Способ определения концентрации гемоглобина

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ГЕМОГЛОБИНА путем инкубации исследуемого раствора с красителем с последующим спектрофотометрированием , отличающийся тем, что, с целью определения концентрации гемоглобина в замороженных растворах , в качестве красителя используют акридиновый желтый в конечной концентрации 10 - М.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

3f59 0 01 М 33/48

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬП ИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ н втог ском свидетельств (21) 3370480/28-13 (22) 15. 12. 81 (46 ) 15. 06. 84. Бюл. М 22 (72 ) M. М. Лоевский, А. М. Грек и Б. А. Коптелов (71) Институт проблем криобиапогии и криомедицины AH УССР (53) 612.111. 11(088 ° 8) (56) 1. Beutler Е.Н. Red cell metabolism. А manual of biochemical

methods. Creen 4 Stratton. И.-Х.—

S.-Fr.-London. 1975, р. 11-12 (прототип). (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ГЕМОГЛОБИНА путем инкубации исследуемого раствора с красителем с последующим спектрофотометрированием, отличающийся тем, что, с целью определения концентрации гемоглобина в замороженных растворах, в качестве красителя используют акридиновый желтый в конечной концентрации 10 — 10 7 M.

1097951

Условия опыта

Темпера- Интентура, сив C ность, отн. ед.

1,0

-30

Вода + гемоглобин

Вода + акридиновый желтый .

43,7

-30

Вода + акридиновый желтый + гемоглобин

15.мг Ъ

-30

29,1

Вода + акридиновый желтый + гемоглобин

30 мг Ъ

-30

24,0

Вода + акридиновый желтый + гемоглобин б0 мг Ъ

-30

10. 0

: Составитель Е.Житникова

Редактор Т.Портная Техред С.Мигунова Корректор А.Тяско

Заказ 4200/37 Тираж 823 Подписное

BHHHIIH Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4

Изобретение относится к области медицины и криобиохимии и может найти применение при изучении процессов замораживания — оттаивания, консервации клеток крови, в трансфузиологии, пищевой и мясной промышленности. 5

Известен способ определения концентрации гемоглобина путем инкубации исследуемого раствора с красите лем с последующим спектрофотометрированием Е1 3. 10

Недостатком этого способа является то, что он не позволяет определять гемоглобин непосредственно в замороженных растворах, трудоемок, не позволяет определять концентрацию re- 15 моглобина ниже 2 мг Ъ. Кроме этого, в данном способе используются дефицитные реактивы и сильно ядовитые вещества.

Цель изобретения - определение 70 концентрации гемоглобина в замороженных растворах.

Поставленная цель достигается согласно способу определения концентрации. гемоглобина путем инкубации исследуемого раствора с красителем с последующим спектрофотометрированием, причем в качестве красителя используют акридиновый желтый в конечной концентрации 10-.6 и 10 М.

Способ осуществляют следующим образом.

В исследуемый раствор вводят краситель акридиновый желтый в конечной концентрации 10 - 10 М, затем инкубируют при комнатной температуре в течение 2-3 мин, после чего замораживают и определяют интенсивность флуоресценсии акридинового желтого при длине волны возбуждения . Аэ †-447 1 нм и максимуме длины волны флуоресценции Л, = 510+1 нм.

Интенсивность флуоресценсии акридино- вого желтого находится в обратной зависимости от количества гемоглобина. 45

П р имер 1. К 30 мл водного раствора гемоглобина добавляют акридиновый желтый в конечной коццентра" ции 5 -10. M. Пробу инкубируют 2 мин при комнатной температуре. После этого раствор замораживают в парах жидкого азота до температуры -30 С; Интенсивность флуоресценции измеряют при длине волны возбуждения Я =447 нм и максимуме длины волны флуоресценции В ф =510нм и по калибровочному графику определяют количество гемоглобина в замороженном образце.

Полученные данные приведены в таблице.

Из приведенных данных видно, что применение красителя акридинового желтого позволяет определять количество гемоглобина в замороженном растворе.

Кроме этого способ прост в исполнении и не требует дорогостоящих реактивов.