Способ определения тиамина в кормах

 

-СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ -ТИАМИНА В КОРМАХ, включающий экстракцию тиамина из пробы корма, перевод его в тиохром окислительной смесью и флуорометрирование , отличающийся тем, что, с целью повьшения точности и сокращения времени определения, экстракцию тиамина из пробы корма осуществляют раствором хлорида калия при соотношении от 1: 10 до 1:15, а флуорометрирование проводят с использованием хинина гидрохлорида или хинина суль фата .

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

ВВТВВ

PECllVSJNH

09) И1) з() G 01 N 31/08

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н CB TOPCNONIV ВВИВВТВЪСТВТ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (2l) 3584398/30-15 (22) 19.04.83 (46) 23.12.84. Бюл. У 47 (72) А.Д. Пелевин (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности (53) 636. 085. /087 (088. 8) (56) 1. Букин В.Н. Витаминные ресурсы и их использование. Сб. 3. И., изд-во АН СССР, 1965.

2. Флоренская Н.К. Технологичес-. кий контроль качества сырья и комбикормов. И., ° Êîëîñ", 1968. (54) (57) - СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИАИИНА

В КОРМАХ, включающий зкстракцию тиамина из пробы корма, перевод его в тиохром окислительной смесью и флуорометрирование, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения точности и сокращения времени определения, экстракцию тиамина из пробы корма осуществляют раствором хлорида калия при соотношении от 1:

10 до 1:15, а флуорометрирование проводят с использованием хинина гидрохлорида или хинина суль— фата

1130800

Изо6 ре тение о тно с ит ся к технике количественного определения содержания тиамина (витамина В ), широко применяемой при контроле качества продукции в комбикормовой промышленности.

Тиамин является одним иа биологически активных веществ премиксов, используемых для обогащения комбикормов и белкововитаминных добавок. !О

В премиксы его вводят в количествах

200;300 г/т. В организме животных он входит в состав ферментов и играет .роль в водном, углеводном, белковом и фосфорном обмене, имеет боль- 15 шое значение для роста, развития и продуктивности. Поэтому важным моментом при контроле качества продукции является количественное определение содержания тиамина, для чего не- 20 обходим точный, экспрессный и простой способ его анализа.

Известны способы определения содержания тиамина, основанные на выделении (экстракции) и гидролизе 25 фосфатных его соединений с помощью энзиматической или химической (кислотной) обработки, превращения в щелочной среде при добавлении окислителя (калия железосинеродистого) 30 в тиохром и измерении интенсивности флуоресценции Ц .

Наиболее близким к предлагаемому является способ определения тиамина в комбикормах, включающий экстрак- 35 цию тиамина раствором серной кислоты при кипячении на водяной бане, затем тиамин переводят в тиохром окислительной смесью и флуорометриру- . .ют (2) .

Недостатками известных способов является их-продолжительность (от3 ч и более}, невысокая точность анализа, обусловленная разрушением тиамина в процессе гидролиза и неустой- 45 чивостью рабочего стандартного раствора (годен к применению в течение

2 ч)..

Цель изобретения " повышение точности и сокращения времени определе- 50 ния тиамина.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения тиамина в кормах, включающему экс"тракцию тиамина из пробы корма, пе- 55 ревод его в тиохром окислительной смесью и флуорометрирование, экстракцию тиамина из пробы корма осуществляют раствором хлорида калия при соотношении от 1:10 до I:15, а флуоро-. метрирование проводят с использованием хинина гидрохлорида или хинина сульфата.

В результате экспериментальных исследований установлено, что введенный тиамин в течение 10 мин экстрагируется из навески пробы премикса

57-ным раствором хлорида калия в соотношении от 1:10 до 1:15. Растворы солей хинина (хинина гидрохлорида хинина сульфата) флуоресцируют в области 320-390 нм, характерной для поглощения тиамина, переведенного в тиохром; причем интенсивность флуоресценции мкг/мл соли хинина соответствует 1 мкг/мл тиамина, переведенного в тиохром. В связи с этим количественное содержание тиамина определяется по интенсивности флуоресценции стандартного раствора соли хинина с концентрацией 1 мкг/мл, не требующего обработки окислительной смесью. Растворы солей хинина являются неограниченно стойкими, особенно при хранении в посуде из темного стекла.

Способ осуществляют следующим образом.

Н р и м е р . Берут навеску премикса массой 5 r помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, приливают 50 мл 57.-ного раствора хлорида калия и встряхивают на качалке 10 мин. Затем доводят объем в колбе до метки раствором хлорида ка-. лия, перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые

10 мл фильтрата.

