Способ получения желудочного сока

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЖЕЛУДОЧНОГО СОКА путем введения трубки в полость желудка и выв,едение сока, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и обеспечения чибтоты желудочного сока, через трубку вводят мелкопористый сефадекс или молселект, выдерживают в желудке, извлекают его из желудка , после чего отделяют желудочный сок от сефадекса или молселекта .

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

Оз,ввввв

РЕСПУБЛИК

„SU.„10453

y g А 61 К 31/715

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ в JIRtopcNoNIY саидпаввтвв

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И 0THP6fAO (21) 3578801/30-15

:(22) 08..04.83 (46) 30.08.84. Бюл. В 32 (72) И.АвФранков и Т.Н.Соколова (i1) Витебский государственный медицинский институт (53) 612.02(088.8) (56) l. Gastroentегоlogy, 1945, 5, Ф 1, с. 43-61. (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИИ ЖЕЛУДОЧНОГО СОКА путем введения трубки в полость жепудка и выведение сока, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и обеспечения чистоты желудочного сока, череэ трубку вводят мелкопористый сефадекс или молселект, выдерживают в жепудке, иэвлекают его из желудка, после чего отделяют желудоч- . ный сок от сефадекса ипи молселекта.

1 11)

Изобретение относится к способам сбора биологических жидкостей, трудной доступных для получения обычными способами, в частности к способам получения пищеварительных соков у .мелких животных, и может быть использовано в космической биологии при изучении секреторной функции желез желудочно-кишечного тракта, в ветеринарии. исследовании секреторной функции желудка у мелких животных, в формации при проведении биологической стандартизации выпускаемых фармацевтической промипленностью веществ, действуиицих на секреторную функцию желудка, в токсикологии, например, при оценке действия на секрецию пищеварительного сока ннсектицидов и других ядохимикатов, используемых в сельском хозяйстве, при выполнении научно-исследовательских работ в различных областях (биохимии, физиологии, патофизиологии, фармакологии ), где необходимо получать из желудка мелких животных пищеварительный сок.

Известны способы получения пищеварительного сока из желудка мелких животных, которые рассчитаны на сбор пищеварительного сока в полости желудка (способ Шея ). При этом создают условия, которые затрудняют эвакуацию пищеварительного сока из желудка в кишечник. Таким образом добиваются накопления сока в полости желудка. Для этого пилорус или двенадцатиперстную кишку перевязывают лигатурой, которая сдавливает просвет желудочно-кишечного тракта и тем самым предотвращает эвакуацию содержимого желудка в кишечник. Через определенное время после наложения хирургическим путем лигатуры сок, скопившийся в полости желудка, извлекают и подвергают исследованию () ).

Недостатками известных способов является то, что животным вводят наркотические вещества и подвергают хирургической операции(разрезают кожу, подкожную клетчатку, мышцы вентральной стенки живота и т.д.), через разрез в стенке живота извлекают из брюшной полости животного. желудок и начальный конец двенадцатиперстной кишки. Кроме того, накладывают лигатуру на границе пилоруса и двенадцатиперстной кишки, что неиз0453 бежно травмирует стенку пищеварительного канала, нарушает кровоснабжение и иннервацию желудка. При этом сбор сока ведут в силу необходимости в раннем послеоперационном периоде, когда животные еще находятся под воздействием остаточных количеств наркотического вещества и испытывают боли, связанные с травмой тканей стенки живота и сдавливанием стенки желудка и двенадцатиперстной кишки наложенной лигатурой.

Все это искажает работу нейрогуморальных механизмов, регулирующих секрецию пищеварительного сока, вследствие чего меняется характер секции сока и его состав.

Эти искажения у некоторых живот- . ных настолько велики, что получить пищеварительный сок таким путем иногда вообще не удается.

40.

55

Целью изобретения является упрощение способа и обеспечение чистоты желудочного. сока.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения, желудочного сока путем введения трубки в полость желудка и выведения сока, через трубку вводят мелкопористый сефадекс или молселект, выдерживают в желудке, извлекают его из желудка, после чего отделяют желудочный сок от сефадекса или молселект а.

Пример 1. Получение пищеварительного сока из желудка мыши и определение его протеолитической активности.

Для введения сефадекса в полость желудка мыши использовапи прозрачную хлорвиниловую трубочку с внешним диаметром 2,5 мм, внутренним 2 мм и длиной 120 мм. Один конец этой трубочки срезали под углом 45О. Трубочку заполняли сефадексом Г-50, оставив свободным 10 мм со стороны срезанного конца.

Мышь весом 20 r положили на спину, удерживая ее за складку кожи на голове и хвост.

Через пищевод в полость желудка ввели срезанный конец трубочки, предварительно заполненной сефадексом.

Свободный конец трубочки состыковали со шприцем емкостью ) мл, с помощью кбторого порошок сефадекса, находящийся в трубоке, осторожно протолкнули в полость желудка, после чего мышь поместили в обычную клетку.

1110453

15

30

40

50

Через 2,5 ч из полости желудка из-. влекали образовавшийся гель сефадекса, содержащий выделившийся за это время пищеварительный сок.

