

Активность а-галактозидазы в экстракте, определяемом по гидролизу мелибиозы, составляет 30 — 50 единиц на 1 г сухой культуры.

Проверкой, проведенной в течение двух лет, установлено, что при хранении в пересевах 50 уровень ферментативной активности Аарегф11пз

awamor i — 10 — 3 не снижается.

Таким образом, выделенный новый штамм по сравнению с известным обладает иными морфологическими свойствами и преимуществом, заключающимся в повышенной способности к биосинтезу а -галактозидазы, и представляет собой новую культуру со стойкими биохимическими свойствами.

В таблице представлены сравнительные результаты по определению активности Asp.

awamori штаммов !6, 22 и 10 — 3 и по выходу

Ь сцелевого продукта при использовании этих продуцентов.

Формула изобретения