Способ дифференциации пятен крови плодов и детей до пяти недель от крови взрослых людей

 

СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ПЯТЕН КРОВИ ПЛОДОВ И ДЕТЕЙ ДО ПЯТИ НЕДЕЛЬ ОТ КРОВИ ВЗРОСЛЫХ ЛЮДЕЙ пууем растворения пятен крови в дистиллированной воде и последующего фотоэлектро-ч колориметрирования, отличающийся тем, что, с целью обеспечения возможности исследования пятен крови различного срока давности, определяют содержание гемоглобина А в растворе лимонной кислоты и при содержании его от 0,1 до 75% диагностируют кровь взрослогоj при содержании от 80 до 100% диагностируют кровь плода или ребенка до пяти недель. (Л с

COOS СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ÄÄSUÄÄ 1138125

4 51

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ 1

И,АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ ./ (21) 3496816/28-13 (22) 04..10.82 (46) 07.02.85, Бюл. 11 5 (72) А,П,Загрядская, Л.С,Федоровцева и Н.В. Белихина (71 ) Горьковский государственный медицинский институт им. С.М.Кирова (53) 615.777/779(088.8) (56) 1. Федоровцева Л.С. и Белихина Н.В. К определению фетального гемоглобина в следах крови на вещественных доказательствах. - В сборнике Вопросы судебно-медицинской экспертизы и криминалистики. Под ред-. А.П.Загрядской, Горький, 1979, с. 81-83.

2. Шевчук В.А. Дифференциация крови плода и взрослого человека по гемоглобину фетального типа в судебно-медицинском отношении. Автореф. канд. дис. (54) (57) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ПЯТЕН

КРОВИ ПЛОДОВ И ДЕТЕЙ ДО ПЯТИ НЕДЕЛЬ

ОТ КРОВИ ВЗРОСЛЫХ Л10ДЕЙ путем растворения пятен крови в дистиллированной воде и последуюшего фотоэлектро.» колориметрирования, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью обеспечения возможности исследования пятен крови различного срока давности, определяют содержание гемоглобина А в растворе лимонной кислоты и при содержании его от 0,1 до 75Х диагностируют кровь взрослого, при содержании от 80 до 100Х диагностируют кровь плода или ребенка до пяти недель, 1 113812

Изобретение относится к медицине, а именно к судебной медицине, и может. быть использовано для установления наличия крови плодов, новорожденных и детей до пяти недель в пятнах на вещественных доказательствах.

Особенности молекулярной структуры гемоглобина взрослого человека (НвА) и фетального гемоглобина (HsF) были положены в основу ряда способов, 10 позволяющих определять наличие НвА и

НвУ как в .свежей жидкой крови, так н в пятнах крови на различных предметах: электрофорез в различных средах, иммунологический анализ, цитологический способ, реакция щелочной денатурации и др.

Известен способ дифференциации пятен крови плодов и детей до пяти недель от крови взрослых людей, заклю- 2б чающийся в том, что изучению подвергают одновременно две вытяжки: из пятна крови новорожденного и из пятна крови взрослого человека, которые наносят на предметные стекла, высу- д5 шивают, фиксируют и помещают в цитратно-фосфатный буфер. При этом кровь взрослого человека полностью элюриует в раствор, а кровь новорожденного остается на предметном ЗО стекле (11.

Наиб. лее близким к предложенному по технической сущности является способ дифференциации пятен крови плодов и детей до пяти недель от взрос35 лых людей, основанный на обработке вытяжки крови щелочью и процентном подсчете фетального гемоглобина с помощью фотоэлектроколориметра (21.

Однако известные способы опреде- 40 ления можно исНольэовать лишь при анализе свежей (негемолиэироваиной) жидкой крови.

Целью. изобретения является обеспечение возможности исследования пятен крови различного срока давности.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу дифференциации пятен крови плодов и детей до пяти недель от крови взрослых людей путем 50 растворения пятен крови в дистиллированной воде и последующего фотоэлектроколориметрирования; определяют со-. держание гемоглобина А в растворе лимонной кислоты и при содержании его от 0,1 до 75Х диагностируют кровь взрослого, а при содержании от 80 до IOOX диагностируют кровь плода, новорожденного или ребенка до пяти недель.

Способ осуществляется следующим образом.

