Способ выявления антигенов и специфических антител в биологических жидкостях при одномоментном исследовании

 

СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИГЕНОВ И СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ ПРИ одаомомЕнтном ИССЛЕДОВАНИИ путем инкубирования в геле «сследуемой жидкости с антигеном и специфической к нему-антисыворотЬой с последующим, определением полос преципитации, о тл и - чающийся тем, что с целью повьшения чувствительности спЬсоба, инкубирование исследуемой жидкости антигейа и специфической антисыворбтки осуществляется в постоянном электрическом поле с напряжением 1-5 В/см, при этом лунки в контактном геле, содержащие исследуемую жидкость, располагают между зонами i I геля с антигеном и геля с антисывороткой .W

COOS СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

„„SU„, 1194423

А аи4 А61 К39 00

ГОСУДа СТВКННЫЙ HOMHTET CCCP пО ДЕЛА ИЗОБРЕТЕНИЙ V ОТНР П ИЙ .

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ВСЕЦЦ() щ g : - :,:." : i) . jy" ""- 4М

KNG Jt H9 gp (2 i ) 3597023/28-14 (22) 25.05.83 (46) 30.11.85. Бюл. Ф 44 (7 1) 2-й Московский ордена Ленина государственный медицинский институт им. Н.И. Пирогова (72) Т.В. Беликова, А.А. Терентьев и О.С. Комаров (53) 615.373(088.8) (56) Храмкова И.И., Абелев Г.И.

Пределы чувствительности метода преципитации в агаре. Бюллетень экспериментальной. биологии. 1961, Ф 12, с. 107-109. (54)(57) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИГЕНОВ

И СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ В БИОЛОГИ-.

ЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ HPH ОДНОМОМЕНТНОМ

ИССЛЕДОВАНИИ путем инкубирования в геле исследуемой жидкости с антигеном и специфической к нему. антисыворотКой с последующим определением полос преципитации, о т л и - . ч а ю шийся тем, что с целью повышения чувствительности способа, инкубирование -исследуемой жидкости антигена и специфической антисыворотки осуществляется в постоянном электрическом поле с напряжением

1-5 В/см, при этом лунки в контактном геле, содержащие исследуемую жидкость,-располагают между зонами геля с антигеном и геля с антисывороткой;

1194423

Составитель Г.Крюкова

Техред О. Неце

Корректор М. Самборская

Редактор Т.Митейко

Тираж 721 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35; Раушская наб., д. 4/5

Заказ 7342/7

Филиал ППП "Патент"., г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к биохимии, а именно к способам иммунохимическога определения антигенов и специфических антител в биологических жидкостях.

Цель изобретения — повьппение чувствительности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

11а стеклянную пластину равномерным слоем заливают гель агарозы в 0,05 M веронал-мединаловым буфере, рН 8,б, причем на одну сторону пластины заливают гель, содержащий специфическую антисыворотку к исследуемым антигенам, на противополож, ную сторону-полоску геля с антигеном„ а между ними, в слое контактного геля, располагают лунки для исследуемых образцов биологических жидкостей. Затем подготовленную пластину помещают в специальную камеру для иммуноэлек рофореза и производят электрофорез в постоянном электрическом поле с напряжением

1-5 В/см в течение 15-20 ч. При этом положительный полюс располагают со стороны геля с антисывороткой, а отрицательный — со стороны геля . с антигеном. Марка агарозы, выбираемой длл исследования, зависит от подвижности определяемых антигенов.

Концентрации аптигена и сыворотки в геле подбирают эмпирически в зависимости от вида антигена и .качества антисыворотки. При отсутствии антигенов и антител в исследуемом биологическом материале линия преципитании будет иметь вид.прямой, параллельной полоске геля с антигеном, если в исследуемом материале присутствует антиген, иммунохимически идентичный тестируемому, то линия преципитации сместится к аноду в виде пика, при наличии в пробе антител, специфических тестируемому антигену-пик в сторону катода. Высота пиков прямо пропорциональна концентрации антигенов или антител в исследуемых биологических жидкостях

Пример. На пластину равномерным слоем заливают гель агарозы в 0,05 М веронал-мединаловом буфере, 1О рН 8,6, причем на одну сторону пластины — гель, содержащий 57 антисыворотки против органоспецифического антигена сетчатки, а на противоположную сторону-полоску геля

15 с экстрактом сетчатки. Между ними в слое контактного геля располагают лунки с исследуемыми образцами (экстракт сетчатки, антитела к органоспецифическому антигену сетчатки, 20 сыворотку больного увеитом, содержащую органоспецифический антиген сетчатки, сыворотку крови больного хориоретинитом, содержащую антитела к органоспецифическому антигену

25 сетчатки, сыворотку донора). Подготовленную пластину помещают в камеру для иммунозлектрофореза и проводят иммуноэлектрофорез с напряжением электрического поля 3 В/см

Зц в течение 18 ч.

По окончании электрофореза на пластине получена линия преципитации, имеющая пики, направленные в сторону положительного полюса, и впадины, направленные в сторону отрицательного полюса. По величине полученных пиков и. глубине впадин опре- делена концентрация антигена и антител. ,,О Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить чувствительность определения антигенов до 100200 нг/мл и антител до 200-400 нг/мл, т.е. в 10 раз по сравнению с прототипом.