Патенты автора Воробьев Иван Иванович (RU)
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к рекомбинантной продукции факторов свертываемости крови, и может быть использовано для экспрессии фактора свертываемости крови IX человека (hFIX). Конструируют плазмиду для экспрессии hFIX в клетках СНО, состоящую из области начала репликации плазмиды pUC, открытой рамки считывания бета-лактамазы (bla) и прокариотического промотера гена bla; участка терминального повтора EBVTR, функционального промотора и первого интрона гена фактора элонгации 1 альфа китайского хомячка, фланкированного 5' нетранслируемой областью этого гена; открытой рамки считывания гена, кодирующего hFIX; внутреннего сайта IRES EMCV; открытой рамки считывания DHFR, экспрессирующейся в составе бицистронной мРНК вместе с геном, кодирующим hFIX; и функционального терминатора гена фактора элонгации 1 альфа китайского хомячка, фланкированного 3' нетранслируемой областью этого гена. Изобретение позволяет повысить эффективность продукции hFIX. 3 н. и 12 з.п. ф-лы, 3 ил., 3 табл., 7 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для рекомбинантного получения тканевого фактора человека (чТФ). Конструируют плазмиду pHYP-10ETFCS6 длиной 5912 п.о. с физической картой, представленной на Фиг. 2, для экспрессии в бактерии рода Escherichia предшественника мутеина [C245S] чТФ, содержащего отщепляемый N-концевой лидерный пептид, содержащий декагистидиновый кластер и последовательность узнавания энтерокиназы, слитую в рамке с последовательностью, кодирующей указанный мутеин, слитый в рамке с последовательностью, кодирующей дополнительный неотщепляемый C-концевой пептид, содержащий гексагистидиновый кластер. Способ получения предшественника мутеина [C245S] чТФ включает культивирование бактерии-продуцента в питательной среде, выделение телец включения, солюбилизацию белка-предшественника, металлохелатную хроматографию в денатурирующих условиях, рефолдинг и диафильтрацию раствора белка. Способ получения зрелого мутеина [C245S] чТФ, включает отделение N-концевого лидерного пептида от указанного предшественника мутеина с использованием энтерокиназы и выделение целевого белка. Изобретение позволяет повысить уровень биосинтеза и выход прокоагуляционно активного чТФ. 6 н. и 3 з.п.ф-лы, 5 ил., 1 табл., 7 пр.
Изобретение относится к биотехнологии, конкретно к композициям для индукции развития кровеносных сосудов в тканях, и может быть использовано в медицине. Способ предусматривает трансформацию штамма E. coli TOP10 плазмидой pCMV-VEGF165, культивирование штамма в подходящих для накопления биомассы условиях с последующим выделением плазмиды pCMV-VEGF165 в сверхскрученной форме и последующую лиофилизацию плазмиды pCMV-VEGF165, которую проводят при обязательном присутствии в лиофилизируемом растворе криопротектанта, стабилизатора рН, антиоксиданта и иных веществ, позволяющих получить изотонический раствор для инъекций с концентрацией очищенной плазмиды от 0,1 до 10 мг/мл и рН от 7,0 до 9,0 и обеспечивающих сохранение сверхскрученной формы плазмиды pCMV-VEGF165 при последующем хранении. Способ лечения ишемии тканей и/или органов человека заключается во введении внутримышечно человеку эффективного количества полученной фармацевтической композиции. Изобретение позволяет получить пригодную для терапии фармацевтическую композицию плазмидной ДНК pCMV-VEGF165 с сохранением свойств основного вещества при продолжительном хранении при температуре +2-+8°С. 3 н.п. ф-лы, 2 ил., 4 табл., 5 пр.
Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения рекомбинантных белков с Gla-доменом в клетках китайского хомячка. Сконструирована плазмида для экспрессии в клетке китайского хомячка, в следующей последовательности, по существу, содержащая следующие элементы: область начала репликации плазмиды pUC; открытая рамка считывания бета-лактамазы, обеспечивающей устойчивость к ампициллину; прокариотический промотор гена bla; участок терминального повтора вируса Эпштейна-Барр человека; функциональный промотор гена фактора элонгации 1 альфа китайского хомячка, 5' нетранслируемая область этого гена и нетранскрибируемая область, фланкирующая этот ген; область, кодирующая последовательность Козак для кэп-зависимой инициации трансляции; ОРС гена субъединицы 1 комплекса 2,3-эпоксиредуктазы витамина К (VKORC1) китайского хомячка со стоп-кодоном; функциональный терминатор и сигнал полиаденилирования гена фактора элонгации 1 альфа китайского хомячка, 3' нетранслируемая область этого гена и нетранскрибируемая область, фланкирующая этот ген; промотор ранних генов вируса SV40; ген устойчивости к селекционному агенту; и сигнал полиаденилирования и терминатор вируса SV40. Полученной плазмидой трансформируют клетки китайского хомячка - продуцента белка с Gla-доменом, которые используют в способе рекомбинантного получения белков с Gla-доменом. Изобретение позволяет повысить продуктивность указанных клеток за счет повышения активности нативного VKORC1. 3 н. и 9 з.п. ф-лы, 12 ил., 2 табл., 8 пр.
Изобретения относятся к области биотехнологии и касаются слитого белка для специфического ингибирования свертывания крови, экспрессионной плазмидной ДНК, кодирующей такой слитый белок, бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, трансформированной такой ДНК, и способу получения слитого белка. Представленный слитый белок включает тиоредоксин I E.coli и инфестин-4 и характеризуется последовательностью SEQ ID NO:2. Плазмидная ДНК содержит последовательность SEQ ID NO:1, кодирующую представленный слитый белок, находящуюся под контролем промотора, функционирующего в бактериальной клетке. Способ получения упомянутого слитого белка включает культивирование упомянутых бактерий в питательной среде, разрушение бактериальных клеток и очистку указанного слитого белка с использованием металлохелатной хроматографии и анионообменной хроматографии. Охарактеризованные решения позволяют получить белок, обеспечивающий указанную специфичность, с последующим его использованием в блокировании контактной активации свертывания крови за счет ингибирования XIIa фактора и отсутствии ингибирования Ха фактора. 4 н.п. ф-лы, 10 ил., 7 пр.
Изобретение относится к биотехнологии и генной инженерии. Нетранскрибируемый плазмидный вектор состоит из гена маркера селекции с промотором и терминатором, области инициации репликации и полилинкера, содержащего 15 или более уникальных гексануклеотидных сайтов расщепления эндонуклеазами рестрикции, 3 или более октануклеотидных сайтов расщепления эндонуклеазами рестрикции и два сайта узнавания Xcml, расположенные в центре области полилинкера в противоположной ориентации и образующие при расщеплении указанной рестриктазой непарные выступающие одиночные остатки дезокситимидина на 3′-концах цепей ДНК. Предложена также линеаризованная форма нетранскрибируемого вектора. Предложен также набор, содержащий нетранскрибируемый плазмидный вектор или нетранскрибируемый линейный вектор, лигазу и инструкцию по применению набора. Изобретение позволяет получить векторы, обеспечивающие возможность прямого клонирования ПЦР-продуктов, клонирования GC- AT-богатых последовательностей, модульной сборки генетических конструкций. 3 н. и 6 з.п. ф-лы, 6 ил., 4 табл., 10 пр.
Группа изобретений относится к биотехнологии и представляет собой способ получения рекомбинантной ДНКазы I человека или ее мутеина, а также их конъюгатов с полиэтиленгликолем, с использованием бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, трансформированной экспрессионной плазмидой, содержащей промотор, функционирующий в бактериальной клетке, фрагмент ДНК, кодирующий гексагистидиновый кластер, фрагмент, кодирующий последовательность узнавания энтерокиназы, слитую в рамке с ДНКазой I человека или ее функционально активным мутеином, содержащим замены аспарагина на цистеин, участок терминации транскрипции, фрагмент вектора рЕТ28а(+), содержащий участок инициации репликации бактериофага fl, последовательность, кодирующую аминогликозид-3'-фосфотрансферазу, область начала репликации плазмиды pBR322, ген РНК-организующего белка Rop, последовательность, кодирующую репрессор лактозного оперона. Предложенное изобретение позволяет получать рекомбинантную ДНКазу I человека или ее мутеин с высоким выходом. 6 н. и 12 з.п. ф-лы, 7 ил., 1 табл., 12 пр.
