Способ определения вирулентности микроорганизмов

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИРУЛЕНТНОСТИ ШКРрОРГАНИЗМОВ путем внутрибрюшинного заражения лабораторных животных суспензией исследуемых микроорганизмов отличающийс я тем, 4TOj с целью ускорения способа, в крови животных измеряют уровень гликемии через промежуток времени, равный 15 - 19% от времени настзтления животных, и определяют вирулентность по снижению уровня гликемии по сравнению с нормой .

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

y g С 12 No1/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫПФ (21) 3362822/28"13 (22) 04. 12. 81 (46) 30.04.84.,Бюл. У 16 (72) Я.А.Соколов, С.И.Елкина, .Е.А.Родионычев, Л.Г.Ермакова и Е.П.Симакина (71) Московский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова (53) 616-093/098(088.8) (56) 1. А.С.Лабинская.Микробиология с техникой микробиологических исследований. М., "Медицина", 1978, с. 108 (прототип).

„.Я0;„108 115 A (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИРУЛЕНТНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ путем внутри брюшинного заражения лабораторных животных суспензией исследуемых микроорганизмов, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью ускорения способа, в крови животных измеряют уровень гликемии через промежуток времени, равный 15 — 19X от времени наступления гибели животных, и оп- . ределяют вирулентность по снижению уровня гликемии по сравнению с нормой.

1 1089

Изобретение относится к медицине и касается способа определения виру\ лентности микроорганизмов.

Известен способ определения вирулентности микроорганизмов путем 5 внутрибрюшинного заражения лабораторных животных суспензией исследуемых микроорганизмов (1 1.

Однако известный способ длителен в осуществлении.

Цель изобретения — ускорение способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения вирулентности микроорганизмов путем внутрибрюшинного заражения лабораторных животных суспензий исследуемых микроорганизмов, в крови животных измеряют уровень гликемии через fzpoMeжуток времени, равный 15 — 19X от времечки наступления гибели животных, и определяют вирулентность по снижению уровня гликемии по сравнению с нормой.

Пример 1.. Определение вирулентности Streptococcus pneumoniae.

Готовят серию разведений микроорганизма Str. npeumoniae — 2 102, 2 103 " 104 2, 10 5 микробных тел/мл физиологического раствора. Пяти груп-30 пам мышей вводят внутрибрюшинно по

0 5 мп взвеси микробов в соответствующем разведении, а контрольной группе вводят физраствор. Спустя

1/6 срока, принятого при известном исследовании вирулентности этого микроорганизма — 6 дней, что составляет 24 ч, у животных забирают по

0,05 мм крови и измеряют в пробах уровень гликемии. По уровню гликемии 40 рассчитывают ЛД О. Расчет ЛД 5О осуществляют следующим образом. 50Х-ный уровень гликемии достигается через сутки после заражения дозой 8.10 микробных -45 тел/мл ЛД 5п = 0,05 (8 .10 1 = 4,0 х10 микробных тел. Приемы определения ЛД о дают величину 6 .10 З микробных тел. Различие в оценке составляет 207 и находится в пределах 50 ошибки известного способа определения ЛД О. Величина коэффициента кор. реляции между выживаемостью животных и уровнем гликемии составляет

+ 0,65 (р (0,01).

Пример 2. Определение вирулентности Neisseria meningitidis.

Готовят разведения культуры 2

<10, 2 10 микробных тел/мл муции

3, 5

50 мг/мл в физиологическим растворе.

Мышам вводят по 0,5 мл взвеси микробов в соответствующем разведении, а контрольной группе вводят физраствор с муцином. Спустя 1/6 срока от срока, принятого при известном определении вирулентности данного микроорганизма — 5 дней, т.е. через

20 ч после заражения, определяют в пробах крови уровень гликемии.

Пересчет ЛД 5 из результатов исследования гликемии дает значение

4,5"10 микробных тел, а прямое

2 определение ЛД5О по смертности—

3. 16 -10 микробных тел.

Пример <3. Определение вирулентности Salmonella typbymurium.

Готовят серию разведений микроорганизмов — 2 ° 10 ", 2 ° 10 микробных тел/мл физиологического раствора.

Мышам вводят па 0,5 мл взвеси микробов в соответствующем разведении контрольной группе вводят физраствор.

Через 3,5 сут (17Ж от срока, принятого при известном исследова-нии вирулентности данного микроорганизма — 21 день), забирают кровь и определяют уровень гликемии.

Пересчет SIg 50 Дает значение

4,0 -10 микробных тел,прямое опре4 деление по смертности — 4 10 ;

В таблице дано сравнение уровня гликемии у мьппей с их смертностью и данные по уровню гликемии по примерам 1 — 3.

Из данных таблицы следует, что при получении практически равнозначных результатов по вирулентности, предлагаемый способ позволяет получать ответ в более ранние сроки.

Использование изобретения позволяет ускорить сроки определения в

6 раз, при этом повысить точность в 2 раза (ошиока анализа по известному способу 257, предлагаемому способу 12X). Кроме того, предлагаемым способом можно исследовать опухолевые клетки и панкреатотропные агенты.

1089115

1. Streprococcus

pneumoniae

6 сут

+ 20X

1 сут .

1-10 микробных тел/мл

100

71,4

28,6

10

Контроль

2. Neisseria

meningitidis

+ 17,5Х

20 ч

5 сут

21+ 5

28+ 4,3

100

100

6,6

54+ 7

10

Контроль (51 муции) 81+ 6,9

3. Salmonella

typhymurim

21 день 3, 5 дня

100 38,4+ 5,7

10 60

10 33

61,5+ 7

1 10

10 77,9+ 4

10.

Контроль

ВНИИПИ Заказ 2870/22 Тираа 522 Подписное

Филиал ППП "Патент" ° r.Óàãîðîä, ул.Проектная, 4

1-10 то же

1 10

1 ° 10

36,6+ 7,5

46,5+ 8,3

71,1+ 6,2

73,5+ 5

79,6+ 5,8