Способ получения эритроцитарного диагностикума для выявления антител к @ @ типа " @
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭИПТОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К Haemophiius influenzae ,ТИПА В путем сенся&шизащш эритроците сенситином, отличающийся тем, что, с целью повышения чувсгвятелыюстя я .стабильности препарата-, в качестве сенситяяа используют капсульный антиген E.coli klOO, перекрестно реапфующий с Haemophiius influenzae типа В и получеш1Ь1й путем обработки ВОЩ1СГО экстракта культуры врзрас таюпдами концентрациякп тримютилцБтюпммония бромистого и натрия хлористого.
СОЮЭ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (19) (И) эцио A 61 К 39102
ГОСУДАЕСТВЕННЫй HOMHTET CCCP
По ДЕЛАМ ИЭОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTHA
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
I (2l) 3510480/28 — 13 (22) 09.11.82 (46) 150284. Бюл. Р 6 (72) Л. А. Левина, К. Г. Каверина и И. Я. Мо(71). Московский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И. И. Мечнико.-. (53) 615.373 (088;8) (56) 1. Порубнновская Н. М., Амелина И.П., Монахова С. И. Модификация реакции пассивной гемагглютинацни для выявления антител к . капсульному полнсаяариду Н. inf1uenzae типа
"В". — "Лаб.дело", 1977, 8, 494-496. (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСГИКУМА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К Haemophi1us Ж1иепхае
ТИПА "В" путем сенсибилиэации эритроцитов сенситнном, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствителыюсти и, стабильности препарата; в качестве сенситииа используют капсульный аитиген Е.col i К100, перекрестно реагирувлций с НааторЬИма
Мtuenrae типа "В" и полученный путем обработки водного экстракта культуры врэрастающими концентрациями триметилцетиламмония бромистого и натрия хлористого.
107
Составитель П. Бонарцев
Техред Ж.Кастелевич
Корректор М. Шарощи.
Редактор Т. Митейко
Заказ 243/2
Подписное
Тираж 688
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и отирытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП "Патен1", г. Ужгород, ул. Проектная, 4
Изобретение относятся к медицине, а именно к способам серологической диагностики инфекционных заболеваний.
Известен способ получения эритроцитарного диагностикума для выявления антител Haemo—
phi1us п1luenzae типа ".В", в котором в качестве сенситина для эрнтроцитов используют лизаты культур Haemophi lus тЧ1иеп ае типа "В", полученные в результате действия додецилсульфата с последующим освобождением от белков 10 путем многократной обработки смесью хлороформ — амиловый спирт, очисткой активированным утлем; осаждением спиртом и обработкой ферментом ДНК-азой (1 ), Однако данный способ недостаточно чувст- 15 вителен и характеризуется нестабильностью получаемых реагентов.
Целью изобретения является повышен. ие чувствительности и стабильности эритроцитарного диагностнкума. 20
Указанная цель достигается тем, что соглас-но способу получения эритроцитарного диагнос-. тикума для выявления антител к Haemophilus
ЬИаеп ае типа "В" путем сенсибилизации эритроцитов сенситнном, в качестве сенситина ис- 25 . пользуют капсульный антиген Е.coli К100, перекрестно реагирующий с Haemophi lus influenzae типа "В" и полученный путем обработки водного экстракта культуры возрастающими концентрациями триметилцетиламмония бромистого и 30 натрия хлористого.
Способ осуществляется следующим образом.
Культивируют Е.coli K100 на коммерческих агаровых средах, Затем получают водные экстракты культур. После чего их обрабатывают триметтптцетиламмонием бромистым и натрием хло35 ристым. Полученным сенситином мнсибилизируют. эритроциты.
П р и и е р. Взвесь 20-часовой атаровой культуры Е.со l i К100 смывают дистиллированной водой, помещают в аппарат для встряхивания на
1 ч и центрифутируют при 5 тыс. об/мин
20 мин (схема 1).
К надосадочной жидкости добавляют до 0,1% триметилцетиламмония бромистого (0,1 мл
2863 ъ
10%-ного раствора на 100 мл жидкости), о
Сформировавшийся в течение 2 ч при 4 С осадок отделяют, К надосадочной жидкости, полученной после центрифугирования при
5 тыс, об/мин 20 мин, добавляют до 0,01 М. триметилцетиламмония бромида (3,65 мл 10%-ного раствора на 100 мл жидкости). Сформировавшийся в течение 2 ч при.4 С осадок отделяют центрифутированием нри 5 тыс. об/мин и ресуо пендируют в 0,1 и .растворе NaC1 и вновь центрифугируют при тех же условиях. Осадок ресуспендируют в 2 М растворе NaC1, центрифугируют, осадок отбрасывают, а к надосадку добавляют этанол в соотношении 1:2. Осадок формируется
I о
18 — 20 ч, при 4 С. 11олученный антигенный ком плекс (КПС) отделяют центрифутированием, раст растворяют в 50 мл дистиллированной воды и ! лиофильно высушивают.
Сенсибилизацию формалиниэированных эпитроцитов барабана (или кур) проводят при 37"С в течение 2 ч. Доза КПС Е.coli К100 составляет 50 мкг на 1 мл 5% эритроцитов. После, трехкратного отмывания физиологическим раст вором (центрифутирование при 1000 об/мин ., 10 мин) надосадочную жидкость удаляют и добавляют 0,85% NaCI. с 1%-ного нейтрального формалина (рН вЂ” 7,2) так, чтобы получить
2,5%-ну@ взвесь сенсибклизированных эритроцитов. Контроль проведенной сенсибилизации проводят в РПГА с применением стандартной аггяютинирующей сыворотки к Haemophilus, influen—
zae тина "В" и Е.coli K100, Полученный препарат KIIC Е.col i K100 обладает высокой антигенной сцецифичностью и активностью. Наиболее высокие титры гемагглютининов выявлены в опытах с диагностикумом из КПС Е.coli
К100. С диагностикумом КПС Е.coli К 100 в 25 сыворотках выявлено наличие антител к Haemophilus influenzae типа "В" с диагностическим титром 1:1280 и выше. Для выявления аналогичного количества положительных сывороток (26) в опытах с диагностикумом из Haemophilus influenzae типа
"В" (прототип в качестве диагностического приходилось считать титр 1:20 и выше.