Изобретение относится к биотехнологии и предоставляет способ получения рекомбинантного мутеина [C112S] легкой цепи энтерокиназы человека с использованием бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, трансформированной экспрессионной плазмидой, содержащей фрагмент ДНК, кодирующий неактивный предшественник мутеина [C112S] легкой цепи энтерокиназы человека, включающий последовательность, кодирующую отщепляемый N-концевой пептид, включающий гексагистидиновый кластер и последовательность узнавания энтерокиназы, и слитую с ним в рамке последовательность, кодирующую предшественник мутеина [C112S] легкой цепи энтерокиназы человека с неотщепляемым С-концевым гексагистидиновым кластером под контролем промотора, функционирующего в бактериальной клетке. Предложенное изобретение позволяет получать рекомбинантный мутеин [C112S] легкой цепи энтерокиназы человека с высоким выходом. 5 н. и 6 з.п. ф-лы, 5 ил., 1 табл., 6 пр.
Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения предшественника рекомбинантного фрагмента тканевого активатора плазминогена (ТАП) человека (ретеплазы) с использованием бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, трансформированной экспрессионной плазмидой, содержащей фрагмент ДНК, кодирующий предшественник рекомбинантного фрагмента тканевого активатора плазминогена (ТАП) человека (ретеплазы), включающий последовательность, кодирующую отщепляемый N-концевой пептид, включающий декагистидиновый кластер и слитую в рамке последовательность узнавания энтерокиназы, или фрагмент ДНК, кодирующий [-1]метионил-фрагмента ТАП человека (ретеплазы), под контролем промотора, функционирующего в указанной бактериальной клетке. Предложенное изобретение позволяет получать рекомбинантный фрагмент тканевого активатора плазминогена (ТАП) человека (ретеплазы) с высоким выходом. 4 н. и 6 з.п.ф-лы, 6 ил., 1 табл., 8 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии и генетической инженерии и представляет собой вектор для получения вектора для экспрессии в бактериальной клетке предшественника целевого рекомбинантного белка, слитого с N-концевым пептидом, содержащим декагистидиновый кластер и сайт узнавания протеиназой, по существу состоящий из участка инициации репликации pBR322 ori; гена репрессора лактозного оперона; бактериального промотора; области, кодирующей N-концевой лидерный пептид, содержащий декагистидиновый кластер и, необязательно, сайт узнавания протеиназой; участка клонирования (полилинкера); участка терминации транскрипции, функционирующего в бактериальной клетке; фрагмента, кодирующего негеномную пару токсин-антитоксин, при этом ген антитоксина ориентирован таким образом, что направление его транскрипции совпадает с направлением транскрипции целевого гена; гена, кодирующего бактериальный маркер селекции. Изобретение относится также к вектору для экспрессии в бактериальной клетке предшественника целевого рекомбинантного белка, слитого с N-концевым пептидом, бактерии, содержащей такой вектор, и способу получения рекомбинантного белка с использованием бактерии. Изобретение позволяет получить новый вектор с повышенной сегрегационной стабильностью для высокоэффективной экспрессии рекомбинантных белков со слитым в рамке N-концевым лидерным пептидом, содержащим декагистидиновый кластер и сайт узнавания протеиназой. 4 н. и 5 з.п. ф-лы, 12 ил, 1 табл., 4 пр.
Изобретение относится к биотехнологии и биофармацевтике
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к плазмидной ДНК pCID-PROC для экспрессии рекомбинантного протеина С человека, линии клеток яичника китайского хомячка DG-CID-PROC-1 и способу получения рекомбинантного протеина С человека
Изобретение относится к биотехнологии и биофармакологии и предоставляет штаммы гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus Sp2/0-BC/rhPC-4F10, Sp2/0-BC/rhPC-1C6, Sp2/0-BC/rhPC-3H6, - продуценты моноклональных антител, специфичных к протеину С человека
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению рекомбинантного фактора свертываемости крови VIII, и может быть использовано в медицине
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения рекомбинантного фактора свертываемости крови VIIa человека
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения рекомбинантного интерлейкина-11 (рИЛ-11) человека
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генной и белковой инженерии, и может быть использовано для получения делеционного варианта рекомбинантного тканевого фактора человека
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу получения рекомбинантного интерферона бета-1b человека
Изобретение относится к области биотехнологии и препаративной биохимии и может быть использовано в биофамакологии и медицине
Изобретение относится к области биотехнологии и касается получения белка фактора VII методом рекомбинантных ДНК
