Питательная среда для идентификации и межродовой и внутриродовой дифференциации бактерий @ - @
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ И МЕЖРОДОВОЙ И ВНУТРИРОДОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИЙ БАКТЕРИЙ PROTEUSPROViClENCiA , заключающаяся в том, что она содержит два слоя, при этом в верхнем слоев она содержит агар, Nad, Na (NH , тиосульфат натрия , В1,-триптофан, дрожжевой экстракт ГГ/ЧИ/П ГР.в ,- -... ..,-- i/J ,- jr.. ГД ------ I жидкий, жрожжевой экстракт сухой, воду, в нижнем слое - агар, NaCl, К 2. НРОд ,КН 2. РО4 глюкозу, пептон, мочевину, нейтральный красный, воду |при следующем количественном соотношении ингредиентов, мас.%: I Верхний слой: Агар0,5-0,9 Nad0,4-0,6 Na(N44.)HP04 0,08-1,2 Тиосульфат .йатрия0,05-0,15 DL-Триптофан 0;1-0,3 Дрожжевой экстракт жидкий 3,0-27,0 фожжевой экс0 ,2-0,4 тракт сухой Остальное Вода Нижний слой: .0,4-0,8 Агар Nad 0,4-0,6 0,06-0,14 0,04-0,08 KH,jPO 0,1-0,2 Глюкоза 0,05-0,15 Пептон 0,8-1,2 Мочевина Нейтральный : :л 0,002-0,01 красный Вода Остальное о. э: :л
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
ООФ
РЕСПУБЛИК ав Oil
МЮ С1201 04
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPHTHA
H АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21 ) 3347592/2.8-13 (22) 24 ° 08.81 (46) 15.08.83. Бюл. В 30 (72) r.Ï.Êàëèíà (71) Московский ордена Трудового
Красного Знамени научно-исследова,тельский институт гигиены им.Ф.Ф.Эрисмана (53) 576.8.093.1(088.8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР
9 610863, кл. С 12 Q 1/54, 1977.
2. Singer J. Culture of Entегоbacteriaceae.. 1. Detection oX urease
and indol in à single medium. American 4ои па1 of Climical Pathology, 1951, v.21 р. 987.
3. Chaw С. Clarke P. Biochemical
classificalion of Proteus and Providence Cultures. Journal General
Microbiol6gy.. 1955, v. 13, р. 155. (54) (57 ) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ИДЕНТИФЦКАЦИИ И МЕЖРОДОВОЙ И ВНУТРИРОДОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ БАКТЕРИЙ PROTEUSPROUiClENCiA, заключающаяся в том, что она содержит два слоя, при этом в верхнем слоев она содержит агар, NaCl< Na (NH)4HPO», тиосульфат натрия, Di-триптофаи, дрожжевой экстракт жидкий, .жрожжевой экстракт сухой, воду, в нижнем слое - агар, NaC1, К g НРО4 КН g РО4 глюкозу пептон ° мочевину, нейтральный красный воду при следующем количественном соотношении ингредиентов, мас.В:
Верхний слой:
Агар 0 5-0,9
NaC1 0,4-0,6
Na(NN4) НРО» 0,08-1,2
Тиосульфат .йатрия 0,05-0,15
ПЬ=Триптофан 0;1-0,3
Дрожжевой экстракт жидкий 3,0-27,0 ,Прожжевой экстракт сухой 0,2-0,4
Вода Остальное
Нижний слой
Агар,0,4-0,8
NaC1 0,4-0,6
К НРО» 0 06-0 14
КЙ PO. 0,04-0,08
Глюкоза 0,1-0,2
Пептон 0,05-0,15
Мочевина 0 8-1ю2
Нейтральный красный 0,002-0 01
Вода Остальное
3,0-27,0
0,4-0,8
0,4-0,6
0,06-0,14
0,04-0,08
0,1-0,2
0,05-0,15
0,08-1,2
Изобретение относится к микробиологии, в частности к санитарной микробиологии.
Известна питательная среда для индентификации грамотрицательных микроорганизмов, позволяющая одновременно выявлять шесть биохимических признаков (1).
Известна также питательная среда для определения уреазной активности и продукции индола (2).
Известна также питательная среда для одновременного определения фенилаланин-деаминазы и гидролиэа малоната натрия (3).
Однако известные среды не позволяют одновременно выявлять все биохимические признаки, необходимые для идентификации и межродовой и внутриродовой дифференциации бактерий Proteus-Ргоу1йепсХal.
Цель изобретения создание питательной среды для идентификации и межродовой и внутриродовой дифференциации бактерий Proteus-Providenciaf
Цель достигается тем, что создана питательная среда для идентификации и внутриродовой дифференциации бактерий Proteus-Providenciaeg заключающийся н том, что она содержит . два слоя, при этом в верхнем слое она содержит агар, NaC1, Na(NH4) НРО4 тиосульфат натрия, DL-триптофан, дрожжевой экстракт жидкий, дрожжевой экстракт сухой и воду, а в нижнем слоев — агар, NaC1 К НРО4, КН2РО, глюкозу, пептон, моченину, нейтральный красный и воду при следующем количественном соотношении ингредиентов, мас.Ъ:
Верхний, слой:
Агар 0,5-0,9
NaC1 О, 4-0,6
Na (NH4 ) НРО О, 08-1, 2
Тиосульфат натрия 0 05-0,15
DL-триптофан 0,1-0,3
Дрожжевой экстракт жидкий
Дрожжевой экстракт сухой 0,2-0,4
Вола Остальное Нижний слой
Агар
NaCl
К НРО4
КН 2РО4
Глюкоза
Пептон
Моченина
Нейтральный красный 0,002-0р01
Вода Остальное
П р и м е p .. Приготовление среды. Ингредиенты нижнего слоя, кр ме мочевины, стерилиэуют при л
20.
