Способ постановки реакции коагглютинации
СПОСОБ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ КОАГГЛЮТИНАЦИИ, включающий предварительную сенсибилизацию клеток стафилококка Cowan 1 специфической к исследуемому антигену сывороткой с последующим добавлением к полученному диагностикуму исследуемого антигена, инкубированием и учетом результатов реакции, о т л и ч а ющ и и с я тем, что, с целью повышения чувствительности и упрощения способа, сенсибилизацию стафилококка проводят сывороткой в разведении, предельном для данной реакции, проводимой на стекле, а реакцию ставят на планшетах с U-образным дном (Л лунок.
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН (19у (I I) SU (51)4 G 01 N 33/48
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ABTOPGHO5hV СВИДЕТЕЛЬСТБУ
УЙ%
° °
° °
ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬП ИЙ (21) 3727251/28-13 (22) 16 ° 04.84 (46) 30.09.85. Бюл. М-" 36 (72) IO.À. Белая, С.В. Прозоровский, С.М. Быстрова, О.Ф. Белая и В.Г. Петр ухи н (71) Научно-исследовательский ордена Трудового Красного Знамени институт эпидемиологии и микробиологии им. почетного акад. Н.Ф. Гамалеи (53) 6 616-07 (088. 8) (563 Nedit inc Microbiology, 1974, 6, р. 187-190. (54) (57) СПОСОБ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ
КОАГГЛЮТИНАЦИИ, включающий предварительную сенсибилизацию клеток стафилококка Cowan 1 специфической к исследуемому антигену сывороткой с последующим добавлением к полученному диагностикуму исследуемого антигена, инкубированием и учетом результатов реакции, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения чувствительности и упрощения способа, сенсибилизацию стафилококка проводят сывороткой в разведении, предельном для данной реакции, проводимой на стекле, а реакцию ставят на планшетах с 0 -образным дном лунок, 11
Иэ обр ет ение относится к микробиологии и иммунологии, в частности к клинической микробиологии и иммунологии, и предназначается для диагностики инфекционных болезней и выявления специфических антигенов в экспериментальных исследованиях.
Целью изобретения является повышение чувствителььости и упрощение способа.
Способ осуществляют следующим образом.
Используют коммерческую или специально приготовленную кроличью сыворотку, специфическую к исследуемому антигену. Готовят двукратные ее разведения на фосфатно-солевом буфере (ФСБ) рН 7,4 от 1:2 до
1: 10000..0, 1 мл каждого разведения сыворотки смешивают с 0,9 мп 10Х-ной взвеси формалинизированного стафипококка (0,5X формальдегида, 37 С вЂ” 3 ч), t. пр огр ет or о (80 С вЂ” 1 ч1 штамма о
l Staph. aureus Cowan 1. Смесь сыворотки и стафилококка тщательно перемешивают в течение 1-2 мин при комнатной температуре и доводят ,ФСБ до 17-ной концентрации. Конечс;... ные разведения сыворотки в этих диагностикумах составляют от 1:200 до 1: 1000000.
На обезжиренные предметные стекла расчерченные карандашом по стеклу, наносят по 1 капле диагностикума. и 1 капле тест-антигена, взятого в концентрации 1 мг/мл и далее в
-1 десятикратных разведениях от 10 до 10 Змг/мп. Смесь осторожно перемешивают покачиванием стекол в течение 2-5 мин и учитывают результат.
Предельное разведение сыворотки, при котором полученный на ее основе диагностикум дает отчетливую (на 2 + и 3 ) PKA на стекле, используют для приготовления диагностикума для реакции кцагглютинации на планшетах.
Для этого 0,1 мл подобранного разведения сыворотки смешивают с .0,9 мп 107-ной взвеси стафилококка, перемешивают и разводят 10,0 мл
82400 г
ФСБ. На полистироловые планшеты с 0 -образным фном лунок помещают по 1 капле диагностикума и по 1 капле исследуемого антигена, взятого в различных разведениях от 10 до 10 мг/мл.
Планшеты осторожно встряхивают, инкубируют во влажной камере при
37 С 2 ч, затем оставляют при комо
10 наткой температуре во влажной камере на 4-18 ч. Учет результатов реакции осуществляется по 4 -крестМ ной системе: 4 + — равномерный
"зонтик" по всему дну лунки, 3„
15 зонтик по всему дну, в центре небольшой осадок стафилококка, 2+небольшой "зонтик" и осадок стафилококка, 1> — маленький "зонтик" вокруг значительного осадка стафило20 кокков, отрицательно — отсутствие
"зонтика" при выраженном осадке стафилококков в центре лунки, надосадочная жидкость прозрачна.
Пример. Сравнительное опре25 деление чувствительности реакции коагглютинации на стекле и планшетах.
А. Определение растворимых антигенов легионелл. В реакции коагглютинации на планшетах и на стекле был испытан липополисахарид (ЛПС)
pneumophifae 1 серотипа в концентрации 1 мг/мл и последующих десятикратных разведениях до
10 мг/мл. Для приготовления диагнос35 тикума для постановки PKA на планшетах использовались кроличьst сыворотка против легионелл того же штампа в конечном разведении 1=10000 °
Результаты постановки PKA на план=
40 шетах и стеклах представлены в .таб-. лице. Установлено, что чувствительность PKA на планшетах значительно, на 3 порядка, выше, чем при постановке ее на стекле. При этом для
45 приготовления диагностикума для РКА на стекле необходимо брать конечные разведения сыворотки не более чем
1:500, для PKA на планшетах—
1:10000, т.е. в 20 раз меньшие коли чества.
1182400
Определение ЛПС легионелл в реакции коагглютинации
Разведения ЛПС/мг/мл
Способ постановки
Конечное реакции
1: 500 4 4
+ с
На стекле
1: 10000 4g 4+ 4 3 1у 1 . 1а планшете
Составитель В.Дроздов
Редактор А.Лежнина Техред А.Кикемезей Корректор N.Самборская
Заказ 6098/42
Тираж 896 Подпис ное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 разведение сыворотки в диагностикуме
-2 -3 -4 -5 -6 -7 -8
