Питательная среда для выращивания @ @ @ -38-продуцента эзко- @ - @ -ацетилглюкозаминидазы

 

ПИТАТ ЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ BAblLLUS SUBTILIS G-38 ПЮДУЦЕНТА ЭКЗО- N-АЦЕТИЛГЛЮКОЗАМИНИДАЗЫ , включающая источник углерода , источник азота и минеральные соли в виде магния сернокислого и марганца сернокислого и воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения ЭКЗО- 0-Ы-ацетилглюкозаминидазной активности и увеличения выхода готового продукта, она в качестве источника углерода содержит осахаренный крахмал и гидролизат дрожжей, источника aaota - хлористый аммоний, дополнительно вводят тиамин пирофосфат и минеральные , соли в виде натрия фосфорнокислого, калия фосфорнокислого однозамещенного при следующем соотношении компонентов, г/л: Осахаренный крахмал70,0-80,0 Гидролизат дрожжей20,0-25,0 Натрий фосфорнокислый14,0-16,0 Калий фосфорнокислый однозамещенный однозамещенный2,7-2,9 Хлористый аммоний3,5-3,7 сл Магний сернокислый0,062-0,065 Марганец сернокислый0,008-0,009 Тиамин пирофосфат0,05-0, ВодаДо 1 л

.СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТ

Н ILBTOPCICOMV СВИДЕТНЪСТВУ

70,0 — 80,0

20,0 — 25,0

14,0 — 16,0

2,7-2,9

3,5 — 3,7

0,062 — 0,065

0,008 — 0,009

0,05-0,07

До 1 л

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3655285/28 — 13 (22) 23.08.83 (46) 07.06.85. Бюл. Р 21 (72) Т. Ю. Падегимас, В. Д. Паюодис, В. Ю. Авиженис и И. Л. Мармене:. (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной энзимологии (53) 577.17 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Р 1060678, кл. С 12 N 15/00, 1982.

Ana1is de 1а Rea1 Akademia de Farmacia, 1975, 41, 53-157. (54) (57) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ BACILLUS SUBTILIS G — 38—

ПРОДУЦЕНТА ЭКЗΠ— g N — АЦЕТИЛГЛЮКОЗАМИНИДАЗЫ, включающая источник углерода, источник азота и минеральные соли в виде магния сернокислого и марганца сернокислого и воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения ЭКЗО- P -N-аце„, Я0„„1159951 A 4(51) С 12 N )/20, С 12 N 9/24; тилглюкозаминидаэной активности и увеличения выхода готового продукта, она в качестве источника углерода содержит осахаренный крахмал и гидролиэат дрожжей, источника азота — хлористый аммоний, дополнительно вводят тиамин пирофосфат и минеральные соли в виде натрия фосфорнокислого, калия фосфорнокислого однозамещенного при следующем соотношении компонентов, г/л:

Осахаренный крахмал

Гидролизат дрожжей

Натрий фосфорнокислый

Калий фосфорнокислый однозамещенный однозамещенный

Хлористый аммоний

Магний сернокислый

Марганец сернокислый

Тиамин пирофосфат

Вода

1159951

2,7

3,5

0,062

0,008

0,05

До 1 л

Составитель Е. Лаврова

Техред З.Палий

Корректор А. Тяско

Редактор П. Коссей

Подписное

Тираж 525

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 3693/23

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к микробиологичес кой промышленности, в частности к получению питательных сред для выращивания продуцентов ЭКЗО- P - й-ацетилглюкозаминидазы. 5

Целью изобретения является повышение

ЭКЗО- P - N-ацетилглюкозаминидазной активности и увеличение выхода готового продукта.

Для приготовления питательной среды в качестве источника глюкофц используют 10 крахмал, который осахаривают при помощи бактериальной е -амилазы до образования эритродекстранов (красное окрашение с йодом), После этого доводят рН до 4,7 с помощью ортофосфорной кислор, поднимают 15 температуру до 60" С и добавляют глюкоамилазу из расчета 4 ед. активности íà 1 г крахмала. Осахаренне проводят 6 ч. В конечном

1 итоге образуется около 0,92 r глюкозы из

1 r сухих веществ суспензии крахмала, 20

Другие компоненты питательной среды растворяют в воде, объединяют с осахаренным крахмалом, общий объем доводят до 1000 мл.

Устанавливают рН 6,5 с помощью 20 o-ной 25

NaOH. Среду разливают по 100 мл в колбы емкостью 750 мл и стерилизуют 30 мин при

116 С.

Пример 1. Выращивание продуцента 30

ЭКЗО- Р -М-ацетилглюкозаминидазы в колбах.

Для выращивания Baci11us subti1is G — 38 готовят питательную среду следующего состава, г/л:

Осахаренный крахмал 70,0

Гидролизат дрожжей 20,0

Натрий фосфорнокислый 14,0

Калий фосфорнокислый однозамеще нный

Аммоннй хлористый

Магний сернокислый

Марганец сернокислый

Тиамин пнрофосфат

Вода

Питательную среду разливают по 100 мл в колбы емкостью по 750 мл и стерилизуют при 116 С 30 мин. Питательную среду с рН

6,5 засевают Baci11us Subf,i1is G-38, выращенным на ломтиках картофеля. Выращивание продуцента проводят на качалках (180 качаний/мин) при 37 С 8 — 12 ч, На 8 — 12 часу роста продуцента в культуральной жидкости определяют ЭКЗО-P - N- ацетилглюкозаминидазную активность, которая составляет 27 мед/мл. Активность определяют калориметрическим методом, по интенсивности окраски образовавшегося п-нитрофенила при энзиматическом .расщеплении синтетического субстрата п-нитрофенил- P - N- ацетилглюкозаминид.

Пример 2. Выращивание Baci11us

subti1is G — 38 проводят аналогично примеру 1, но на среде следующего состава, г/л:

Осахаренный крахмал 80,0

Гидролизат дрожжей 25,0

Натрий фосфорнокислый 16,0.

Калий фосфорнокислый однозамещенный 2,9

Аммоний хлористый 3,7

Магний сернокислый 0,0065

Марганец сернокислый 0,009

Тиамин пирофосфат 0,07

Вода До 1 л

ЭКЗО- P - N-ацетилглюкозаминидазная активно.ть составляет 27 мед/мл.

Пример 3. Выращивание Baci11us

subti1is G-38 проводят в бродильных установках типа "Биолофит", которые цо своим технологическим параметрам и условиям биосинтеза соответствуют производственным ферментам. Среда аналогична примеру 1, которую стерилизуют при 116 С 30 мин.

Затем питательную среду с рН 6,5 — 6,7 охлаждают до 37 С и засевают нродуцентом. Выращивание проводят при 37 С, аэрации 4 — 5 л, о размешивании 300-400 об/мин. Максимальную активность определяют. на 8 — 12 часу роста продуцента, которая составляет 27

27 мед /мл.