Среда для разбавления криоконсервированной спермы хряков

 

СРЕДА. ДЛЯ РАЗБАВЛЕНИЯ КРИОКОНСЕРВИРОВАННОЙ СПЕРМЫ ХРЯКОВ, содержащая цитрат натрия, цитрат калия , пируват натрия, унитиол и бидистшшированную воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения подвижности продления времени переживания и повышения оплодотворяющей способности сперматозоидов, она дополнительно содержит фруктозу, инозитол, сернокислый магний и хлористый кальций при следующем соотношении ингредиентов (в г на I л биднстшшированной воды).: 15,00-25,00 Фруктоза 15,00-25,00 Инозитол Цитрат нат2 ,65-2,80 рия 0,60-0,85 Цитрат калия Пируват 2,00-3,00 натрия Хлорисгый (Л 0,10-0,20 кальций Сернокислый 0,12-0,36 магний 0,20-0,30 Унктиол БидистиллироОстальное ванная вода

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (l 9) (l1) (51)4 А 61 Р;7/02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМ .Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

О, 10-0,20

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3771333/30-15 (22) 26.04.84 (46) 15.11.85. Бюл. Р 42 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт разведения и генетики сельскохозяйственных животных (72) Л.Г.Mopos, И.Ш.Шапиев и Н.В.Корбан (53) 636.082.453.5(088.8) (56) Larsson К., Einarsson $. "The

development of à practicale method

for deep freezing of boor", Nord

veter. med., 1977 г., 29,3; 313-318.

Методические рекомендации по низкотемпературной консервации спермы хряков. Л., 1980, с. 26, 48. (54)(57) СРЕДА ДЛЯ РАЗБАВЛЕНИЯ

КРИОКОНСЕРВИРОВАННОЙ СПЕРМЫ ХРЯКОВ, содержащая цитрат натрия, цитрат калия, пируват натрия„ унитиол и бидистиллированную воду, о т л и ч а ющ а я с я тем, что, с целью повышения подвижности продления времени переживания и повышения оплодотворяющей способности сперматозоидов, она дополнительно содержит фруктозу, инозитол, .сернокислый магний и хлористый кальций при следующем соотношении ингредиентов (в г на 1 л бидистиллированной воды)3 фруктоза 15,00-25,00

Инозитол 15,00-25,00

Цитрат натрия 2,65-2, 80

Цитрат калия 0,60-0,85

Пируват натрия 2,00-3,ОО

Хлорисгый кальций

Сернокислый магний О, 12-0,36

Унитиол 0,20-0,30

Бидистиллированная вода . Остальное

1191073 2 концентрации эТих компонентов снижа т переживаемость сперматозоидов.

Фруктоза и иноэитол — основные неэлектролитные компоненты плазмы спермы хряка, служат энергетическим материалом для гликолиза. Инозитол, кроме того, выполняет роль осмотического регулятора в сперме. Замена глюкозы в среде на сочетание фрук-!

0 тозы и инозитола увеличивает пере. живаемость сперматозоидов на 33% (7,7 ч против 5,8 ч в среде с глюкозой и на 71Х по сравнению с временем переживания в известной среде.

15 Допустимые пределы концентрации

5, фруктозы и инозитола 15-25 г/л, Увеличение и уменьшение концентрации инозитола и. фруктозы снижает переживаемость спермы.

Пример 3. Было проведено сравнительное испытание контрольной среды (прототип), среды- СЛЕП {аналог) и новой среды, содержащей оптимальные количества компонентов в г на 1л: фруктоза 25, инозитол 15, цитрат натрия 2,76, цитрат калия 0,65, пируват натрия 2,20, сернокислый магний 0,24, хлористый кальций О,IO> унитиол 0,21 среда ФИП).

Концентрированный эякулят после отгаиваиия делили на части, разбав20

Необходимость введения дополнительных ингредиентов в известную среду обоснована следующим. Пируват натрия " субстрат дыхания,- концентрация которого является лимитирукицим фактором, регулирующим энер- 40 гетический обмен. Пируват натрия в сочетании с ионами Са " и Ng участ+ + вует в регуляции проницаемости и транспортной функции мембран спермиев, АТФ-азной активности, акросом- 45 ной реакции, в процессе оплодотворения. Введение пирувата натрия в среду позволяет увеличить время переживания спермиев íà 19Х {табл. Ig колонка 2). Увеличение концентрации 50 пирувата натрия в среде до 2,203,30 г/л и одновременное введение в среду сернокислого магния 0,24 г/л и хлористого кальция 0,10 г/л позволяет увеличить переживаемость спер- 55 матозоидов на 20Х в сравнении с известной средой (5,8 ч против 4,5 прототип), Дальнейшее увеличение

ОЛЕП.

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, преимущественно к средам для разбавления криоконсер" вированной,спермы хряков.

Целью изобретения является повышение подвижности, времени переживания и оплодотворяющей способности сперматозоидов.

Пример 1. Предлагаемую среду готовят следующим образом. 1 литр биднстиллированной воды нагревают до кипения и в горячей воде растворяют, г: фруктоза 25, инозитол 15, цитрат натрия 2,76, цитрат калия 0,6 сернокислый магний 0,24, хлористый кальций 0,1, остужают до 40 и добавляют пируват натрия 2,20, унитиол 0,21. Депрессия точки замерзания среды 0,62-0,65, рН 7,47,8.

