Способ окрашивания нейронов

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

G01N1/31 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

СПОСОБ ОКРАШИВАНИЯ НЕЙРОНОВ при люминесцентном исследовании ткани мозга с помощью пероксидазы хрена, отличающийся тем, что, с целью дифференци aii.HH окраски структур нейрона, дополнительно проводят окрашиванием бис-бензкмиде на фосфатном буфере при рН 2,0-2,5 в течение 15-30 с.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

1104376 A (19) (11) 3(G 01 N 1/28

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР пО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3369509/28-13 (22) 11.12.81 (46) 23.07.84. Бюл. № 27 (72) В. А. Майский (71) Ордена Трудового Красного Знамени институт физиологии им. А. А. Богомольца (53) 615.777/779 (088.8) (56) 1. Neurosci. Lett., 1979, ч. 12, № 5, р. 235 вЂ” 240.

2. «Histochem. and Cytochem.», 1966, ч. 14, № 2, р. 291 вЂ” 302. (54) (57) СПОСОБ ОКРАШИВАНИЯ НЕЙ

POHOB при люминесцентном исследовании ткани мозга с помощью пероксидазы хрена, отличающийся тем, что, с целью дифференци ации окраски структур нейрона, дополнительно проводят окрашивание з бис-бензимиде на фосфатном буфере при рН 2,0 вЂ” 2,5 в течение !5 вЂ” 30 с.

СФ 3

СЬ

-1

Изобретение относится к медицине.

Известен способ окрашивания нейронов с помощью люминесцентного красителя бисбензи мида (1).

Наиболее близким к предлагаемому техническому решению является способ окраши вания нейронов при люминесцентном исследовании ткани мозга с помощью пероксидазы хрена (2) .

Однако дифференциацию окраски структур нейрона невозможно проводить указанными способами, поскольку свечение окрашенных флюорохромами структур нейронов слабое, аксонный транспорт красителей осуществляется на короткие расстояния в мозге животных.

Целью изобретения является дифференциация окраски структур нейрона.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу окрашивания нейронов при люминесцентном исследовании ткани мозга с помощью пероксидазы хрена дополнительно проводят окрашивание в бис-бензимиде на фосфатном буфере при рН 2,0вЂ”

25 в течение 15 вЂ” 30 с.

Способ осуществляется следующим образом.

Из фиксированной в глютаральдегиде и формалине ткани мозга изготавливают на замораживающем микротоме срезы толщиной 20 вЂ” 30 мкм. Производится гистохимичес кая окраска срезов для выявления пероксидазноактивных структур. Срезы после короткой промывки в холодном фосфатном буфере (0,1 М; рН 7,2) с добавлением 10 /о сахарозы переносят на 15 вЂ” 30 с в подкисленный соляной кислотой (до рН 2,0 вЂ” 2,5) водный раствор натрия фосфорнокислого одно104376

2 замегценного (0,1 М), который также содержит 1Оо/р сахарозы. Без промывки срезы натягивают на предметные стекла и высушивают. Производится обычными методами обезвоживание, просветление срезов и заключение их на предметных стеклах в нелюминесцирующую среду (эпон вЂ” 812).

Орииер. Из фиксированной в глютара1bдегиде и формалине ткани мозга изготавливают на замораживающем микротсме сре10 зы толщиной 20 мкм. Производится гистохимическая окраска срезов для выявления пероксидазноактивных структур (2). Срезы после короткой промывки в холодном фос фатном буфере (0,1 М; рН 7,2) с добавлением 10 /0 сахарозы переносят на 15 с в под15 кисленный соляной кислотой до рН 2,0 водный раствор натрия фосфорнокислого однозамешенного (0,1 М), который также содержит 10о/< сахарозы. Без промывки срезы натягивают на предметные стекла и высушивают, обезвоживают, просветляют срезы и заключают их на предметных стеклах в нелюминесцирующую среду (эпон вЂ” 812) .

Наблюдение меченных пероксидазой хрена и флюорохромом клеток производится в темном поле и свете люминесценции. Одновременное двухцветное свечение клетоквЂ” золотистое (цитоплазмы) и зеленое (ядра) вЂ” указывает на двойное их мечение ферментом и люминесцентным красителем.

Такой же эффект налюдают в случае, если используют фосфатный буфер при рН

2,5 и в течение 30 с.

Предлагаемый способ по сравнению с известными способами окраски нейронов флюорохромами обладает большей чувствительностью и позволяет дифференцировать структуры нейрона.

Составитель В. Фролова

Редактор Н.Лазаренко Техред И. Верес Корректор С. Черни

Заказ 5010/29 Тираж 823 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4