Способ определения резистентности организма

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА, включющий определение активных и неактивных нейтрофилов с последующим подсчетом в них показателя резистентности, отличающийся тем, что, с целью повьшения точности способа, дополнительно определяют в крови общее количество лейкоцитов, общее содержание нейтрофилов, активность лизоцима и содержание агглютинина, подсчитывают показатель резистентности для каждого показателя крови, сумм1 руют и при общем показателе резистентности ниже 110 определяют сниженную резисS тентность, а при его значении вьш1е (Л 140 - повьпиенную резистентность.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (! 9) (1!), (s()4 А 61 К 39/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТ

Н ABTOPGHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ.И ОТНРЫТИЙ (21) 3573795/28-13 (22) 07.04.83 (46) 23.09.85. Бюл. ¹ 35 (72) В.В.Ткаченко, Г.И.Евтушенко, В.А.Никитин, Г.Ф.Катурова, В.П.Голик, Л.П.Воропаева и С.Н.Пакулов (71) Харьковский медицинский институт (53) 6 15.373 (088.8) (56) Берман В.Б., Славская Е.M.

Завершенный фагоцитоз — новый методический принцип изучения завершенной фагоцитарной реакции. — Медицина.

Эпидемиология. Иммунология, 1958, ¹ 3, с. 8-13. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА, включющий определение активных и неактивных нейтрофилов с последующим подсчетом в них

:показателя резистентности, о т л и— ч аю-щий с я тем, что, с целью повышения точности способа, дополнительно определяют в крови общее количество лейкоцитов, общее содержание нейтрофилов, активность лизоцима и содержание агглютинина, подсчитывают показатель резистентности для каждого показателя крови, суммируют и при общем показателе резистентности ниже 110 определяют сниженную резистентность, а при его значении выше

140 — повышенную резистентность.

1. 1180000

Изобретение относится к медицине, ка в частности к иммунологии, и может ча быть использовано для прогнозирова- щи ния, профилактики и лечения несге- Пе цифических заболеваний различной эти- 1 жи ологии, ти

Цель изобретения — повышение точ- кл ности способа определения резистент- но ности организма. по

Способ осуществляют следующим 10 по образом.

С+ d.

У обследуемого осуществляют забор пробы крови из концевой фаланги пальца при помощи меланжера до отметки

0,5. Затем в этот же меланжер дополнительно вводят до отметки 1, 1 разбавляющую жидкость, представляющую собой ЗЖ-ный раствор уксусной кислоты, окрашенный 1%-ньм раствором метиленовой сини. Затем, осуществляя колебательные движения меланжера в течение трех минут, перемешивают находящиеся в нем жидкости. Полученную смесь вводят в камеру Горяева и общепринятым способом осуществляют подсчет лейкоцитарных клеток. Для этого параллельно с забором пробы крови для определения общего. количества лейкоцитов у обследуемого берут мазок крови путем нанесения капли крови на предметное стекло с последующим распределением ее по предметному стеклу специальным шлифованным стеклом. Полученный мазок высушивают, фиксируют, .красителем, приготовленным по мето- 35 ду Май-Гронвальда, и окрашивают по методу Романовского-Гимзе.

Получечный мазок промывают, высушивают на воздухе и производят подсчет форменных элементов лейкоцитар- 40 ной формулы под микроскопом с иммерсионной системой.

Далее приступают к определению фагоцитарной активности нейтрофиловфагоцитов по методу Бермана и Слав- 4> ской, основанному на фазности фагоцитарной реакции. Для этого в центрифужную пробирку, содержащую 0,3 мл пробы крови, вносят О, 1 мл 37-ного раствора цитрата натрия. Пробирку цвнтрифугируют 20 мин со скоростью

500 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, а в осадок вносят 0 1 мл .10 миллиардной взвеси Рас. Co1i (штамм 276) и термостатируют при о

37 С в течение 45-60 мин при встряхивании взвеси через каждые 15 мин.

После термостатирования несколько пель взвеси переносят на агар в шку Петри и распределяют лри помопредметного стекла. Затем чашку три помещают в термостат и выдервают 2 ч при 37 С, После термостао рования к поверхности агара приадывают слегка прижимая обезжирене подогретое предметное стекло, сле чего стекло быстро снимают, лученный мазок высушивают, фиксируют и окрашивают методом, аналогичным использованному при окраске препарата для подсчета лейкоцитарной формулы, и исследуют под микроскопом с иммерсионной системой с целью подсчета количества активных нейтрофилов, т.е. нейтрофилов, в прото- плазме которых были обнаружены микробные тела, и неактивных нейтрофилов, т.е. захвативших микробных тел.

Суммарное количество активных и неактивных нейтрофилов не превышает

100 нейтрофилов. Затем в активных нейтрофилах подсчитывают количество жизнеспособных и нежизнеспособных микробных тел. На основании полученных результатов вычисляют фагоцитарное число по формуле

100 а в где ц — количество активных нейтрофилов;

Ь вЂ” количество неактивных нейтрофилов; фагоцитарный индекс по формуле

С + d где — количество жизнеспособных микробных тел; д — количество нежизнеспособных микробных тел; и коэффициент завершенности фагоцитоза по формуле.Затем в сухую центрифужную пробирку помещают 0 5 мл крови и получают сыворотку путем центрифугирования со скоростью 1500 об/мин. В отдельную пробирку отбирают 0,2 мл полученной сыворотки и добавляют в нее

1,8 мл 0,57.-ного раствора хлорида натрия (для получения разведения сыворотки 1:10) и тщательно перемешивают. Затем в шесть отдельных пробирок

1180000

Т\

100Х вЂ” -- — --« - 100Х

Эк — D )со

Do D(Dî где L — активность лизоцима;

D — оптическая плотность до о термостатирования в пробе;

D, — оптическая плотность после термостатирования в пробе; наливают по 1 мл 0,57-ного раствора хлорида натрия. Из пробирки, содержащей сыворотку в разведении 1:10, от- . бирают 1 мл и наносят на первую про5 бирку (1 ), содержащую чистый физиологический раствор, перемешивают, отбирают из нее 1 мл и вносят его в следующую (Il ) пробирку и т.д. аналогичным образом до последней пробирки, 10 из которой после перемешивания отбирают 1 мл с целью достижения равенства объемов во всех исследуемых пробирках.