Гель поместили в мерную пробирку и добавили 2 мп воды (У ). После тщательного перемешивания извлеченного геля с добавленной водой смесь оставили отстаиваться на 15 мин.

После отстаивания измерили объем образовавшегося геля сефадексом и объем надосадочной жидкости. При этом оказалось, что гель сефадекса занимает объем 0,5 мп (У ), а слой надосадочной жидкости занимает объ— ем(У ) 1,7 мп. Для определения

У и Уз, т.е. объема жидкости(У ), который поглощается 1 г сухого сефадекса используемой марки при набухании 2,5 ч и последующего отстаивания 15 мин, и объема геля (У р) который образуется из 1 г сухого сефадекса, проделали следуюший опыт.

1 г сухого сефадекса той же марки, которая использовалась и для получения сока, смешали с избытком О, 1 N раствора HCI и через 2,5 ч набухания взвесь тщательно перемешали.

После этого взвесь оставили отстаиваться 15 мин, т.е. на время, в течение которого отстаивалась и взвесь сефадекса, извлеченного из полости желудка. При этом оказалось, что

1 г использовавшегося сефадекса после набухания в течение 2,5 ч при наличии достаточного количества жидкости и последующего отстаивания 15

15 мин поглощает 10,8 мп жидкости (У ), а образующийся при этом гель занимает объем 1 1,4 мл (У ) °

Пользуясь формулой, определили, что из полости желудка, мыши извлекли у1 у2 О 5 .10,8 — — --/z

У / У

У 11,4

/2 — 1,7/ = 0,17 мп.

Для определения протеолитической активности из влеченного сока е го пр едварительно развели в 40 раз. При этом к смеси, содержащей сок, сефадекс и воду, добавили еще такое количество воды, которое необходимо для того, чтобы в итоге получить указанное разведение сока.

После тщательного перемешивания сефадекс отделили центрифугированием, а надосадочную жидкость, которая и представляла собой извлеченный из желудка мыши пищеварительный сок, разведенный в 40 раз, использовали для определения протеолитической активности по Ансену. При этом 0,1 мл надосадочной жидкости добавили к

0,9 мл цитратного буфера с рН 1,7, затем к этой смеси добавили I мп. раствора гемоглобина и смесь инкубировали в ультратермостате при

37 С 1 ч. После этого к инкубационной смеси добавляли 2 мп 5Ж-ного раствора ТХУ и через 15 мин содержимое пробирок профильтровали.

Фильтрат спектрофотометрировали при 280 нм против контроля. Протеолитическую активность выражали в

1 - 2во

Таким образом, предлагаемым способом из желудка мыши получили

0„17 мл пищеварительного сока, вы. делившегося за 2,5 ч., и определили

его протеолитическую активность, которая оказалась равной 0,28 °

Пример 2. Получение пищеварительного сока из желудка крысы и определение его протеолитической активности, рН и титрационной кислотности.

Для введения сефадекса в полость желудка крысы использовали прозрачную хлорвиниловую трубочку с внутренним диаметром 2,5 мм, наружным 3 мм и длиной 250 мм.

Эту трубочку заполнили сефадексом Г-50, который ввели крысе весом

150 г в полость желудка. Крысу после введения сефадекса содержали в обычной клетке.

Через 2,5 ч из полости желудка извлекли образовавшийся гель;

Опустив электроды рН-метра прямо в этот гель, определили рН. (предварительно убедипись в том, что добавление сефадекса к.пищеварительному соку рН последнего не меняет). рН геля и, следовательно, извлеченного сока = 1,55..

Затем гель поместили в мерную пробирку и добавили к нему 4 мп воды, смесь тщательно перемешали и затем оставили отстаиваться 15 мин.

Таким образом нашли, что У„

4 8 мпь У2 = 10 8 мп У 3 = 11 4 мп, У = 4,8 мп, У = 2,3 мл, и следовательно, что из полости желудка крысы извлекли

У1 У2 4 8.10 8 — — --/у у / -Л 2. у 4 5 11 4

1110453 — /4 — 2,3/ = 2,85 мп пищеварительного сока.

Составитель С. Воробьев

ТехредЖ.Кастелевич Корректор Г.Решетник

Редактор Т.Митейко

Заказ 6214/4 Тираж 687 Подписной

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r.Óæãîðîä, ул.Проектная, 4

Этот сок развели в 40 раз и центрифугированием отделили сефадекс. 5

Надосадочную жидкость использовали для определения протеолитической активности извлеченного сока и его титрационной кислотности.Протеологи ческую активность определяли по Ансону так же, как и в предыдущем приМере,а титрационную кислотность путем титрования раствором NaOH,èñïîëüзуя в качестве индикаторов фенолфтапеин, диметиламнноазобензол и апизаринсульфоновокислый натрий, что позволило оценить общую кислотность, содержание свободной и связанной HCI.

Таким образом, из желудка крысы получили 2,85 мп, пищеварительного сока, выделившегося за 2,5 ч, рН которого оказался равным 1,55 и который имел протеолитическую активность

0.,6 (в E zso) общую кислотность 79 (выраженную в мп 0,1 раствора МаОН на 100 мп сока ), свободную НС! 0,096Х и связанную HCI 0,72Х.