Из исследуемого пятна, а также из заведомо известных пятен крови новорожденного (плода или ребенка до пяти недель) и взрослого человека вырезают по два кусочка с одииаковым весом сухого вещества крови (по 25 мг}.

По одному кусочку иэ каждого объекта помещают в отдельные пробирки с 5мп дистиллированной воды и оценивают степень растворимости пятен по интенсивности окраски растворов, используя фотоэлектроколориметр фЭК-М

1,светофильтр синий, кювета 5 мм I. При условии получения коэффициента свето пропускания растворов от 0 до 5DX исследуемые пятна берутся в работу.

Аналогичные навески фиксируют

80 -ным этиловым спиртом в течение

1 ч, высушивают и помещают в пробирки с 5 мл раствора лимонной кислоты (рН 2,8). Через несколько часов раствор кислоты с навеской крови взрослого человека окрашивается в краснобурый цвет, раствор кислоты с навеской новорожденного остается прозрачным или окрашивается слабо. Количественная оценка результатов прово дится через 24 ч на фотоэлектроколо» риметре путем определения коэффициента светопропускания растворов: изменение окраски растворов в пределах

0,1-757 свидетельствует о наличии в пятне крови взрослого человека, в пределах 80-1007. — крови плода, новорожденного или ребенка до пяти недель.

Пример 1. Обнаружен труп но-. ворожденного ребенка. При осмотре места происшествия произведены смывы пятен, похожих на кровь, на ватные тампоны.

Пятна на тампонах исследованы судебно-медицинским экспертом и уста» новлена кровь человека 0 с 1 группы.

Для сравнительного исследования представлены высушенные на марле образны крови Пятаевой Т.Н. и ее ново,рожденного ребенка. Вырезали по два кусочка иэ пятен крови с каждого ват» ного тампона (объекты 1 и 2), а также из образцов крови новорожденного и Пятаевой, которые брались в качест" ве контроля (вес сухого вещества крови по 25 мг ). По одной навеске с каждого объекта помещали в пробирки

3 11381 с 5 мл дистиллированной воды, анало-гичные навески фиксировали 80 -ным о этанолом в течение 1 ч, подсушивали. на воздухе и помещали каждый кусочек отдельно в 5 мп раствора лимонной кислоты (рН 2,8). Через 4 ч раствор кислоты с образцом крови Пятаевой приобрел интенсивный красно-бурый цвет, растворы кислоты с кусочками пятен из объектов 1 и 2 и образцом 1О крови новорожденного остались практически бесцветными. Результаты ко-, личественной оценки и определение коэффициента светопропускания растворов приведены в табл.1. 15

Таким образом, в пятнах на двух ватных тампонах обнаружена кровь, ко« торая принадлежит плоду, новорожденному или ребенку до пяти недель и не может принадлежать взрослому человеку.

Б табл.2 приведены значения коэффициента светопропускания растворов

s пятнах крови новорожденных и взрослых различной давности в дистиллированной воде и в растворе лимонной кислоты (рН 2,8). .Исследовали одно пятно крови на марпе давностьв 1 мес, В качестве коитроля использовались пятна заве-домо известной крови новорожденного .(пуповинная ) и взрослого человека такой же давности. Вырезали по две навески (содержащих по 25 мг сухого вещества крови) из каждого пятна.

Одна навеска помещалась в пробирку

35 с 5 мл дистиллированной воды, другая (аналогичная ) фиксировалась 80 -ным этиловым спиртом, высушивалась и помещалась в пробирку с 5 мп раствора лимонной кислоты (рН 2,8 ).

Количественная оценка результатов проводилась через 24 ч от момента начала реакции на фотоэлектроколориметре марки ФЭК-И, 45

В табл. 3 представлены значения

KCP общего гемоглобина в дистиллированной воде и гемоглобина А в растворе лимонной кислоты.

Таким образом, в исследуемом пят- 50 ие содержится кровь взрослого человека.

Пример 3. Исследовали одно пятно крови на марле давностью один год. В качестве контроля ис- 55 пользовались пятна заведомо извест-, ной крови новорожденного (пуповинная) и взрослого человека той же давности.

25 4

Техника исполнения аналогична описанной, В табл. 4 представлены значения .КСР общего Нв в дистиллированной во-. де и гемоглобина А в растворе лимонной кислоты.

