Способ дифференциации антигенов на т-зависимые и т- независимые

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (i>3 003813

Союз Советскив

Сециалистическнк

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлено 200581 (21) 3290132/28-13 (Щ М. Кл.з

A 61 В 10/ОО с присоединением заявки Йо

Государственный комитет

СССР. но делам изобретений и открытий (23) Приоритет

Р31 УДК Ь 616,. 07 (088 ..8) Опубликовано 15.03.83. Бюллетень М 10

Дата опубликования описания 150383

И.Н ° Моргунов, Е.Г. Гаркавая и В.Г. Бордонос (12) Авторы изобретения

Ф

Ф

Киевский. ордена Трудового Красного Знамени медицинский институт (7! ) Заявитель (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ АНТИГЕНОВ

HA T-ЗАВИСИМЫЕ H T-НЕЗАВИСИМЫЕ

Изобретение относится к медицине, а именно иммунолргическим методам исследования.>

Известен способ дифференциации антигенов на Т-зависимые и T-независимые путем применения культуры клеток in vitro. Для этого используют чистую популяцию Т- или В-лимфоцитов и измеряют интенсивность синтеза ДНК-, в них по включению Нз тимидина (1).

Однако известный способ не обеспечивает достоверности получаемых результатов в связи со сложностью выделения чистых Т- и В-клеточных популяций лимфоцитов и их последующей идентификации.

Наиболее близким является способ дифференциации антигенов на Т-зависимые и Т-независимые путем введения антигена in vitro с последующим учетом результатов (2).

Однако известный способ является трудоемким, включающим в себя такие операции, как облучение, хирургическое вмешательство, трансплантацию лимфоидных клеток. Кроме того, применяемое в нем хирургическое вмеша-. тельство, а также облучение способствует инфицированию организма. Ин1

P фицирование и связанная с ним реакция воспаления организма искажают картину течения иммунологического ответа на введение изучаемого антигена, что затрудняет определение принадлежности его к Т-,зависимым или Т-независимым антигенам, а в ряде случаев исключает такую воэможность °

Цель изобретения - упрощение и ускорение способа.

Цель достигается тем, что при дифференциации антигенов на Т-зависимые и T-независимые путем введения антигена in vivo с последующим учетом результатов антиген вводят одновременно с лимфоидным нейлоном, полученным по методу Buегоugh в ин- тактный,.организм, из расчета 10100 мкг кейлона (г веса), определяют площадь периартериальных.лимфо- . идных фолликулов селезенки на 4-14 сутки после введения и по изменению площади фолликулов по сравнению с нормой дифференцируют Т-зависимые и.T-независимые антигены.

Пример 1. 20 мышей линии

Ba3b/с иммунизируют Т-независимым антигеном (эритроцитами барана)— контрольная группа. 12 мышам этой

1003813 же линии одновременно с иммунизацией вводят лимфоидный кейлон в дозе

10 мкг/г (Х опытная группа), 20 мышам одновременно с иммунизацией вво:дят лимфоидный кейлон в дозе

50 мкг/г (II опытная группа), а 12 мышам одновременно с иммунизацией вводят 100 мкг/г лимфоидного нейлона (III опытная группа) . На 4-14 сутки s гистологических срезах се-, лезенки измеряют площадь периартериальных лимфоидных фолликулов с помощью Вайбелевской решетки.

Контрольная группа: хорошо выра- ° жены крупные лифоидные фолликулы, вне фолликула располагаются лимфоидные скопления в виде отдельных островок. Опытйая группа: периартериальные лимфоидные фолликулы мелкие, зоны периартериальных лимфойдных фолликулов истощены.

Полученные результаты представлены в табл. Т (площадь периарте; риальных лимфоидных фолликулов в срезах селезенки при иммунизации

Т-зависимым антигеном (аэритроцитами барана) .

Иэ данных таблицы следует, что площадь периартериальных лимфоидных фолликулов на протяжении всего эксперимента в опытных группах была значительно меньше по сравнению с контрольной группой и имела достоверные различия.

Пример 2. 19 мышей линии

BaIb/с иммунизируют Т-независимым антигеном (липополисахаридом Е.

coIi) . 14 мышам одновременно с иммунизацией вводят лимфоидный кейлон в дозе 10 мкг/г (1 опытная группа).

19 мышам одновременно с иммунизацией вводят 50 мкг/г лимфоидного кейлона (II опытная группа) . 14 мышам одновременно с иммунизацией вводят лимфоидный кейлон в дозе 100 мкг/г (III опытная группа) . На 4-14 сутки измеряют площадь периартериальных лимфоидных фолликулов.

Контрольная группа: лимфоидные периартериальные фолликулы четко выражены. Опытная группа: лимфоидные периарте лальные фолликулы представляют собой компактные зоны, Полученные результаты представлены в табл. 2 (площадь периартериальных лимфоидных фолликулов в срезах селезенки при иммунизации Т-незавнсимым антигеном (липополисахаридом

Е. cori) .

Представленные данные указывают на то, что во все сроки наблюдения площадь периартериальных лимфоидиых фолликулов в опытных и конт рольной группах не имела достоверных различий.

Пример 3. 14 мпаей линии

ВаИз/с иммунизируют эритроцитами лошади (контрольная группа). 14 мышам одновременно с иммунизацией вводят лимфоидный кейлон в дозе

10 мкг/г (I опытная группа) . 14 мышам одновременно с иммунизацией вводят,лимфоидный кейлон в дозе

50 мкг/г (II опытная группа) . 14 мышам одновременно с иммунизацией вводят лимфоидный кейлон в дозе

100 мкг/г. Затем проводят исследования, как .и в вышеописаннйх приме10 рах.

