Способ диагностики геморрагической лихорадки с почечным синдромом

 

СПОСОБ ДИАГНОСТЖИ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ С ПОЧЕЧНЫМ СИНДРОМОМ путем определения иммунологических факторов в крови больного, отличающийся тем, что, с целью повьшения точности диагностики и упрощения способа, исследуют иммунные комплексы, циркулирующие в крови больного, твердофазным иммуноэнзиматическим методом и диагностируют заболевание по наличию специфического антигена в иммунном комплексе . сл

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУ БЛИН

{!9) {)1) А

4{SL) А 61 К 39/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

fIO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРИТИЙ

ОПИСАНИЕ. ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPGHONIV СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3548088/28-13 (22) 26.01.83 (46) 23.03.85. Бюл. Ф 11 (72) И.Н.Гавриловская, Е.А.Горбачкова и Н.С,Апекина (71) Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН СССР (53) 615.375(088.8) (56) 1. Chumakov М.Р., Gavrilovskaya I.N., Boiko V.À., et al. Detection of hemorrhagic fever with

renal syndrome (HFRS) virus in the

lung bank voles and redbaced voles

trapped in HFRS in the European

part of USSR and sегоdiagnosis of

this infection. — Arch. Virol

1981, 69, 295-300. (54) (57) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГЕМОРРАГИЧЕСКОИ ЛИХОРАДКИ С ПОЧЕЧНЫМ СИНДРОМОМ путем определения иммунологических факторов в крови больного, отличающийся тем, что, с целью повьнпения точности диагностики и упрощения способа, исследуют Ф иммунные комплексы, циркулирующие в крови больного, твердофазным иммуноэнзиматическим методом и диагнос.тируют заболевание по наличию специфического антигена в иммунном комплексе.

1146053

Изобретение относится к способам диагностики особо опасных вирусных инфекций, в частности к способу диагностики геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС) S вирусного природно-очагового зооноза, широко распространенного на территории CCCP

Известен способ диагностики геморрагической лихорадки с почечным 10 синдромом путем определения иммунологических факторов в крови, в частности антител (1) .

Однако известный способ имеет недостаточную точность, поскольку 15 определение титров антител возможно только на 14-21 день заболевания, обнаружение же антител в первые дни болезни не является диагностическим признаком. Кроме того, спо- 20 соб сложен в исполнении, так как необходимо исследование парных сывороток и при наличии четырехкратного и более нарастания титров антител можно диагностировать ГЛПС. 25

Целью изобретения является повышение точности диагностики и упрощение способа.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу диагностики геморрагической лихорадки с почечным синдромом путем определения иммунологических факторов в крови бопьного, исследуют иммунные комплексы, циркулирующие в крови больного, твердофазным иммуноэнзиматическим методом и диагностизуют заболевание по наличию специфического антигена в иммунном комплексе.

Пример 1. В микропанели 40 фирмы ФЛОУ или производства Московского экспериментального завода добавляют 50 мкл (10 мкг/мл белка) в лунку иммуноглобулина, выделенного из сыворотки переболевшего ГЛПС человека. После трехкратной отмывки

О, 1 М фосфатно-буферным раствором (ФБР) рН 7,4 панели высушивают и хранят при 4 C до использования. Тестио руемую сыворотку больного ГЛПС до- SÎ бавляют в объеме по 50 мкл на лунку в две лунки панели с иммунным покрытием. Контакт в течение ночи при

4 С. Панели трижды отмывают ФБР, высушивают на воздухе и добавляют по SS

30 мкл на лунку меченного пероксидазой хрена иммуноглобулина. Источником -иммуноглобулина служит та же сыворотка переболевшего ГЛПС, что и для иммунного покрытия. Контакт

2 ч при комнатной температуре. После четырехкратного отмыва ФБР и подсушивания на воздухе в каждую лунку добавляют по 100 мкл субстрата, содержащего ортофенилендиамин в

0,1 M цитратно-фосфатном буфере рН 5,0 (0,4 мг ортофенилендиамина на 1 мл цитратно-фосфатного буфера) и перекись водорода (0,06X), Контакт — 30 мин при комнатной температуре. Для останбвки реакции в каждую лунку добавляют по 50 мкл 2NH 50 .

