Штамм @ @ 20171-продуцент @ -галактозидазы

 

Шгамм Penicillium canescens 20171. (Всесоюзная коллекция промышленных культур микроорганизмов ВНИИгенетика, регистрационный номер ЦМПМ F- 178) - продуцент р-галактозидазы . (Л С

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

ИЧ

РЕСПУБЛИК (19) (10

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ;.

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВ,Ф

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21 ) 3400440/28-13 (22) 19.02.82 (46 ) 07.01. 84. Вюл. Р .1 (723 В.И.Билай, A.Т.Школьный, И.А.Элланская, T.A.Черемнова, Л.В.Югова, В.Ь.Дорохов и К.А.Калунянц (71) Всесоюзный научно-исследовательский биотехнический институт и Ордена Трудового Красного Знамени институт микробиологии и вирусологии им. Д.К.Заболотного (53) 577.15(088.8) (5á) 1. Авторское свидетельство сссР

9 727685, кл. С 12 N 15/00, 1977.

2. Авторское свидетельство СССР

9 480759, кл. C 12 И 15/00, 1975..

МЮ; С 12 N 15/001 С 12 3 9/38)

С 12 R 1/80

> (54) ШТАММ PENICILLIUM CANESCEHS .20171 — пРОДУЦБнт /3 -ГАЯАктОзиДАзы.. (57) l1lzaMM Penicillium canescens

20171 (Всесоюзная коллекция проььпаленных культур микроорганизмов

"ВНИИгенетика", регистрационный номер ЦМПМ p — 178) — продуцент р-галактозидазы.

1065476

Изобретение относится к ферментной отрасли микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм микроскопического гриба, который может быть использован для получения фермента р -галактозидаэы, применяемого в пищевой, молочной промлаленности и медицине для гидролиза молочного сахара — лактоэы.

Известен штамм Curvularia inaequalis 75, обеспечивающий активность g-галактозидаэы 2-4 ед/кп. (1 ), Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому эффекту является штамм Curvularia 1паеЧиalis 75 — продуцент р -га- 15 лактозидаэы, обеспечивакидий активность фермента 2-4 ед./мп. Штамм культивируют при 28 О С в течение

2-5 сут глубинным способом. При выращивании на .полусинтетической сре- 20 де с лактозой в культуральную жидкость выделяется 92 ед./л, 36 ед. остается в мицелии (2).

Однако. известный штамм обладает следующими существенными недостатками.

Во-первых, изменяет свойства при хранении, ослиэняется, не обеспечивает стабильной активности, требует для биосинтеза фермента очень узкий диапазон рН 2,9 — 4,3, не пригоден для выращивания в поверхностных условиях.

Кроме того, штамм обладает низкой активностью р -галактозидазы в культуральной жидкости, выделяет в

35 нее около 603 всего образующегося фермента, остальная активность остается внутри клетки.

Целью изобретения является новый

taTamn Penicillium canescens 20171 — 40 продуцент ф -галактозидазы.

Предлагаемый штамм микроскопического гриба Penicillium canescens

20171 выделен из почв Украинского государственного степного заповедни- 45 ка (Донецкая область ), подвергнут рассеву с выделением моноконидиальной культуры, многократным пассажем на агаризованном восьмибаллинговом сусле и на агаризованной среде Чапе- 50 ка с лактозой, а также хранению в течение 7 лет.

Морфологические признаки. Штамм,,атоксичный, быстрорастущий, характеризуется хорошим спороношением при выращивании на агаризованных

55 средах. Мицелий хорошо развит, септированный, бесцветный. Конидиеносцы 430-450 мкм длиной и 3,0-3,2 мкм в диаметре отходят от войлочного мицелия, оболочка четко шероховатая, 60

Кисточки двухъярусные, растопыренные, состоят из веточек (метуль), несущих мутовки фиалид. Имеются и одномутовчатые кисточки; Метули длиной 13— ,17 мкм и диаметром 2,0-2,8 мкм, сте- 65 ригмы (фиалиды) 7-8х2,3 мкм. Конидии 2,0-2,2 мкм в диаметре, шаровидные, в молодом возрасте с гладкой оболочкой, в старом — шероховатые, образуются в цепочках, соединяющихся в колонки; с возрастом колонки становятся растопыренными.

Культуральные признаки. Штамм хорошо растет на искусственных средах (сусло-агаре, картофельно-глюкозном агаре, картофельном агаре) и синтетических агариэованных средах (среда Чапека, Сабуро, РоленаТома, агариэованной среде с лактозой).

На среде Чапека колонии войлочнопушистые, дымчато-зеленовато-серые, с обратной стороны желтовато-оранжевого цвета, на 12-14-й день приобретают темно-коричневый тон.

Наблюдается следующий линейный рост колоний на агариэованных средах по дням.

Среда Чапека: 5-й день — 30 мм, 10-й день — 45 мм; сусло-агаровая среда: 5-й день — 45 мм, 10-й день

68 мм; среда Ролена-Тома: 5-й день

40 мм, 10-й день — 58 мм; картофельно-глюкозная среда: 5-й день

38 мм, 10-й день — ; среда Сабуро: 5-,й день — 36 мм, 10-й день

56 мм; агаризованная среда с лактозой: 5-й день — 35 мм, 10-й день

62 мм.

На отрубях растет хорошо.

Отношение к углеродному питанию: усваивает лактозу, сахарозу, глюкозу, галактоэу, мальтоэу, фруктозу, арабинозу, крахмал, инулин, сорбит, маннит и др.; этанол и метанол слабо.

Отношение к азотному питанию: хорошо усваивает нитратный, нитритный азот, лучше аммонийный;.иэ органических источников аэoTа ассимилирует пептой, мочевину, кукурузный экстракт и др.

Отношение к кислороду: облигатный аэроб.

Отношение к температуре: меэофил, оптимальная температура роста 28

30 С.

Отношение к кислотности среды: растет в широких пределах рН 2,0

9,0.

Штамм Penicillium canescens 20171 выращивали на среде прототипа, содержащей, г/л: лактоэу 30, НН+БОэ 3, К2НРО4 1, MgSOy ° 7H20 0,5, КС1 0,5, кукурузный экстракт 10 мп/л; с начальным рН среды 4,1 — 4,3 в аэробных условиях при 28 С в течение

66-70 ч, активность р -галактозидазы в культуральйой жидкости составила

0,56 ед./мп, активность в мицелии не превышает 2% от активности в культуральной жидкости.

1065476

Составитель E.Âîðoáüåâà

Редактор T. Кугрышева Техред Т. Фанта Корректор А, Тяск, Заказ 11009/31 Тираж 525 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская .наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

При вырацив анин Pc n i c i ll i um c anescens 20171 на комплексных средах, содержа цих соевуЮ муку, активность

9-галактозидаэы в культуральной жидкости достигает 18-20 ед./мл, Проверкой, проведенной в течение года, установлено,.что при хранении и пересевах уровень ферментативной активности Penicillium cancscens

20171 не снижается.

Таким образом, выделенный новый штамм по сравнению с прототипом об1 ладает повышенной способностью к биосннтеэу целевого продукта й-галактозидазы, устойчивым ростом в широком диапазоне начальной кислотности среды (рН 2-9), пригодностью для.поверхностного культивирования.

Микроскопический гриб Penicillium

canescens 20171 представляет собой новый штамм — продуцент ф-галактозидады со стойкими морфологическими и, биохимическими признаками и свойст вами .