Приготовленной средой разбавляют оттаянную концентрированную сперму в отношении 1:3 или 1:4 при температуре среды 37 С.

Пример 2, В табл. I представлены результаты подбора оптимально го соотношения компонентов новой среды, согласно которым наиболее высокая переживаемость сперматозоидов хряков (7,2-7,7 ч) наблюдается при соотношении компонентов, перечисленных в колонках 10 и 11. ляли исследуемыми средами в отношеФ нии 1 3 и оценивали по физиологическим и биохимическим показателям и оплодотворяющей способности. Результаты сравнительного испытания новой и известной сред, n = -20 представлены в табл. 2..

Как видно из табл. 2, новая среда

ФИП превосходит известную (прототип) и ОЛЕП по проценту подвижных сперматозоидов через 3 ч хранения в ней в 6 и 11 раз соответственно, по времени переживания на 71 и IООХ и сохранности акросом на 4 и 6Х соответ" ственно. Величина стимуляции дыхания спермиев 2,4-динитрофенолом (ДНФ }, характеризующая функциональное состояние энергетической системы, в новой среде равна 2,5 против 1,8 и

1 6 в контрольной среде и среде

Оппсдотворяемость свинома1ок при использованли замороженно-оттаянной спермы, разбавленной предлагаемой редой, составляет 64,1Х,что на 29 выше, чем в контроле (P 0,05), 1191073

I

I

I CV

1 1

i I

1 —, 1 сс3 ьО

° Ь, ь

Ю сЧ л

СЧ

° Ь о о ю сЧ

ЬЬ ° Ь о о сЧ

Ю л о а ьО л а сЧ сЧ сс 3

ЧЪ

° Ь о. о

ЬЬ

CV сЧ

D л о

Ь\ а ьО

° Ь сЧ о сЧ л сЧ и ьО

° Ь ь сЧ

° Ь ь и

««сЧ

ЬЬ ЬЬ о о л

° Ь л сс 3

° Ь

D . о сЧ

Ю сЧ ьО л

Ф сЧ сЧ л о о

Ю о и сЧ.

° Ь ь

1 1

1 Оi I

1 I сО

I I ь сЧ

Ю сЧ О

3 ъ

° Ь сч

Щ ьО

° Ь о

Ф сЧ

° Ь о о

° Ь о

Щ сЧ

Ф о ь

ЬЬ О

О сс3 л ьО

A Ю сч о

CO л ь ь сь

ЬЬ о

all сЧ

ФЬ о сО

Ю ьО с 3

ЬЬ. о О л л сЧ

УЪ О

ЬЬ о о сьев

ЬЬ сь 3 о сЧ.

ЬЬ

D сс3 сЧ

Ю ь сЧ

Ю ссъ сЧ

Ю, ь сс ьО

° Ь

D о сЧ

° Ь

CV о

° Ь о

2 сЧ л

Ю е

Ф сЧ

ЬЬ

О ь л сЧ ьО л л сЧ л ьО

° Ь ь о

° Ь о а

° Ь ь сГ3 сЧ

ЬЬ

D О л л сЧ r

3Г3 сс

Ю л о

Ф Ц . Ц 1 н е о е C4

OI с3

Ф . Ol «C

С3 О сГ3 CJ Щ

ЬЬ &Ь

4g О

О 39

333 333

О Е

Щ Щ

333 333 ссъ

ЬЬ

D ьО л

° Ь сЧ сГ3 ьО

ЬЬ

D сс сЧ

D сЧ

1 ! —

1

I 1 ьО

3 ъ

Ю. сЧ сс1 ьО

Ю сс3 сЧ

° Ь

D (O

Ф сс3 ф Ds с!3

l !

Ф !

I о

%3

И б

3 ж

Ф I, Ж

X I о

1 са

3ь

m о ф ЬЬЬ

atI о

М

Я сь

I! л 1

I 3 — — 3!

4 1

1 ф I,О

I 1

333 1

I I

31Л

Ь 1

CC3 J1

Ф 1

pl I

Ь4 (I сс3 сО

О сЧ ю о с 1 о

D о о о о о о о о О л о л

О О. сЧ

Ю о о

Ю о о ь а о о о а о о о а сЧ сЧ

ЬЬ Ю ° Ь о о о I

3 6 55

53 Й. О."

И 3-:Ь CCI l о

+1 +1

Л 333 л

1191073

Таблица 2

, Переживаемо сть, ч,.

Среда

М

D+md

Контрольная

ГХЦКУ

34,3

34,8+9,90

64,1+7,70

0,14

4,5

l,8

0,80

2,5

30,00

4,3+1,41

7,7

Новая ФИП

0,66+0,039 3 210,88 0,7+0,24

36,0

+.% %

53-5 7

1,6

0,07

3,8

ОЛЕП ан алог — различия достоверны при Р 0,05

" — различия достоверны при P 0,01 — по литературным данным

Составитель А.Филиппова

Редактор М.Митейко Техред З,Палий Корректор E Ñèðîõìàí

Заказ 7048/4 Тираж 721 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Подвижность через

3 ч, балл, M

D+md

Стимуляция ды хания

2, 4-дпФ

М

?Н-шй

Поврежденные ахросомы, Х

D+md плодот воряемость, Ж

М

M+m