В каждую из пробирок вносят бактериальную смесь, приготовленную следующим образом.

В пробирку со скошенным мясопептонным агаром вносят культуру Вас. Co1i (штамм 276) и пробирку помещао . ют в термостат ($ =37 С) на 24 ч.

Через 24 ч известным способом готовят 10-миллиардную взвесь бактерий.

В каждую пробирку с указанным разведением сыворотки вносят по две 25 капли полученной взвеси бактерий с последующим выдерживанием их в термостате при 37 С в течение 24 ч. о

Через 24 ч определяют титр нормального агглютинина по последней щ пробирке, в которой еще обнаруживают агглютинат.

После этого приступают к определению активности лизоцима. Для этого из оставшейся сыворотки отбирают

О, 1 мл и вносят в пробирку, содержащую 4,9 мл 0,5Х-ного раствора хлорида натрия. В эту же пробирку затем вносят 1 мл 10-миллиардной взвеси бактерий М.Lysodcticus, перемешивают и осуществляют первичное фотоколориметрирова..me. Затем пробирки с бактериальной взвесью термостатируют при 37 С в течение трех часов

0 и повторно фотоколориметрируют. При 4 этом в качестве контроля используют физиологический раствор, содержащий

1О-миллиардную взвесь M.Lósodåñй спз без сыворотки. Активность лизоцима вычисляют по формуле

1,2,..., 2, показатель резистентностн; относительный статистический вес 1 -го показателя; где

k, а, — величина -ro показателя

1 у пациента в момент обследования; а. — известная из практики ве1 I личина i -ro показателя., соответствующая наименьшей реэистентности оргак ниэма; а — известная из практики ве1 личина > -го показателя, соответствующая наибольшей резистентности организма.

При значении показателя резистентности ниже 110 определяют сниженную резистентность, а при его значении вьппе 140 †.повышенную резистентность.

Величины относительных статистических весов (К) каждого из семи показателей приведены в таблице

Показатель

Коэффциент завершенности фагоцитоза

Фагоцитарное число

Общее содержание нейтрофилов 25

Активность лизоцима

Содержание агглютинина

Общее число лейкоцитов

Фагоцитарный индекс

Пор и м е р 1. "..ольного К. с диагнозом: острый язвенно-некротический

Р— оптическая плотность до терко мостатирования в контроле;

Рк, — оптическая плотность после термостатирования в контроле.

Показатель резистентности вычисляют по формуле:

I с,— k;(а — а, ) ак — ач Р

i 180000!

0,40

160

3,4

Составитель Г.Крюкова

Редактор Н.Бобкова Техред А.Кикемезей

Корректор А.Тяско

Заказ 5782/3 Тираж 721 Подписное

ВНИИПИ Гасударственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", r.Ужгород, ул.Проектная,4 гингивостоматит обследовали с целью определения резистентности предлагаемым способом.

Показатели крови

Общее число лейкоцитов, лейкоцитарные клетки/л 13,5- 10

Общее содержание нейтрофилов,% 74

Активность лизоцима,X 23

Содержание агглютинина, титр 80

Фагоцитарное число,X 40

Фагоцитарный индекс,ед 6

Коэффициент завершенности фагоцитоза

Вычисленный показатель резистентности составил 74,72.

Следовательно, у больного была 20 оценена сниженная резистентность орга изма. Резистентность организма, оцененная по известному способу, также оказалась сниженной.

Иосле проведенного лечения у больного наблюдалась полная эпителизация элементов поражения. В этот период у него повторно была определена резистентность. ЗО

Показатели крови:

Общее число лейкоцитов, лейкоцитарные клетки/л 6,7" 109

Общее содержание нейтрофилов,X 63

Активность лизоцима,% 79

Содержание агглютини-, на, титр

Фагоцитарное число,X

Фагоцитарный индекс,ед.

Коэффициент завершенности фагоцитоза 0,78

Вычисленный показатель резистентности составил 126,6.

У больного была оценена нормальная резистентность. При оценке резистентности по известному способу она по-прежнему оставалась ниже нормы.

Больной К. был вызван для контрольного осмотра через две недели после полной эпителизации элементов поражения.

Показатели крови:

Общее число лейкоцитов, лейкоцитарные клетки/л 6,8 ° 10

Общее содержание нейтрофилов, % 67

Активность лизоцима,X 84

Содержание агглютинина, титр 160

Фагоцитарное число, % 75

Фагоцитарный индекс,ед., 3,2

Коэффициент завершенности фагоцитоза 0,93

Вычисленный показатель резистентности составил 14 1,0. Оценена повышенная резистентность организма. По известному способу резистентность была оценена также повышенной.

Положительный эффект предлагаемого способа подтверждается тем, что из 16-ти обследованных больных предлагаемым способом результаты оценки резистентности в норме. В то же время определение резистентности известным способом позволило лишь у шести обследованных лиц установить нормаль" ную резистентность, у остальных было показано снижение резистентности, что составляет 37,5% случаев.

Следовательно, использование предлагаемого способа повышает точность определения резистентности организма по сравнению со способом, основывающимся на определении коэффициента завершенности фагоцитаза, в 2,7 раза.