Способ стимуляции полиморфоядерных лейкоцитов

 

СПОСОБ СТШУЛЯЦИИ ПОЛИМОР .ФОЯДЕРНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ путем постановки реакции миграции полиморфоядерных лейкоцитов в агарозе в присутствии стимулятора с последующим учетом полученных результатов, отличающийся тем, что, с целью повышения функциональной активности лейкоцитов и ускорения способа, в качестве стимулятора используют аскорбиновую кислоту в конечной концентрации ее в агарозе 7-12 мг.% при этом аскорбиновую кислоту добавляют непосредственно в агарозу и реакцию ставят в Течение 2,5-3 ч. с S

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (19) (11) 151) g G О1 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ и

Н ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ. СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21), 3562985/28-14 (22) 14.03.83 (46) 30. 11.85. Бюл. 11- 44 (71) Киевский ордена Трудового

Красного Знамени научно-исследовательский институт туберкулеза, пульмонологии и грудной хирургии им. акад.

Ф.Г. Яновского (72) Е.Ф. Чернушенко, В.А.. Шатров, Л.В. Кузнецова и Т.И. Беляновская (53) Ь616-07(088.8) (56) Gather Е.N.S., Anderson R..—

Clinical and Experimential Immunology, 1980, 40, 1,- 2, р. 327-336. (54) (57) СПОСОБ СТИМУЛЯЦИИ ПОЛИМОР;ФОЯДЕРНЬИ ЛЕЙКОЦИТОВ путем постановки реакции миграции полиморфоядерных лейкоцитов в агарозе в присутствии стимулятора с последующим учетом полученных результатов, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью повышения функциональной активности лейкоцитов и ускорения способа, в качестве стимулятора используют аскорбиновую кислоту в конечной концентрации ее в агарозе 7-12 мг.Х при этом аскорбиновую кислоту добавляют непосредственно в агарозу и реакцию ставят в т .чение 2,5-3 ч.

1! 95245

Изобретение относится к медицине,: а именно к иммунологии, и может быть использовано в клинической практике для определения состояния функциоHcLTlbHoff активности полиморфоядерных лейкоцитов (далее ПЛ) у больных с легочной патологией.

Цель изобретения — повышение функциональной активности лейкоцитов и ускорение способа.

Способ осуществляют следующим образом.

У пациентов из пальца берут каплю крови в гепаринизированные стандартные стеклянные капилляры. Герметично закрытые капилляры с кровью центрифугируют 3 мин при 1500 об/мин. При этом на границе плазмы — эритроциты образуется слой ПЛ (полиморфоядерных лейкоцитов). Осторожно отрезают капилляр до уровня расположения лейкоцитов. Отверстие, противоположное лейкоцитарному столбику, герметизируют расплавленным сургучом. Для постановки методики необходимы опытная и контрольная агарозные среды.

Растворяют агарозу в деионизированной воде до концентрации 25 мг/мл, прогревают при 100 С в течение о, 20 мин, охлаждают до 50 С и добавляют прогретый до 50 С равный объем двукратной среды Игла MEM с 207-ной телячьей сывороткой в контрольные и пластиковые чашки, разливают по

5 мл приготовленной агарозы. Затем согласно предлагаемому способу в опытные чашки разливают агарозу, предварительно добавив в нее раствор иммуностимулятора в определенной концентрации, например 0,06Х-ный раствор аскорбиновой кислоты (АК) из расчета 7-12 мг конечной ее концентрации в агарозе. После застывания агарозы с помощью .шприца и иглы, диаметр которой равен диаметру капилляра, делают лунки, в которье вставляют капилляры с ПЛ. Чашки инкубируют 2,5-3 ч при 37 С во влажной атмоо сфере 57 СО и 95Х воздуха. Миграцию клеток до и после взаимодействия с

АК оценивают с помощью окуляр-микрометра, Измеряют дистанцию продвижения ПЛ в трех противоположных направлениях и определяют среднюю величину как в стимулированных, так и в нестимуллированных АК ПЛ. Для определения индекса стимуляции миграции (далее ИСМ) вычисляют соотношение более эффективно влияют на функцио45

40 между средней дистанцией стимуллированных и нестимуллированных ПЛ. ИСМ позволяет определять способность ПЛ воспринимать стимулирующее . влияние иммуномодуляторов, в частности AK.

Методика позволяет произвести под бор иммуномодуляторов, которые наинальную активность ПЛ, что является важным критерием в подборе лекарственных веществ при лечении больных с заболеваниями легких, в патогенезе которых доминирующим является фагоцитоз.

П р v м е р 1. Донор крови Качалов Д.А., 25 лет, поступил на донорский пункт. Донору было проведено клиническое обследование. Заключение терапевта: донор умеренного питания, нормального телосложения, кожные покровы чистые, тургор кожи хороший, слизистые влажные, розовые.

Лимфоузлы во всех группах не пальпируются. Печень — у края реберной дуги. Живот на всем протяжении мягкий, безболезненный. Пульс — 78 уд/мин хорошего наполнения и напряжения. В сердце тоны ясные, чистые. На всем протяжении легочных полей перкуторный звук не изменен, дыхание везикулярное. Общий анализ крови: Э—

5 млн; Гемоглобин 140 г/л; Лейкоциты 6 10 л; Э вЂ” 1,П-З; С-64;

Л-30; M-6; СОЭ вЂ” 2 мм/ч. Общий анализ мочи без патологии. Исходя из результатов клинического обследования следует, что донор, взятый для проведения иммунологического обследования, практически здоров. B дальнейшей работе по обследованию больных с легочной патологией данные показатели считать нормой.

