Питательная среда для культивирования светящихся бактерий @ @ 213

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН у!)4 С 12 !! 1/20

0,9-1,1

О, 09-0,!!

2,8 — 3,2

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (2) ) 3635997/28-13

{22) 16 ° 08.83 (46) 30.08.85. Бюл. ¹ 32 (72) И.Н. Трубачев, Э,К. Родичева и )O.È. Баянова (71) Институт биофизики CO AH СССР (53) 63).))(088.8) (56) Gitelson. I.I. Pish А.М. ее аl.

Continuous Culture as the IIeans of

Luminescent Reactrion Enzyme Luciferase obtaining. "Contin.Cultiv.Microorganisms" Proc. 7 Symp. Prague, 1978, published. Prague, 1980, р. 807-814.

Nealson К. Hastings J. how oxygen

is optimal for luciferase sinthesis

in some bacteria.-"Àrñh Nicrobiol", !

977, v. 111, р. 9. (54) {57) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬ—

ТИВИРОВАНИЯ СВЕТЯЩИХСЯ PHOTOBACTERIUN

LEIOGNATHI 213, содержащая двузамещен— ный фосфат натрия, однозамещенный фосфат калия, двузамещенный фосфат

„„SU„„117596 аммония, сернокислый магний, глицерин и стимуляторы роста, о т л и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью увеличения выхода биомассы и концентрации люциферазы в ней, в качестве стимулятора роста она содержит гидролизат водородных бактерий Alcaligenes eutrophus Z-1 при следующем соотношении компонентов, г/л:

Цвузамещенный фосфат натрия 5,0-7,0

Однозамещенный фосфат калия

Двузамещенный фосфат аммония 0,45-0,55

Сернокислый магний

Глицерин

2,5-5Е-ный

- гидролизат водородных бак- . терий Alcaligenes

entrophus Z-! До! л

1175964

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для выращивания бактерий — продуцентов фермента люциферазы.

Целью изобретения является увеличе 5 ние выхода биомассы и концентрации люциферазы в Photobacterium leiognathi

213.

Питательную среду для культивирования светящихся бактерий Photobacte- 0

rium leiognathi 213 готовят следующим образом, К 1 л гидролизата добавляют, г:

М а 2 НРО,1.1 2 H ZO 5, 0-7, О; К Н 2РО.10, 9 — 1, 1 (NH )g НРО 0,45-0,55; "1gSOg 7Н 0

0,0,9-0,11; глицерин 2,8 — 3,2.

Для приготовления гидролизата биомассу водородных бактерий суспендируют в 0,5 н. растворе соляной кислоты в соотношении сухая биомасса20 кислота 1:13 — 1:100 и выдерживают

2-3 ч на кипящей водяной бане. После охлаждения рН доводят до 7,5 — 7,8 добавляют фермент панкреатин в коли25 честве 5Х от сухого, веса биомассы.

Далее охлажденную суспензию термостатируют в течение 2 сут при 45ОС в присутствии хлороформа (1X ) при периодическом перемешивании. Непрогидролизованный остаток биомассы (20-30Х от исходной )отделяют, гидролизат нейтрализуют, отстаивают и используют в качестве компонента питательной среды.

Гидролизат, полученный таким об- 35 разом, содержит аминокислоты, пеп— тиды, витамины, нуклеиновые компоненты, углеводы.

Пример 1. В стерильную колбу объемом 250 мл заливают 50 мл сте- 40 рильной питательной среды, г/л:

Na HPOg 12Н О 5,0; КН РО 0,9; (ИН „) НРО 0,45; "fgSO) 7Н О 0,09; глицерин 2,8 и гидролизат водородных бактерий, взятой в соотношении сухая биомасса — жидкая фаза 1:40 (т,е. концентрация водородных бактерий в жидкой фазе составляет 2 5X).

Затем, вводят 1 мл инокулята светя— щихся бактерий и наблюдают их рост 50 и свечение. Концентрация биомассы, измеренная по оптической плотности, в максимуме удельной интенсивности люминесценции в 1,5 раза превышает контрольную. Удельная интенсивность 55 свечения, характеризующая содержание люциферазы в биомассе в максимуме свечения культуры, когда биомассу берут для выделения люциферазы на среде с гидролиэатом водородных бактерий превышает контрольную в 2,4 раза.

Пример 2. В стерильную кол— бу объемом 250 мл заливают 50 мл стерильной питательной среды, г/л:

1!а НРО 12Hzo 7,0; КН РО+ 1,1; (NH) НРО+ 0,55; ".1дЯО!. 7Н О 0,1; глицерин 3,2 и гидролизат водородных бактерий до 1 л, приготовленный из биомассы водородных бактерий, взятой в соотношении сухая биомасса— жидкая фаза 1:30 (т.е ° концентрация водородных бактерий в жидкой фазе составляет 3,363).

Затем вводят 1 мл инокулята и наблюдают рост и свечение бактерий.

Концентрация биомассы, измеренная по оптической плотности, в максимуме удельной интенсивности люминесценции в 1,7 раза превышает контрольную.

Удельная интенсивность свечения, характеризующая содержание люциферазы в биомассе, в максимуме свечения, когда биомассу берут для выделения люциферазы, на среде с гидролизатом водородных бактерий превышает контрольную в 2,6 раза.

Пример 3. B стерильную колбу объемом 250 мл заливают 50 мл стерильной питательной среды, г/л:

Na>HPOp 12Н О 6,0; КН РО4 1,0; (1!Н, ) НРО+ 0,5; М1Я0,1, 7Н О 0,1; глицерин 3,0 и гидролизат водородных бактерий до 1 л, приготовленный из биомассы водородных бактерий, взятой в соотношении сухая биомасса — жидкая фаза 1:20 (т.е. концентрация в жидкой фазе составляет 57). Затем вводят 1 мл инокулята светящихся бактерий и наблюдают их рост и свечение.

Концентрация биомассы, измеренной по оптической плотности, в максимуме удельной интенсивности люминесценции в 1,6 раза превышает контрольную.

Удельная интенсивность свечения, характеризующая содержание люциферазы в биомассе, в максимуме свечения культуры, когда биомассу берут для выделения люциферазы, на среде с гидролизатом водородных бактерий превышает контрольную в 2,5 раза.

Данная питательная среда для культивирования светящихся бактерий

Photobacterium leiognathi 213 позСоставитель Т. Журавкина

Редактор M. Недолуженко ТехредС.Мигунова Корректор А. Зимокосов

Заказ 5312/30. Тираж 525

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 1175964 4 воляет повысить выход фермента люци- ния максимальной удельной интенсивфераэы светящихся бактерий за счет ности люминесценции в 3,6-4,4 раза увеличения выхода биомассы и повыше- по сравнению с прототипом..