Способ диагностики инфаркта миокарда

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советскнк

Социапнстнческик

Республик

<и>976958 (6t) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 06.02 74(2l) 1999385/28-13 (23) Приоритет — (32) 07.02.73 (3() WPG 01/168765 (Зз) ГДР

Опубликовано 30, 11 . 82. Бюллетень № 44

Р< М g+ з

A 61 В 10/00

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (33) УДК 616-079..3(088.8}

Дата опубликования описания 30.11.82

Иностранцы

ЭРнст-Георг Краузе, Хорст Вилль, Манфред . у и Альберт Волленберген (ГДР) (72) Авторы изобретения

1 4

Иностранное предприятие

Арцнаймиттельверк Дрезден " (ГДР) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ДИАГHOCTHKH ИНФАРКТА МИОКАРДА

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике инфаркта миокарда.

Известен способ диагностики инфаркта миокарда путем определения активности фермента в сыворотке крови (1).

Однако известный способ является трудоемким, так как в сыворотке на ходится лишь незначительное количе ство фосфорилазы при большом избытке других протеинов, что мешает реакции определения.

Цель изобретения — упрощение способа.

Поставленная цель достигается тем, что в сыворотке крови определяют активность фосфорилазы 3, при этом сыворотку крови концентрируют путем мембранного фильтрования или с помощью обработки нерастворимым крахмалом, для чего пробу наносят на колонку с крахмалом, при 4 оС предварительно набухшим в растворе, содержащем .фтористый натрий, Ь-глицерофосфат натрия и меркаптоэтанол при рН 6,1, после чего элюируют фосфорилазу раствором, содержащим .Р -глицерофосфат натрия, этилендиаминтетрауксусную кислоту и меркаптоэтанол, при РН 6,8 и t 30о, полученную фракцию инкубируют 60 мин при 37 С с раствором, содержащим гликоген, глюкозо-1-фосфат и аденозиниминфосфат в соотношении 5:3:2, полученную смесь обрабатывают трихлоруксусной кислотой, образовавшиГ.ся осадок отделяют, а в надосадочйой жидкости определяют фосфорилазу 3 электрофоретическим методом и при наличии этого фермента диагносцируют инфаркт миокарда.

П р е р 1 . Берут следующие средства для определения фосфорилазы.

15 Раствор 7. 0,1 M фторида натрия

0,01 М натрия-,9-глицерофосфата,рН 6,1

0,015 М меркаптоэтанола .

20 Раствор IT . . 0,,04 М натрия-/3-глицерофосфата, рН 6,8

0,001 М этилендиамин-. тетрауксусной кислоты

0,015 М меркаптоэта0,04 М глицилглицина, рН 6,8

0,01 M меркаптоэтанола

0,008 М этилендиамин30 тетрауксусной кислоты, 9 76958

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Редактор Л. Пчелинская Техред T.Ôàíòà

Корректор Н. Король

Заказ 9048/5 Тираж 714

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. ПроекТная, 4

Раствор !Ч . 3,3Ъ гликогена

Раствор Y . 00,083 М глюкозо-1-фос. фата

0,005 М аденозиниминофосфата.

Сыворотку предварительно концент- 5 рируют посредством мембранной фильтрации в отношении от 2:1 до 3:1 или обрабатывают нерастворимым крахмалом, 3-4 мл сыворотки наносят на столбик крахмала,(2 х 1 см), который уравновешивают раствором 1. После этого его трижды промывают раствором 1 по

3 мл и элюируют 2 мл раствора !! при 30 С фосфорилазу. 1 -ч. концентрированной сыворотки промывают 1 ч. растнора )(! . К 5 ч. этой смеси или элюата столбика крахмала добавляют

3 ч. раствора Я и 2 ч. раствора 9

После 60 мин инкубации при 37 С проводят денатурацию трихлоуксусной кислоты и проводят анализ продукта реакции на фосфат по известному способу.

Пример 2 . Способ осуществляют по примеру 1, но определение активности фермента проводят в присутствии специфических веществ, подавляющих изофосфорилазы. Из разност. определений по примеру 1 может быть рассчитана доля активности мускульной фосфорилазы, специфичной для сердца.

Средство для разделения изофосфо. рилазы и определения активности фермента имеет следующий состав.

Раствор 1. 0,042 М трис(оксиметил)аминометана

0,001 N этилендиаминтетрауксусной кислоты

0,049 M борной кислоты, рН 8,2, 40

Растнор ll, 0,03 M глюкозо-1-фосфата

0,002 М аденозиниминофосфата

0,002 M натрий-(-глице- 45 рофосфата, рН 6,8

0,002 М этилендиаминтетрауксусной кислоты

0,001 М меркаптоэтанола 50

0,1 М фторида натрия, Раствор !П 0,01 М йода

0,014 М йодида калия, Аликноты, содержащие фосфорилазы в элюате с крахмальной колонки (пример 1), разбавляют в отношении 2:1 посредством 1,2 М сахарозы и разделяют электрофоретически на изофосфорилазы. Отдельный гель (5% акриламина, 0,2% N N -метилбисакриламида) содержит 0,1% гликогена и буферируется раствором 1, который одновременно является электронным буфером.

После инкубации геля, несущего фермент, в растворе !! боковые цепи, имеющие вид амилазы и возникающие у гликогена, заполимеризонавшегося в геле, проявляются раствором ill (становятся видимыми).

Предлагаемый способ позволяет быстро определить активность фосфорилазы В, наличие которой обеспечивает диагностику инфаркта миокарда.

Способ диагностики инфаркта миокарда путем определения активности фермента в сыворотке крови, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью упрощения способа, в сыворотке крови определяют активность фосфорилазы В, при этом сыворотку крони

Концентрируют путем мембранного фильтрования или с помощью обработки нерастворимым крахмалом, для этого пробу наносят на колонку с крахмалом, при 4 С предварительно набухшим н растворе, содержащем фтористый натрий, !р -глицерофосфат натрия и меркаптоэтанол при рН 6,1, после чего элюируют фосфорилазу раствором, содержащим р -глицерофосфат натрия, этилендиаминтетрауксусную кислоту и меркаптоэтанол при рН 6,8 и t 30 С, полученную фракцию инкубируют 60 мин при 37 С с раствором, содержащим гликоген, глюкозо-1-фосфат и адено-, зиниминофосфат в соотношении 5:3:2, полученную смесь обрабатывают трихлоруксусной кислотой, образовавшийся осадок отделяют, а н надосадочной жидкости определяют фосфорилазу 3 электрофоретическим методом и при наличии этого фермента диагностируют инфаркт миокарда.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Асатиани В.С. Ферментные методы анализа. 1969, с. 623-642.