Таким образом, в исследуемом пятне содержится кровь взрослого человека.

Пример 4. Исследовали одно пятно крови на марле давностью 1 мес. В качестве контроляиспользовались пятна заведомо известной крови новорожденного (пуповинная ) и взрослого человека такой же давности. Техника исполнения аналогична описанной, В табл.5 представлены значения

KCP общего Нв в дистиллированной воде и гемоглобина А в растворе лимонной кислоты„

Таким образом, в исследуемом пятне содержится кровь плода ипи ребенка до пяти недель.

Пример 5. Исследовали одно пятно крови давностью один год. В качестве контроля использовали пятна заведомо известной крови новорожденного (пуповииная) и взрослого человека такой же давности. Техника исполнения аналогична описанной.

В табл. 6 представлены значения

KCP общего Нв в дистиллированной воде и гемоглобина А в растворе лимонной кислоты.

Таким образом, в исследуемом пятне содержится кровь плода или новорожденного ребенка в возрасте до пяти недель.. Пример 6. Исследовали два пятна крови (новорожденного и взрослого) с плохой растворимостью в дистиллированной воде (KCP свыше 50X).

Техника исполнения аналогична описанной.

В табл.7 представлены значения

KCP общего Нв в дистиллированной воде и гемоглобина А в растворе лимонной кислоты.

Таким образом, плохо растворимые пятна брать в работу (исследовать в растворе лимонной кислоты ) нельзя. В этом случае пятно крови взрослого дает такие же показания KCP НвА в лимонной кислоте (по которым выска» эывается суждение о принадлежности крови новорожденному ипи взроопому человеку), как и пятно кропи новорож1138 1 25 денного, т,е, дифференцирование пятен невозможно. В пределах растворимости в дистиллированной воде от 0,1 до 50Х лятна крови новорожденных и взрослых могут дать одинаковые значения КСР, НвА — : в пределах от 7б до 79%.

Пример 7. Исследовали два пятна крови: новорожденного давностью 1 мес. и взрослого давностью

6 мес, Техника исполнения аналогична описанной, В табл.8 представлены значения

КСР общего Нв в дистиллированной воТаблица 1

Исследуемые объекты

Кровь новорожденного

Кровь Пятаевой Т.Н.

Объект

Объект 2

32

Таблица 2

1Давность хранения пятен

0,1-50

1 день - Змес, .10

10 0,1-25 0,1-25 80-95

3 мес. 1 день .

6 мес.

10 3-35

1О

3-35

80-99 10-70 б мес. 1 день—

9 мес.

10 10-50 10-50 80-100 40-72

9 мес. I дель12 мес.

10

Свыше года - до

5 лет 10 де и гемоглобина А в растворе лимонной кислоты.

Таким образом, пятно могло прои5 зойти как за счет крови новорожденного (плода), так и за счет крови взрослого человека, Это объясняется тем, что полученные значения (77X) входят в группу сомнительных значений (КСР 76-797.).

Предлагаемый способ позволяет определить возможность исследования, пятен крови различного срока давности, 15-50 15-50 90-100 50-72

15-50 15-50 95-100 55-74

1138125 8

Таблица 3.

0,1

0,01

Контроль - кровь .взрослого человека

О,!

0,01.Контроль — кровь новорожденного

0,01

50

50

100

0,01

0,1

0,0!

0,01

100

50

100

0,01

Исследуемое пятно

Исследуемое . пятно

Контроль — кровь взрослого человека

Контроль - кровь новорожденного

Исследуемое пятно

Контроль кровь взрослого человека Контроль » кровь новорожденного сследуемое пятно

Контроль - кровь взрослого человека

Контроль - кровь новорожденного

Т а б л и ц а 4.Т аблица 5

1l38T25

Таблица 7

Исследуемое пятно крови новорожденного

Исследуемое пятно крови взрослого 70

98

Таблица 8

Исследуемое пятно крови новорожденного 20

Исследуемое пятно крови взрослого 20

77

Составитель В.фролова

Редактор Л.Гратилло ТехредМ.Надь Корректор О,Луговая

Заказ 10583/4 Тираж 722 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, Ж-35, Раушская иаб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул, Проектная, 4