Результаты исследований представ лены в табл. 3 (площадь периарте риальных лимфоидных фолликулов B срезах селезенки при иммунизации

15 эритроцитами лошади) .

Данные табл. 3 указывают на то, что площадь периартериальных лимфоидных фолликулов при иммунизации эритроцитами лошади в опыте и конт-20 роле не имеет достоверных различий.

На Т-зависимые антигены в основном реагируют Т-лимфоциты, а на

Т-независимые антигены — В-лимфоциты. Полученные результаты исследований показывают, что при иммунизации животных эритроцитами барана и использовании лимфоидного кейлона периартериальные лимфоидные фолликулы селезенки (Т-зоны) истощаются, -что позволяет сделать вывод о принадлежности эритроцитов барана к

T-зависимым антигенам. В случае иммунизации липополисахаридом Е. coEi и эритроцитами лошади с использованием лимфоидного кейлона периартериальные лимфоидные фолликулы (Т-эоны) опытной группы по сравнению с контрольной не истощаются, на основании чего можно сделать вывод о принадлежности этих антигенов

40 к T-независимым.

Оптимальным сроком для приготовления гистологических срезов с точки зрения достоверности получаемых результатов являются 6-е сутки эксперимента, а оптимальной дозой лимфоидного кейлона является 50 мкг/г веса животного. Экспериментальные данные опытной группы (табл. 1) полученные в этих условиях имеют достоверные различия по сравнению с контрольной группой (р (0,001), что указывает на высокую степень достоверности получаемых результатов.

Предложенный способ по сравнению с известным способом дифференциации антигенов, обеспечивает значительно более высокую достоверность получаемых результатов за счет исключения таких отрицательных факторов, как инфицирование и связанную с ним реакцию воспаления, искажающую картину иммунологического ответа органиэма. Кроме того, предлагаемый спо,соб исключает такие трудоемкие про65 цессы известного способа, как облу1003813

Дифференциация антигенов на Т-за висимые и Т-независимые позволяет идентифицировать огромное количество антигенов как природного, так и синтетического происхождения, что необходимо для понимания механизмов течения иммунного ответа на тот или ,иной антиген, а также для разработки схем его регуляции при вакцинации, как животных, так.и человека .

Таблица1 ченне, хирургическое вмешательство, трансплантацию лимфоидных клеток.

Предлагаемый способ дает также .существенный экономический эффект за счет уменьшения количества животных необходимых для эксперимента, уменьшения количества занятого персонала для выполнения эксперимента, а также за счет сокращения времени необходимого для исследований.

Время забоя животных, сут.

Число живот ных

Доза кейлона,, 4 мкг/г

M+m, р

Опыт

М, р

«Ф

1+m, р

М+в, р

Контрольный

21,02+1:25 16,72+0,76

15,8+0,55

10 12,06+0,8 16,0 1,38 12,5+1,02

L0,05, 12,3+1,3

L0,O5

С0 2

50 10, 35+1,8

9,7+1,2

С.О 02

Е0,01

L0,05

100 9,9+1,1 12,1+1,2

11,9 1,2

l0,O2

L0 01

LO,01

Таблица 2

Время забоя животных, сутки

Доза кейло на, мкг/г

Число животОпыт ных

М +

Мтр

М +

Контрольный 19

14,9+0,76 16,5+0,9 12,1 1,56 12,3+1,6

15,7т1,05 . 18,0+2,64 12,6 1,44 13,5+1,5

I 14

>0,5

>0,5

)0,5

>0,5

14,59+0,64 16,0+2,08 11,07+0,38 11,74+0,77

)0,5

17,0+2,0

>0,5"

>0,5

13,4 1, 28

>0,5

>0,5

12,3+2,0

>0,5

)0,5

II I 14 100 14,3+2) 3 .>0,5

23,9+2,9

14,712,4

l0,05

11,4+0,9

L0,01

11,8+1,7

LOi01

>vv3513

Таблица 3

Доза кейлона, мкг/г

Время забоя животных, сутки

Число животных

Опыт

М1р

Мтр

Mtu

Nip

23,4 1,3 20,8 3,1 23,1 0,64

Контрольный 14

23, 9 1, 23

I 14 10

20,9т1,23 24,9 1,88

25 p122i2 21i3+3 i9

>0,5

22,5 0,87

>0,5

>0,5

>0,5

22,7 1,0 19,7+2,4

23,6 2,1

>0,5

24,8+0,62

>0,5

>0,5

>0,5

21, 5+1, 34 22,8 2, 3 20, 7+1,7

100

>0,25

>0,5

>0,5

>0,5

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Редактор В. Ковтун Техред Е.Харитончнк Корректор Л. Вокшан

Заказ 1636/2 Тираж 711 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений н открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Способ дифференциации антигенов на Т-зависимые и Т-независимые путем введения антигена in viчо с последующим учетом результатов, о т" л и ч а ю шийся тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, антиген вводят одновременно с лимфоидным нейлонам из расчета 10-100 мкг кейлона (r веса), определяют площадь периартериальных лимфоидных фолликулов селезенки на

4-14 сутки после введения и по из1 менению площади фолликулов по сравнению с нормой дифференцируют Т-зависимые н T-независимые антигены.

Источники информацин, 30 принятые во внимание при экспертизе

1. Чередеев A.Н. Количественная и функциональная оценка Т- н В-систем иммунитета у человека. — В кн:

"Общие вопросы патологии", М., "Ме35 дицина", 1976, с. 145-147.

2. Петров Р.В. Иммунология и иммуногенетика. М., "Медицина", 1976, с. 98-99 (прототип).