Способ экспресс-диагностики инфекции @ @
СПОСОБ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИИ MYCOPLASMA PNEUMONIAE путем проведения реакции встречного иммуноэлектрофореза исследуемой сыворотки и специфического антигена с последующим определением антител, по наличию которых диагностируют заболевание, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, в качестве антигена используют гликопротеидную фракцию антигена Mycoplasma pneumoniae.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
0 ,1
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К А ВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3587823/28-13 (22) 04.05.83 (46) 30.08.85. Бюл. № 32 (72) М. С. Байжомартов, В. А. Семенова, О. Г. Стеценко и Г. В. Ярема (71) Научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней (53) 616-07 (088.8) (56) J. Immunol6ogy, 1976, 117, 3, р. 1054—
1055.
„„SU„., 1175440 (л)4 А 61 В 10/00 G 01 N ЬЗ 54
11, г а
,, " гъ
1 к )
I (54) (57) СПОСОБ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИИ MYCOPLASMA PNEUMONIAE путем проведения реакции встречного иммуноэлектрофореза исследуемой сыворотки и специфического антигена с последуюШим определением антител, по наличию которых диагностируют заболевание, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, в качестве антигена используют гликопротеидную фракцию антигена Мусор1авпта pneumoniae.
1175440
Составитель В. Дроздов
Техред И. Верес Корректор В. Синицкая
Тираж 722 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4
Редактор Н. Швыдкая
Заказ 5245/4
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для лабораторной диагностики микоплазменных пневмоний.
Целью изобретения является повышение чувствительности способа диагностики.
Способ осуществляется следующим образом.
Сыворотки крови больных острыми пневмониями собирают в острый период заболевания. Реакцию ВИЭФ ставят на гель-электрофоретическом приборе фирмы «Реанал», модель 73. Готовят 1 /о-ный агаровой гель фирмы «Дифко» на мединал-ацетатном буфере (рН 8,6). В агаре вырезают 2 ряда лунок. В ряд лунок, расположенных к аноду, вносят по одной капле испытуемой сыворотки больного, взятой в различных двукратных разведениях (от 1:2 до 1:64) . Лунки находящиеся около катода, заполняют гликопротеидной фракцией антигена M. рпецгпо- 20
niae, которую получают путем химической экстракции антигена ледяной уксусной кислоты и этанолом.
Процедура получения гликопротеидной фракции заключается в следующем. Подвергнутый ультразвуковой дезинтеграции концентрированный антиген M. pneumoniae обрабатывают ледяной уксусной кислотой до получения рН среды 6,0. Выпавший осадок огделяют центрифугированием и в надосадочную жидкость снова добавляют ледя- Зо ную уксусную кислоту до рН среды 5,0.
Через 15 — 20 мин сформировавшийся осадок собирают путем центрифугирования при
18000 об/мин в течение 30 мин. Полученный осадок растворяют в небольшом объеме физиологического буферного раствора (pH 7,2) и подвергают диализу в течение 3 дней в проточной и дистиллированной воде на холоду. Таким образом, приготовлена гликопротеидная фракция 1 антигена M. pneumoniae. Надосадочную жидкость, полученную после экстракции гликопротеидной фракции 1, обрабатывают 6-кратным объемом эталона на холоду (+4 С) и через 12 — 18 ч образовавшийся осадок отделяют путем центрифугирования. Осадок подвергают диализу как описано, и полученный материал представляет собой гликопротеидную фракцию 2 антигена M. pneumoniae. Полученные таким образом гликопротеидные фракции используют в реакции ВИЭФ в концентрации 120 — 200 мкг/мл углеводов и 70—
120 мкг/мл белка.
В качестве положительного контроля реакции ВИЭФ используют лунки, содержащие гликопротеидную фракцию антигена и гипериммунную сыворотку и M. pneumoniae.
В качестве отрицательного контроля используют 2 пары лунок, содержащих гликопротеидную фракцию антигена и нормальную кроличью сыворотку, а также в качестве контроля прототипа — нативный антиген и сыворотку больного. Нативный антиген
M. pneumuniae представляет собой концентрированную и обработанную ультразвуком культуру возбудителя с содержанием белка 400 — 500 мкг/мл.
Реакция протекает при силе тока 40 mA, напряжении 208 В в течение 1 ч. О положительном результате реакции судят по наличию линии преципитации между лунками.