60 о0,5 атм 15 мин, прибавляют 50%-йый водный раствор мочевины (самостерилиэуется после 1-3 сут. выдерживания при комнатной температуре), разливают асептично по 3 мл в пробирки, охлаждают в вертикальном положении.
Ингредиенты верхнего слоя, кроме триптофана и тиосульфата натрия, стерилиэуют при 0,5 атм 15 мин, прибавляют типтофан и тиосульфат натрия, растворенные и прокипяченные в
-небольшом количестве воды, смешивают, разливают поверх нижнего слоя по б мл, охлаждают в .положении, при котором образуется столбик высотой, равной нысоте столбика нижнего слоя, и небольшая скошенная поверхность.
Пример. Использование среды и учет результатов. Посев свежей (суточной) культуры испытуемого микроба или колонии с чашки с питательной электинной средой осуществляют штрихом по скошенной поверхности и уколом в столбик до дна пробирки. После посева между пробкой и стенкой пробирки вставляют реактивную бумагу на индол, инкубируют при 35-37 С 18-20 ч. Учитывают в нижнем слое расщепление моченины (окрашивание в желтый или оранжевый цвет), образование газа н виде пузырьков и олще среды или разрывов среды (ферментация клюкоэы с образованием газа видом Провиденция алкалифациенс: представители рода Протеус газ в этих условиях не образуют за,счет интерференции ферментации глюкозы и уреазной активности); учитывают реакцию на индол (красное окрашивание реактивной бумаги). Затем осторожно по стенке пробирки, противоположной скошенной поверхности, наливают 0,5 мл раствора — хло- . рида железа (и ) (РеС13) 3,0; соляной кислоты 1,3, остальное - вода.
Положительная реакция на триптофан-деаминазу проявляется н первоначально оранжевом, а затем вишневекрасном окрашивании смеси конденсациооной жидкости с реактивом и подлежащего слоя среды, наиболее интенсивно у Пр. мирабилис, менее интенсивно у Пр. вульгарис и Провиденция и ввиде оранжевого окрашиванин остается у Пр. моргании и
Пр. реттгери. Отрицательная реакция у прочих представителей семейств энтеробактерий, вибрионов, псевдомонад - желтое окрашинание, почти незаметное в подлежащем слое среды.
Окрашивание наступает сразу после прибавления реактива, полной силы набирает после 2-3 ч пребывания при комнатной температуре. Для ускорения появления окрашивания можно по1035065 местить среду в термостат при 37 С на 1-1,5 ч. B это время, а при комнатной температуре через 3-4 ч в столбике, образованном верхним слоем, непосредственно под началом скошенной поверхности в результате диффузии хлорида железа в толщу arapa появляются вначале небольшие {точечные) участки черного цвета, переходящие в серпообразные полоски, переходящие через 4-5 ч в кольца значи- 1О тельной ширины.. Но уже по образованию первичной узкой черной полосы можно судить о продукции. H S.
Для выявления деаминазы и сероводорода используется моднцифнрован- 15
Ино- Адо- Иальзит нит тоза
Деа- УреИ S Индол Газ мина- аза 4эа
Микробы
Proteus
nurabilis
Proteus
vulgaris
Proteus
morganii
Proteus rett
geri
Providencia аlcalifaciens
Providencia
stuartii
Escherichia
cali
Citrobàctår
freundii
Еп1егоЬас1ек
aeragenes
Klebsiella
pheumonia е
Hafnia abvei
Edwardslalla
tarda ных тестов на группу Протеус Провиденция в бактериологических лабораториях при обнаружении представителей этой группы в окружающей среде и в целях усовершенствования, облегчения и ускорения диагностики заболеваний, вызываемых бактериями груп60 пы Протеус Провиденция.
ВНИИПИ Заказ 5759/23 Тираж 523 Подписное
Филиал ППП "Патент", г.ужгород,ул.Проектная,4
Сравнение результатов, полученных при посеве в предлагаемую среду, с посевом кондиционнъии способами, показывает их совпадение в
90-98%.
Предлагаемая среда позволяет испольэовать в одной емкости 5 основный реактив Singer volcani î содержащий мас.%: хлорид железа (fll) 13,0; соляная кнслотв 1 3 вода остальное, Для выявления продукции индола используется полоска бумаги, пропитанная модифицированным реактивом Gillies, мас.%: пара-диметиламинобензальдегид 7,7; ортофосфорная кислота 15,3; остальное изоамиловый спирт. Раствором пропитывают фильтровальную бумагу, подсушивают при комнатной температуре, нарезают на полоски 0,5-5,0 см.
Данные по идентификации и дифференциации приведены в таблице.
