Питательная среда для выращивания клубеньковых бактерий

 

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ, включающая источники углерода, азота , минеральные соли, ростовые вещества , стабилизатор рН и воду, о тличающаяся тем, что, с целью обеспечения возможности выращивания на ней быстрорастущих и медленнорастущих клубеньковых бактерий , а также повышения их титра, в качестве источника углерода, азота , минеральных солей и ростовых веществ она содержит сапропель, а в качестве стабилизатора рН - углекислый кальций при следующем соотношении компонентов, мас.%: Сапропель (в расчете на сухое вещество)0,5-2,5 Углекислый кальций 0,01-0,05 ВодаОстальное

(19) (11) СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

4 (51) С 12 N 1/06

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H АВТОРСКОМЪ СВИДЕТЕЛЬСТВ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТН СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTMA (21) 3595533/30-15 (22) 20.05.83 (46) 15.02.85. Бюл. Ф 6 (72) Н.И.Мильто, А.И. Карбанович, М. 3. Лопотко и П.Л. Куз ьмицкий (71) Институт микробиологии AH БССР и Институт торфа АН БССР (53) 631.461.52(088.8) (56) 1. Кронгауз Е.А. и др. Использование мелассы в питательной среде для клубеньковых бактерий. Микрои биологическая промышленность, 1971

В 6, с. 30.

2. Методы исследования клубеньковых бактерий. Методические рекомендации, 1981, с. 36 (прототип). (54) (57) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ, включающая источники углерода, азо" та, минеральные соли, ростовые вещества, стабилизатор рН и воду, о тл и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью обеспечения возможности выращивания на ней быстрорастущих и медленнорастущих клубеньковых бактерий, а также повышения их титра, в качестве источника углерода, азота, минеральных солей и ростовых веществ она содержит сапронель, а в качестве стабилизатора рН вЂ” углекислый кальций при следующем соотношении компонентов, мас.Ж:

Сапропель (в расчете на сухое вещество) О, 5-2,5

Углекислый кальций 0,01-0,05

Вода Остальное

1139750.2

Изобретение относится к микробиологической промышпенности, а именно к средам для культивирования к1Губеньковых бактерий при производстве препаратов клубеньковых бактерий, применяемых для инокуляции бобовых культур.

Известна среда для культивирования быстро и медленнорастущих клубеньковых бактерий, содержащая ис- !О точники углерода, фасолевый отвар и минеральные соли 13.

Однако указанная среда обеспечивает относительно низкий титр клубеньковых бактерий, является дорогостоящей и многокомпонентной.

Известны также питательные среды, содержащие кукурузный экстракт, дрожжи, глюкозу, мелассу, минеральные соли, стабилизатор рН, исполь- 20 эуемые для получения рабочей культуры быстрорастущих (БКБ) и медленнорастущих (МКБ) клубеньковых бактерий при производстве ризоторфина(23.

Недостатками известных сред являются высокая стоимость сред, обусловленная использованием дорогостоящих ингредиентов — глюкозы, пищевого сахара, мелассы, кукурузного экстракта и минеральных солей, различный состав сред для выращивания БКБ и

МКБ, а также раздельная стерилизация углеводов и остальных компонентов,сред, что не позволяет унифицировать процесс их приготовления, низ35 кий титр клеток клубеньковых бактерий 0,8 - 10" - 1,5 10" в 1 мл, достигаемый при выращивании БКБ в течение 36-48 ч, MKB — 72-96 ч.

Целью изобретения является обес40 печение возможности культивирования быстрорастущих и медленнорастущих клубеньковых бактерий и повышение их жтра.

Для достижения цели питатель45 ная среда для выращивания клубеньконых бактерий, включающая источники уг ерода, азота, минеральные соли, ро товые вещества, стабилизатор рН и воду, в качестве источника углерода, азота, минеральных солей и ростовых веществ содержит сапропель, в качестве стабилизатора рН— углекислый кальций при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Сапропель (в расчете на сухое вещество) 0,5-2,5

Углекислый кальций 0,01-0,05

Вода Остальное

После стерилизации рН для

БКБ 6,8-7,0, для МКБ 6,2-6,5.

Элементный состав органической массы сапропелей сравнительно постоянен, Содержание углерода колеблется от 52 .до 56Х, азота - от 3,5 до 6,0Х на органическую массу. Зольность до 30%. Сапропели богаты всеми биогенными макро- (N;P,Ê,Ca,Mg,$) и микроэлементами (Zn В,Cu Со, Mo,Ni и др.). Органические сапропе-, ли содержат 18-52% легкогидролиэуемых веществ, различные витамины, обладают высокой дисперсностью и влагоемкостью.