Экстинкцию измеряют при 490 нм в фотометре Титертек.

Ранняя стадия инфекционных заболеваний сопровождается циркуляцией в крови этиологического агента и его растворимых белков-антигенов.

Диагностика заболеваний, в частности геморрагической лихорадки с почечным синдромом, основана на выявлении антител в крови больного. Но на ранней стадии инфекции образующиеся антитела связаны избытком циркулирующего антигена в иммунные комплексы и не могут быть определены существующими способами.

Преимуществом предлагаемого способа является определение специфичности иммунных комплексов. Все патогенные иммунные комплексы формируются в условиях избытка антигена.

Это их свойство используется в предлагаемом способе дважды: как для адсорбции на специфические антитела, связанные с твердой фазой, так и для выявления свободных антигенных детерминант комплекса мечеными специфическими антителами. В реакции присутствуют только специфические компоненты . антитела против вируса

ГЛПС (меченые и немеченые) и антиген вируса ГЛПС, что полностью исключает возможность получения ложноположительных результатов (табл. 1).

Важным преимуществом предлагаемоФ

ro способа является возможность диагностики тяжелых форм заболевания, которые могут протекать как серонегативные ввиду поступления в циркуляцию значительного количества антигена, что приводит как к подавлению иммунного ответа, так и к связыванию в ИК образующихся антител (табл. 2) .

Способ позволяет устанавливать окончательный диагйоэ ГЛПС в первые

1146053 составе иммунного комплекса и позволяет избежать ошибок диагностики, чреватйх летальными исходами.

Способ позволяет также определять продолжительность циркуляции антигена в составе иммунного комплекса в остром периоде болезни, что имеет важное прогностическое значение.

Таблица 1 °

Количество обследованных

Количество положительных результатов

Сыворотки

Антитела

Антиген в специфическом иммунном комплексе

Больных ГЛПС

39

Больных клещевМм энцефалитом

12

Больных почечными заболеваниями неинфекцинной этио15 логии

100

Здоровых людей

%

Антитела в сыворотках определяли при помощи непрямого метода флюоресцирующих антител.

Ъ дни болезни, поскольку обнаружение антигена в крови больного однозначно свидетельствует об острой инфекции

ГЛПС. При использовании метода определения антител диагноз может быть установлен при наличии четырехкратного и более нарастания титров антител в парных сыворотках, что происходит к 14-21 дню от начала болезни.

Обнаружение антител в первые дни болезни не является диагностическим признаком, поскольку может быть связано с уже перенесенной ранее инфекцией ГЛПС.

Максимально ранняя диагностика при помощи предлагаемого способа позволяет проводить рациональное лечение и сократить пребывание больного в стационаре с 40-50 до 2030 д.

Определение специфического антигена в составе иммунного комплекса обладает важным преимуществом пере применяемым способом, т.е. позволяет диагносцировать тяжелые формы заболевания, протекающие как серонегативные случаи. Антитела в таких случаях связаны избытком антигена в иммунные комплексы и не могут быть определены известным способом. Предлагаемый способ выявляет антиген в

1146053

Таблица 2

Клинический диагноз

Лабораторный диагноз

День болезБольной

Антитела

Антиген в специфическом иммунном комплексе ни

«(Р/й — 2,8) ГЛПС, средней тяжести

Д-ый В. К.

Б-ц В.М, +(Р/М вЂ” 2,9) ГЛПС, средней тяжести

+(Р/N — 2,1) 1(Р/М вЂ” 4, 9)

+(Р/М вЂ” 8,0) (Р/N — 2, 1) Д-ва Л.И.

ГЛПС, средней тяжести

17

1

То ме, что и в табл. 1.

Составитель Т.Крюкова

Техред Л. Иикеш Корректор JJ.ÏHëèëåнко

Редактор О.Черниченко

Заказ 1253/6

Хирам 722 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППЛ "Патент", г. Ужгород. ул..Проектная, 4