Способ получения изолированных алейроновых зерен растений риса

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИЗОЛИРОВАННЫХ АЛЕЙРОНОВЫХ ЗЕРЕН РАСТЕНИЙ РИСА путем обработки семян хи.мическими реактивами и последующего выделения фракций алейроновых зерен, отличающийся тем, что, с целью сохранения нативного состояния и повыщения чистоты получаемого материала, семена обрабатывают последовательно 9-10%, 24-26% и 49-51%-ными растворами желатина в 5%-ном водном растворе глицерина при 35-37°С в течение 1,5-2,5 ч в каждом, готовят блоки путем заливки семян последним раствором с последующим уплотнением, а выделение фракции алейроновых зерен осуществляют при помощи резки готового блока.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК зов А 01 G 7/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3461306/30-15 (22) 31.03.82 (46) 07.10.84. Бюл. № 37 (72) Е. В. Лебедев, Н. П. Красноок, И. А. Вишнякова и И. В. Шведов (71) Краснодарский ордена Трудового Красного Знамени политехнический институт (53) 581 829 (088.8) (56) 1. Суворов В. И. Структура, химический состав и формирование алейроновых зерен семян клещевины и люпина. Автореф. дис. на соиск. учен. степени канд. биологических наук. М., 1973. (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИЗОЛИРОВАННЫХ АЛЕЙРОНОВЫХ ЗЕРЕН

„SU.„1117013 А

РАСТЕНИЙ РИСА путем обработки семян химическими реактивами и последующего выделения фракций алейроновых зерен, отличающийся тем, что, с целью сохранения нативного состояния и повышения чистоты получаемого материала, семена обрабатывают последовательно 9-10%, 24 — 26% и

49 — 51%-ными растворами желатина в

5%-ном водном растворе глицерина при

35 — 37" С в течение 1,5 — 2 5 ч в каждом, готовят блоки путем заливки семян последним раствором с последующим уплотнением, а выделение фракции алейроновых зерен осуществляют при помощи резки готового блока.

1117013

Соста ви r ель L. Ш кр адюк

Техред И. Верес Корректор А. T:.ñêo

Тираж 721 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР о делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушскаи наб., д. 4/5

Филиал ПГIП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная. 4

Редактор Л. Лосева

Заказ?095/2

Изобретение относится к гистохимии и может быть использовано для определения нативных незафиксировнных и зафиксированных химических соединений в алейроновых зернах.

В современных биохимических и гистохимических исследованиях эндоспермов рисовых зерновок большое внимание уделяется исследованию клеток внешнего слоя эндоспермов, состоящего из 1 — 6 рядов клеток, называемых алейроновыми. Однако в силу ряда особенностей строения эндоспермов и техники приготовления препаратов проведение тех или иных гистохимических реакций нельзя считать удовлетворительными.

Известен способ выделения алейроновых зерен, По данному способу измельченные семена многократно последовательно суспендируются и центрируются со

Смесью ацетона и четыреххлористого углерода. В результате многократного отделения осадка от надсадочной жидкости после каждого центрифугирования последовательно повышается плотность осадка — фракции, содержащей алейроновые зерна и кле точные стенки (плотность = 1,41). На последующих этапах центрифугирования надсадочные жидкости соединяются и после отделения центрифугированием клеточных стенок при 2200 .у в течение 10 минут получается фракция алейроновых зерен (1).

В результате измельчения и многократйого применения органических растворителей тонкие субклеточные структуры, каКими являются алейроновые зерна, содержащие различные формы белка, ферментов и фитина, претерпевают необратимые измейения — белок частично или полностью денатурируется, а в результате механического воздействия цитоплазматические мембраны разрушаются. В результате выделения препарат загрязняется другими структурными компонентами клеток. Подобные препараты алейроновых зерен не могут удовлетворить требованиям многих гистохимических реакций.

Цель изобретения — сохранение нативного состояния и повышение чистоты получаемого материала.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения изолированных алейроновых зерен растений риса, семена обрабатывают последовательно 9 — 10 /<, 5

24 — 26 /о и 49 — 51 "/0-ными растворами желатина в 5 />-ном водном растворе глицерина, при 35 — 37 С в течение 1,5-25 ч в каж дом, готовят блоки путем заливки семян последним раствором с последующим уплотнением, а выделение фракции алейроновых зерен осуществляют при помощи резки готового блока.

Пример. Из зерновки риса вырезают кусочки эндоспермы, содержащие алейроновый слой. Нарезанные кусочки переносят в 9 — 10о/о-ный раствор прозрачной желатины, приготовленной на 5о/0-ном водном растворе глицерина при 36 С на 1,5-2,5 ч, далее кусочки переносят в 25 /,-ный раствор желатины (время и температура те же) и в 50о/0-ный раствор гкелатины на

1,5-2,5 ч при той же тегмпературе. Затем кусочки помещают в бумажные ва н ночки, ориентируют их алейроновым слоем в нужную сторону и уплотняют в 50о/о-ном желатине при компактной температуре до нужной твердости (это оценивается эмпирически) . Из полученных кубиков, содержащих объект, вырезают бритвой ну.жные заготовки, приклеивают поливинилацетатным клеем (ПВА) или эпоксидной смолой к деревянным колышкам, устанавливают блок перпен дикулярно алейроновым слоям к стеклянному ножу льтурамикротома и режут.

Выкрошившиеся алейроновыс зерна собирают на поверхность жидкости сгекляпкого ножа и переносят на предметное стекло, смазанное тонким слоем белково-глицеринового клея. После высушиваиия при комнатной температуре препарат окрашивают и изучают в фазово-контрастном микроскопе.

Положительный эффект достигается тем, что нативность алейроновь.х зерен, полученных по предлагаемому способу, обеспечивается мягкими условиями заливки без применения полярных органических растворителей и высоких темгератур, а также т"м, что стенки клеток алейронового слоя одревеснены и желатина не проникает внутрь клеток, в то время как остальные ткани зерновки прэпи ываются хорошо.

Связь между алейроновыми зернами ослабевает до такой степени, что в процессе механического воздействия режущей кромки стеклянного ножа, алейроновые;ey!-: а повреждаясь выкрашиваются на поверхпо«ть жидкости в ванночку стеклянного ножа в чистой фракции.