1 2 мл фильтрата переносят в мерную колбу на 50 мл и доводят до метки раствором хлорида калия. Берут

40 мл разбавленного фильтрата и 40 мл изобутилового спирта в делительную воронку и тщательно перемешивают в течение 2 мин. После расслоения нижний водный слой сливают в цилиндр, доводят до первоначального объема (до 40 мл) раствором хлорида калия, перемешивают и используют для анали- за. В две делительные воронки вносят. по 8 мл испытуемого раствора, приливают 6 мл окислительной смеси, перемешивают, добавляют 20 мл изобутилового спирта и встряхивают 2 мин.

После расслоения нижний слой водный) отбрасывают, а верхний (спирто0800

V — объемфильтрата,взятый на .анализ, мп

К вЂ” количество хинина в 1 мл стандартного раствора,мкг, 45

3 113 вЫй) филЬтруют через бумажный фильтр с безводньм сульфатом натрия во флуорометрическую кювету и флуорометрируют, настроив предварительно при бор по:стандартному раствору хини-. на, 20 мл которого помещают в кювету.

Для гашения флуоресценции к испь1туемым растворам добавляют по 12 капли (0,05 мл) концентрирован-. ной соляной кислоты:, перемешивают содержимое и измеряют остаточную флуоресцейцию.

Стандартный раствор хинина готовят следующим образом.

Навеску кристаллического хинина " гидрохлорида массой 10 мг растворяют в мерной колбе вместимостью 100 мл в 0,1 н. растворе серной кислоты.

Затем берут 1 мл этого раствора и разводят 0,1 н. раствором серной кислоты в мерной колбе вместимостью

100 мл (концентрация хинина гидрохлорида 1 мкг/мл} . Раствор стойкий.

Содержание тиамина (Х) в граммах на тонну премикса рассчитывают по формуле

A-А, К Ч Vã <О ,Х72 V V .m 10 гпе А — показания флуорометра для испытуемого раствора до гашения;

А — показания флуорометра

f для испытуемого раствора после гашения; — объем раствора, в котором находится навеска, мл;

11 — объем раствора, взятого на окисление, мл;

V — объем разбавленного фильтрата мл;

Ю вЂ” масса навески премикса, г;

72 — постоянная величина флуоресценции. стандартного раствора сОлей хинина;

10 — величины для пересчета содержания тиамина в г/т, Пример 2. Берут навеску премикса массой 5 г, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прили1р вают 75 мл 5Х-ного раствора хлорида калия и далее проводят анализ по п.1 примера осуществления способа.

Стандартный раствор хинина готовят следующим образом.

Навеску кристаллического хинина сульфата массой 10 мг растворяют в мерной колбе вместимостью 100 мл в 0,1 н. растворе серной кислоты.

Затем берут 1 мл этого раствора и разводят О,! н.раствором серной кислоты в мерной колбе вместимостью

100 мл (концентрация хинина сульфата 1 мкг/ми). Раствор стойкий.

Полученные результаты испытания предлагаемого и известного способов приведены в таблице (введено тиамина в премиксы 200 г/т).

Анализ таблицы показывает, что содержание тиамина в премиксах, опЗо ределяемое предлагаемым способом при соотношении массы навески пробы и экстрагента от 1:10 до 1:15, составляет 199,7 -2,3 — 201,1 +-2,8 г/т, а при соотношении 1:8 — 180,0 5,8 г/т; при определении известным способом186,5 4,8 г/т с.отклонением в меньшую сторону до 7,0 — 29,0 г/т по отношению к введенному количеству.

Использование предлагаемого спо,щ соба определения тиамина в кормах позволяет повысить точность и сократить длительность анализа. Годовой экономический эффект по отрасли от внедрения способа составит

44640 руб.

1130800

Определено содержание тиамина, г/т, по способу пп

t при соотношении массы навески йремикса . и экстрагента предлагаемому

Известному

1:10 1:15

1:8

198,1

2 197,9

3 208,0

4 187,3

5 197,7

6 160,0

7 169,0

8 184,0

9 208,0

190,010 192,0

М ш 180 0-5,8

201, 1 2,8

186,5-4,8;

199,7-2:,,3

Составитель О. Воробьев

Редактор E. Лушникова Техред М.Гергель . Корректор И. Эрдейи

Заказ 9603/32 Тираж 822 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретнний и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

208,0

206,0

201,0

201, 0

200,0

202,0

201,0

201,0 . 200,0

191 0

202,0

205,0

205,0

196,0

205,0

198,0

198,0

198,0

192,0

198,0

186,0

193,0

171,0

193,0

185,0

193,0

187,0

183,0

184,0