Способ определения резистентности эритроцитов

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ЭРИТРОЦИТОВ путем их разрушения с последующим определением степени гемолиза по выходу гемоглобина, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и чувствительности способа, разрушение эритроцитов проводят импульсным электрическим полем возрастающей напряженности от 1,4 до 3,2 кВ/см.

ссюэ сОВетсних

СОциАлистических

РЕСПИ ЛИК (5!) 4

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТ

Н ABTOPCHOIVlY СВИДЕ П=ЛЬСТБУ госуаа ственный НОмитет сссР

ПО ДЕЛАМ ИЭОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3653589/28-13 (22) 17.10.83 (46) 15.09.85. Бюл. Ф 34 (72) Ф.И.Осташко, В.И.Грищенко, С.А.Гень и И.И.Катков (71) Харьковский медицинский институт и Научно-исследовательский инстцтут животноводства Лесостепи и Полесья УССР (53) 616. 155.1;612. 111(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Ф 923525, кл. А 61 В 10/00, 1978.

„„SU„„11784 0 (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ЭРИТРОЦИТОВ путем их разрушения с последующим определением степени гемолиза по выходу гемоглобина, отличающийся тем,что, с целью повышения точности и чувствительности способа, разрушение эритроцитов проводят импульсным электрическим полем возрастающей напряженности от 1,4 до 3, 2 кВ/см.

1 11784

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а именно к гематологическим исследованиям, и может быть использовано для диагностики различных гемолитических заболеваний, других патологий, сопровождающихся изменением свойств эритроцитов, в частности эритроцитарных мембран.

Кроме того, способ может дать информацию о действии различных. реагентов,O ядов, лекарств на эритроциты как в русле крови, так и об изменениях при хранении и консервации крови.

Цель изобретения - повышение точности и чувствительности способа.

Пример. Предварительно заготавливают 10 пробирок следующей нумерации: "К" "1" "2" "3" "4"

Э У Ф 9 1

"5" "6" "7" "8 ™t100j"

Э Э Э Э о °

В первые 9 пробирок наливают га

9 5 мл физиологического раствора, в пробирку "100%" — столько же дистиллированной воды.

Кровь из вены, пальца или пуповины в количестве 0,8 - 0,6 мл отмывается от плазмы по стандартным мето\ дикам фчзиологическим раствором.

Затем 0,25 мл уплотненных эритроцитов смешивают с 25 мл изотонического раствора 9Х сахарозы íà Ма-фoсфaт- 30 ном буфере или трис-буфере (рН ф 7,4).

Из полученной суспензии отбирают равные объемы и обрабатывают на любой установке, позволяющей получить в объеме 1-2 смз импульсное однород35 ное электрическое поле с прямоугольной формой импульса. Рекомендуемый размер рабочей камеры — 2 смз. Длительность импульса 300 мкс. Напряженность поля увеличивают от 1,4 до 4О

3,2 кВ/см. Обработанные клетки в объемах по 0,5 мл помещают в соответствующие, заранее подготовленные ,.пронумерованные пробирки. Напряженности поля, соответствующие номерам

10 пробирок; следующие, кВ/см; 1 пробирка 1,4 № 2 — 1,6, № 3 — 1;8," № 4 2,0; ¹ 5 2,2; № 6 - 2,4; ¹ 7"100X" помещают по 0,5 мл необработанных полем клеток из той же суспензии, Пробирки перемешивают и центрифугируют при 3000 у. 10 мин. Содержание гемоглобина в надосадках определяют по оптической плотности при длине волны 410 нм на СФ-26. При этом нет необходимости количественно определять точную концентрацию гемоглобина. Процент гемоглобина вычисляется для каждой интенсивности поля по формуле

Т гемолиеа= — 1007., 100 где П вЂ” показание регистрирующего

1 прибора для данной пробирки

D — показание прибора для про10д бирки 100Х (с дистиллированной водой), Пробирка "К" — контроль, процент гемолиза для здоровых доноров при соблюдении методик не должен превышать

2,5-3Х.

Данные определения резистентности эритроцитов крови из пуповины новорожденного Б представлены в таблице.

Для пробирки 3 (поле 1,8 кВ/см) оптическая плотность 0,140. Для пробирок со 100Х. гемолизом оптическая плотность оказалась 0,680. Тогда для данной пробирки степень гемолиза будет равна

О 140

7 гемолииа- - " — — .100Å=20,597.

0,680

Резистентность эритроцитов новорожденного находится в пределах физиологической нормы, E

2-2-2Я

1,4 0,070, О, 055, 0,060

1,6 0,07510,080; 0,065

2,16 1,47; 1,76 1,8

10,29; 8,09, 8,82 9,1

11,03; l1ü 76; 9156 10э8

1178410

Продолжение таблицы

25,74; 20,59; 25,47 23,9

3-3-3 я

4-4 -4"

49 ° 26; 51 э 47; 52э 21

51,0

5-5-5

6-6-6

7-7-7"

2,8 О, 650; 0,655; 0,640

8-8 -8"

3,2 0,680; 0,695; 0,680

100,0; 100,0 99,26

99,8

100, О; 100, О; 100, О 100, О

Составитель Н.Гуляева

Редактор Т.Митейко Техред H.Àñòàëîø Корректор Е.Сирохман

Заказ 5579/4 Тираж 722 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д . 4/9

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул..Проектная, 4

1 8 О 175; О 140, О 180

2,0 0,335;0,350; 0,365

2,2 0,500; 0,480; 0,460

2,4 0 595 0,610; 0,620

100-100- 100" .НаО 0,680; 0,680; 0,680

73,53 70,59; 67,64 70,6

87,50; 89,71; 91,18 89,5

95,59, 96,32 94,12 95,3