Способ количественного определения жирнокислотного состава липидов микроорганизмов

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗЬБРЕТЕ Н ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

<, Я68072 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 25.12.80 (21) 3246058/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (51) М.К .

С 12 Q 1/00

Гаеударствеинмв комитет

СССР (53) УДК 663-18 (088.8) Опубликовано 23.10.82. Бюллетень №39

Дата опубликования описания 28.10.82 па делам изобретеиий и открытий (72) Авторы изобретения

Ю. А. Султанович, А. П. Нечаев н И. А.

Московский ордена Трудового Красного Знаме институт пиш евой промышленн (71) Заявитель (54} СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ЖИРНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА ЛИПИДОВ

МИК POOP ГАН ИЗМО В

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу количественного определения жирнокислотного состава липидов микроорганизмов.

Известен способ количественного определения жирнокислотного состава липидов микроорганизмов, предусматривающий обработку биомассы при нагревании с последующим анализом реакционной смеси методом газовой хроматографии (1).

Обработку ведут методом сопиролиза, согласно которому биомассу обрабатывают раствором гидроокиси тетраметаноламмония и нагревают при температуре 120 †1 С.

Полученную реакционную смесь подвергают газохроматографическому анализу (2) .

Недостатком известного способа является невозможность количественного определения полиненасыщенных жирных кислот, что ограничивает способ определения жирнокислотного состава бактерий, которые их не содержат.

Цель изобретения — определение количества полиненасыщенных жирных кислот.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу количественного определения жирнокислотного состава липидов микроорганизмов, предусматривающему обработку биомассы при нагревании с последующим анализом реакционной .смеси методом газовой хроматографии предложено в биомассу добавлять последовательно ацетилхлорид и метанол, кипятить до удаления растворителей, остаток обрабатывать гексаном и анализу подвергать гексановую вытяжку, при этом соотношение биомасса:ацетилхлорид:метанол должно составлять 100: (50— о 60); (180 — 220)

Способ позволяет определять жирнокислотный состав биомассы дрожжей и грибов, содержащих полиненасыщенные жирные кислоты.

/ Пример 1. В колбочках объемом 3,5мл

1s взвешивают 100 мг воздушно-сухой биомассы хлебопекарных дрожжей, обрабатывают ее 4,8 мг ацетилхлорида, а затем кипятят в 2,5 мл метанола. Температура песочной бани 80 С. После упаривания в колбоч20 ку добавляют 0,1 мл гексана. Один микролитр гексановой вытяжки вводят в хроматограф. Условия анализа: длина колонки 2 м, диаметр 3 мм, сорбент — хроматон

NAWHMDS (фракция 0,125 — 0,160 мм) пропитанный 20% диэтиленгликольсукцина968072

Формула изобретения

10

ra. 1емпература термостата колонок 190 С, температура испарителя 220 С. Расход газа-носителя 40 смз/мин. Детектор пламеннононнзационный (ПИД) . Расход водорода

40 см /мин, воздуха 400 смз/мин. Спектр жирных кислот липидов хлебопекарных дрожжей показывает преобладание кислот

С1s:o, C> e:i, Ci s:<. Определены также полиненасыщенные жирные кислоты с двумя двойными связями С 16: и С,,, в количестве 0,27% и 3,15% соответственно (фиг. 1).

Пример 2. Проводят анализ жирнокислотного состава липидов пивных дрожжей.

Анализ осуществляют согласно пример т

В составе жирных кислот липидов пивных дрожжей значительно преобладает кнс- 15 лота C 6:р. Определены также полиненасыщенные жирные кислоты C e:д и С1з..д в количестве 1,37% и 0,08% соответственно (фиг. 2).

Пример 8, Определяют жирнокислотный состав лнпидов биомассы грибов рода Nucor, полученной при проведении микробиологического контроля зерен риса. Рис промывают водой и производят посев в чашках Петри на агаровых средах. Выросшую колонию осторожно собирают и взвешивают по 10 мг в колбочках объемом 3,5 мл. Затем биомас- 25 су обрабатывают 5,0 мг ацетилхлорида и кипятят в 20 мг (0,25 мл) метанола. Температура песочной бани 80 С. После упаривания в колбочку добавляют 0,1 мл гексана. Один микролнтр гексановой вытяжки вводят в хроматограф. Условия хроматографирования аналогичны примеру 1. Определены полиненасыщенные жирные кислоты «s:z и Сщ-s

B количестве 17,95% и 18,53% соответственно (фиг. 3).

Пример 4. Объектом исследования была биомасса микроорганизма рода Candida, выращенного на углеводородах. В колбочках объемом 3,5 мл взвешивают по 300 мг влажной биомассы (влажность 66%), обрабатывают ее 60 мг ацетилхлорида и кипятят в

220 мг метанола. Температура песочной бани 80 С. После упаривания в колбочку добавляют 0,1 мл гексана. Один микролитр гексановой вытяжки вводят в хроматограф. Условия хроматографирования анализа аналогичны примеру 1.

Определены полиненасыщенные жирные кислоты С162, С а;g и Сщ,> в количестве

0,43%, 21,69% и 8,97% соответственно (фиг. 4).

Таким образом, предлагаемый способ количественного определения жирнокислотного состава липидов микроорганизмов позволяет определять количество полиненасыщенных жирных кислот, что делает возможным анализировать биомассу микроорганизмов различных родов.

Способ количественного определения жирнокислотного состава липидов микроорганизмов, предусматривающий обработку биомассы при нагревании с последующим анализом реакционной смеси методом газовой хроматографии, отличающийся тем, что с целью определения количества полиненасыщенных жирных кислот, в биомассу добавляют последовательно ацетилхлорид и метанол, кипятят до удаления растворителей, остаток обрабатывают гексаном и анализу подвергают гексановую вытяжку, при этом соотношение биомасса:ацетилхлорид:метанол составляет 100: (50 — 60): (180 — 220) .

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Андреев Л. В., Склифас А. Н. О хемотаксономических аспектах липидного обмена бактерий. Сб. «Биохимия и биофизика микроорганизмовк Горький, изд-во ГГУ, 1977, с. 3.

968072

Фиг.2

Составитель Т. Мелентьева

Редактор Г. Волкова Техред И. Верес Корректор А. Гриценко

Заказ 7259/40 Тираж 505 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и о1крытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4