Способ получения истинной ацетилхолинэстеразы
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИСТИННОЙ АЦЕТИЛХОЛИНЭСТЕРАЗЫ путем отделения эритроцитов крови, гемолизирования их, промывания полученной стромы эритроцитов и центрифугирования, отличающийся тем, что, с целью расширения сырьевой базы, упрощения способа и повышения активности целевого продукта, в качестве источника сырья используют кровь промысловых китов, при этом гемолиз и отмывание стромы эритроцитов проводят подкисленной уксусной кислотой дистиллированной водой при pH 4,5-5,0.
Изобретение относится к области биохимии, а именно к производству медикаментов из органических веществ животного происхождения. Известен способ получения истинной ацетилхолинэстеразы путем отделения эритроцитов крови, гемолизирования их, промывания полученной стромы эритроцитов и центрифугирования. Однако известный способ трудоемок, используют кровь дорогое и специфическое сырье, выход пpепарата по активности составляет 20% от лиофилизированной стромы. Целью изобретения является расширение сырьевой базы, упрощение способа и повышение активности целевого продукта. Цель достигается тем, что при осуществлении способа получения истинной ацетилхолинэстеразы путем отделения эритроцитов крови, гемолизирования их, промывания полученной стромы эритроцитов и центрифугирования, отличительной особенностью способа является то, что в качестве источника сырья используют кровь промысловых китов, при этом гемолиз и отмывание стромы эритроцитов проводят подкисленной уксусной кислотой, дистиллированной водой при рН 4,5 5,0. П р и м е р. В процессе разделки кита вскрывают крупные сосуды грудной полости и кровь собирают в емкости по 10 л. Емкости оставляют при комнатной температуре на 15 мин, осевшие эритроциты переносят в центрифужные пробирки, одновременно промывают и гемолизируют 10 объемами дистиллированной воды и центрифугируют при 300 об/мин 15 мин. Последний раз строму эритроцитов промывают фосфатным буфером (рН 8,0) оставляя 0,3 мл буфера в пробирках. Полученную концентрированную строму разливают в стерильные ампулы и лиофилизируют. Потеря активности истинной ацетилхолинэстеразы в процессе приготовления сухого сырца составляет 50% за счет отмытого гемолизата. От одного кита со средним весом 35 т получают 1,5-1,4 т крови, а 50-60% всей массы крови составляют эритроциты. Предлагаемый способ прост в осуществлении, не требует дорогостоящего или уникального оборудования. Совмещение операций (промывания стромы солевым раствором, гемолизирования и промывания водой) в один этап, а именно промывание 10-кратными объемами дистиллированной воды, значительно упрощает получение истинной ацетилхолинэстеразы. Промывание стромы фосфатным буфером в последний раз, при котором часть буфера остается с осадком стромы, повышает выход фермента при дальнейшей лиофилизации. Предлагаемый способ позволяет расширить сырьевую базу и прост в осуществлении.
Формула изобретения
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИСТИННОЙ АЦЕТИЛХОЛИНЭСТЕРАЗЫ путем отделения эритроцитов крови, гемолизирования их, промывания полученной стромы эритроцитов и центрифугирования, отличающийся тем, что, с целью расширения сырьевой базы, упрощения способа и повышения активности целевого продукта, в качестве источника сырья используют кровь промысловых китов, при этом гемолиз и отмывание стромы эритроцитов проводят подкисленной уксусной кислотой дистиллированной водой при pH 4,5-5,0.MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 10.09.1995
Номер и год публикации бюллетеня: 11-1998
Извещение опубликовано: 20.04.1998