Иммунологическое исследование крови выполнено согласно предлагаемому способу: определение миграции ПЛ до взаимодействия крови с АК при ин кубации 3 ч при 37 С; определение миграции ПЛ крови после взаимодействия с АК также при инкубации

3 ч при 37 С; определение миграции

ПЛ крови до взаимодействия крови с левамизолом при инкубации 3 ч при о

37 С; определение миграции ПЛ крови после взаимодействия крови с левамизолом при инкубации 3 ч при 37 С„ о

Таким образом, постановка реакции определения миграции ПЛ до взаимодействия с АК равнялась 6,7 усл.ед., а после трехчасовой инкубации с АК—

3,13 усл.ед. ИСМ вЂ” 1,21 усл.ед.

Исходя иэ величины полученного ИСМ, можно установить, что у данного донора ПЛ могут воспринимать активирующий стимул АК, что указывает на способность этих клеток осуществлять фагоцитоз, обеспечивающий полно, ценный иммунный ответ. Таким образом, постановка реакции определения миграции ПЛ до взаимодействия с левамизолом равнялась Ь,7 усл.ед., а после трехчасовой инкубации с левамизолом — б,7 усл.ед. Стимулирующего эффекта не произошло, у данного донора

ПЛ не могут воспринимать активирующий стимул левамизола.

Пример 2. Донор крови Гордиенко А.П., 27 лет. Донору было проведено клиническое обследование.

Заключение терапевта: донор умеренного питания, нормального телосложения. Кожные покровы чистые, тургор хороший, слизистые розовые, чистые.

Лимфоузлы во всех группах не пальпируются. Печень пальпируется в края реберной дуги. Живот на всем протяжении мягкий, безболезненный. Пульс—

72 уд/мин, ритмичный, хорошего наполнения и напряжения. В сердце тоны ясные, чистые. На всем протяжении легочных полей перкуторный звук не изменен, дыхание везикулярное. Общий анализ крови без патологии. Анализ мочи нормальный. Исходя из результатов клинического обследования следует, что донор, взятый для проведения иммунологического обследования, практически здоров. В дальнейшей работе по обследованию больных с ле1гочной патологией данные показатели можно считать нормой.

Иммунологическое исследование крови выполнено согласно методике, предлагаемой в изобретении: определение миграции ПЛ до взаимодействия крови с АК при инкубацин 3 ч при 37ОС; определение миграции ПЛ крови после взаимодействия с AK также при инкубации 3 ч при 37оС; определение миграции ПЛ крови до взаимодействия крови с левамиэолом при инкубации 3 ч при 37 С; определение миграции ПЛ о крови после взаимодействия крови с левамизолом при инкубации 3 ч при

37 С. Таким образом, постановка рео акции определения миграции ПЛ до взаимодействия с АК равнялась

4 1 усл. ед., а после трехчасовой

195245 4 инкубации с АК вЂ” 8,83 усл. ед.

8,83

ИСМ = †= 2 15 усл. ед. Поста4,1

5

45 новка реакции определения миграции

ПЛ до взаимодействия с левамизолом равнялась 4, 1 усл. ед., а после трехчасовой инкубации с левамизолом

4,1 усл. ед. Таким образом, исходя из величины полученного ИСМ, можно установить, что у данного донора происходит стимуляция ПЛ аскорбиновой кислотой, а левамизол ПЛ не стнмулируется.

fI р и м е р 3. Больной Кривошея В.А., 32 г. Диагноз — инфкпьтративный туберкулез верхней доли левого легкого в фазе распада, BK/-/.

Из анамнеза известно, что у больного туберкулез случайно выявлен иа профосмотре в октябре 1981 года.

Был установлен инфияьтративный туберкулез верхней доли левого легкого в фазе распада, ВК/-/. Лечение стационарно. Данные обследования при поступлении. Общий анализ крови: Лейкоциты 3,9.10 /л; Э-4; С-45; М-5;

Л-45; СОЭ вЂ” 5 мм/ч. Эритроциты

4,2 ° 10 /Л. Общий анализ мочи без патологии. Мокрота ВК/"/; Манту — .

3 х 3. Иммунологнческое исследование крови выполнено согласно предлагаемому способу: определение миграции ПЛ до взаимодействия крови с АК при инкубации 3 ч при 37 С; опредео ление миграции ПП крови после взаимодействия с AK при инкубации 3 ч о при 37 С; определение миграции ПЛ до взаимодействия с левамиэолом о при инкубации 3 ч при 37 С; определение миграции ПЛ крови после взаимо-. действия,с левамиэолом при инкубации

3 ч при 37 С. Таким образом, поста о новка реакции определения миграции

ПЛ до взаимодействия с АК равнялась

4,95 усл. ед., а после трехчасовой инкубации с AK — 0,05 усл. ел.

5,05

ИСМ = †= 1 02 усл.ед.

4,95

Исходя иэ величины полученного

ИСМ, можно установить, что у данного пациента ПЛ не способны достаточно активироваться АК, что указывает на угнетенное состояние функциональ-. ной активности FIJI, осуществляющих

1 реакцию фагоцитоза, которая обеспечивает полноценный иммуиный ответ.

Препарат левамизол ке производит стимуляции ПП крови.