Пример 1. Готовят питательную среду следующего состава, мас.%: Сапропель (в расчете на сухое вещество) 0,5

ÑàÑ0

0 05

Вода водопроводная До 1:00,0 рН (после стерилизации) для

БКБ 6,8-7,0, а для МКБ 6,2-6,5.

Среду стерилизуют в автоклаве при

1=121 С в течение 1 ч. Питательную среду засевают суспензией клубеньковых бактерий гороха, штамм 250 а (БКБ) и суспензией клубеньковых бак— терий сои, штамм 629 а (МКБ). Возраст посевного материала 3-е суток для БКБ и 7 суток для МКБ. Исход-, ный титр — 5 0 10 клеток в t мл.

Культивирование бактерий ведут в колбах емкостью 750 мл с 200 мл питательной среды на качалке со скоростью 200 об/мин при 1 28 С в течение

2 сут для БКБ и 4 сут для МКБ. Титрколичество жизнеспособных клеток определяют известным методом.

Титр клубеньковых бактерий гороха, штамм 250 а, составляет 9,0 10зклеток/мл питательной среды, В

Титр клубеньковых бактерий сои, штамм 629 а, составляет 2,9 -109клеток/мл.

Пример 2. Готовят питательную среду следующего состава, мас.%:

Сапропель (в расчете на сухое вещество) 1,0

СаСО5 0,01

Вода водопроводная До 100,0 рН (после стерилизации для

БКБ 6,8-7,0, для МКБ 6,2-6,5.

Далее как в примере 1.

Титр клубеньковых бактерий гороха, штамм 250 а, составляет 1,3 10 клубеньковых бактерий, а сои, штамм 629 а — 2,5 10" .!!39750

Составитель М.Мирзаев

Техред Л. Коцюбняк Корректор А. Ильин

Редактор Т.Веселова

Заказ 224/19

Тираж 525 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 з

Пример 3, Готовят питательную среду следующего состава, мас.%:

Сапропель (в расчете на сухое вещество) 2,5

СаСО 0,05

Вода водопроводная До 100,0 рН (после стерилизации) для

БКБ 6,8-7,0, для МКБ 6,2-6 5.

Далее. как в примере 1.

Титр клубеньковых бактерий гороха, штамм 250 а, составляет 9,1 ° 10 0, титр клубеньковых бактерий сои, штамм 629 а, — 1,2 tO клеток в 1 мл питательной среды.

Среду можно использовать как с нативным сапропелем, так и гидролизованным, что приводит к повышению титра клубеньковых бактерий в. 1,3-2,0 раза.

Пример 4. Готовят пительную среду .следующего соства, мас.%:

Гидролизованный сапропель (в расчете на сухое вещество) 0,5

Вода водопроводная До 100 0 рН (после стерилизации) для

БКБ 6,8-7,00, для МКБ 6,2-6,5.

Гидролиз сапропеля, входящего в состав среды, проводят 1%-ной соляной кислотой (22,6 мл НС1 уд.вес

i, 19 на 1 л среды) путем автоклавирования при 121 С в течение 30 мин. ,После автоклавирования.среду, нейтрализуют 0,1 н. раствором NaOH до

,указанных показателей рН и снова стерилизуют в автоклаве при 121 С в течение 30 мин. Далее как в примере 1.

Титр клубеньковых бактерий гороха, штамм 250. а, составляет

1,2 10 клеток в мл питательной сре1О ды, клубеньковых бактерий сои, 5 штамм 629 а. — 4,!""10 .

Пример 5. Готовят питатель.ную среду следующего состава, мас.%:

Гидролизат сапропеля-(в расчете на сухое вещество) 1,0

Вода водопроводная До 100,0 рН (после стерилизации) для

БКБ 6,8-7,0, для МКБ 6,2-6,5.

Далее как в примере 4.

Титр клубеньковых бактерий гороха, штамм 250 а, составляет

2,6 10"", клубеньковых бактерий сои, штамм 629 а — 4,8 0" .

Пример 6. Готовят питательную среду следующего состава, мас.%:

Гидролизат сапропеля (в расчете на сухое вещество) 2,5

Вода водопроводная До 100,0 рН (после стерилизации) для

БКБ 6,8-7,0, для МКБ 6,2-6,5.

Далее как в примере 4.

Титр клубеньковых бактерий гороха штамм 250 а, составляет 1,3 10, клубеньковых бактерий сои, штамм

629 а — 1,9 .101 Предлагаемая питательная среда по сравнению с известными имеет сле35 дующие преимущества: пригодность для выращивания как БКБ, так и МКБ,, снижение себестоимости питательной среды в 70 раз.