Штамм @ @ ра-7,используемый для получения анатоксина

 

ШтаиФ Psieudomonas aerrigiAosa PA-7 (музей ГИСК им. Л.А. Тарасевича) используемый для получения анатоксина .

СОО3 СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPbfA9,. SU„„1202109 A (51)4 А 61 К.39/104, С 12 P 1/06 (С 12 P 1/06, С l2 R 1:385). (21) 3753633/28 14 (22) 19.06.84 (46) 15.06.86. Бюл. У 22 (7l) Ордена Трудового Красного Знамени научноисследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Почетного акад. Н. Ф. Гамалеи (72) Н, C. Бродинова, А. Ф. Мороз, И. И. Самойленко и Г. А.. Левдикова (53) 576.8.097(088,8) (56) S.J. Gryz at a.l. Effect of formolin toxoiding on Pseudomonas aeruginosotoxin А: Bio.logica.l, Chemical

and Immucochemical studies, J. In

fection and Immuity, v. 32, У 2, р. 759 768. (54) ШТАММ РБЕ1ЛЗОМОБАБ AERUGINOHA

РА. 7, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ АНАTOKCHHA (57) Штамм Рзеийопюназ aerugihosa

РА 7 (музей ГИСК им. Л.А. Тарасевича используемый для получения аиатокснна.

Составитель Г. Смирнова

Редактор П. Горькова Техред М.Ходанич Корректор О. Луговая

Тираж 660 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 3318/2

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4, 9 1202)

Изобретение относится к области медицины, в частности медицинской микробиологии, и может быть использо" вано в производстве вакцинных препаратов. 5

Целью изобретения является получе" ние высокоиммунногенного анатоксина.

Штамм Pseudomonas .aeruginosa,:

PA-7 выделен из ожоговой раны больного в Москве. Штамм PA-7 депонирован 10 в музее ГИСКа им, Л.А. Тарасевича и имеет культурально-морфологические признаки, типичные для Pseudomonas

aeriginosa.

При выращивании на бульоне Мартена 15 имеет высокую продукцию экзотоксина

А. АДФР - трансферазная активность (имп/мин) 9512. ДИК - азной и лецитиназной активностью не обладает, обладает невысокой протеазной актив- 20 ностью.

Отмечено наличие гемолизина. Относится ко 2-му серотипу схемы Ficher

Эече п Жд,/мл 276.

Штамм PA-7 является высокоактивным 25 продуцентом экзотоксина А. Средняя биологическая активность экэотоксина

А 276 LD>

aeriginosa PA-7 используют следующим образом. 30

Пример. Штамм PA-7 выращивают в бульоне Мартена в ферментере в течение 20 ч при скорости вращения мешалки 800 об./мин и оксигенации, равной 500 м /ч. з

По окончании срока культивирования бульонную культуру центрифугируют, фильтруют и подвергают детоксикации

0,57. формалина и 0,1 Мк-лизина (концентрация общего белка в супернатан- 40 те составляет 7,5 мг/мл) при рН 6,2, о температуре инкубации 22 либо 37 С в

09 1 течение 48 ч. Затем проводят очистку препарата на колонке с сефадексом

G-100, концентрирование его фиколом (60 мкг/мл) и розлив в ампулы по

1,0 мл с последующим воздействием на препарат ионизирующего излучения в дозе 10-5 кГр (последний режим в слу" чае лиофильно высушенных образцов препаратов). Обработка препарата в дозе 10-15 кГр обеспечивает получение полностью безвредного, необратимого, специфически антнгенного анатоксина P. aeruginosa. Кроме того, полученный таким образом анатоксин стерилен, апирогенен, стабилен в отношении реверсии к токсичности при хранении его при температурах 4, 22 и 37 С.

Высокая иммуногенность облученно го образца анатоксина была продемонстрирована в тесте активной иммунизации экспериментальных животных. Однократное внутрибрюшинное введение препарата в дозе 15 мкг/мл обеспечивает создание мощного антибактериального и антитоксического иммунитета на протяжении 50 дней наблюдения за животными. 100Х выживаемость иммуни зированных животных отмечалась при заражении их как токсигенными штаммами синегнойной палочки (PA-7, PA-103), токсигенным н продуцирующим протеазу штаммом (PA-4), так и нетоксигенными, но продуцирующими большое количество протеазы (PA-286) в дозе от 2 до

4,8 LD . При введении экэотоксина А в дозе 25 50 Ю /мп также наблюдалась 100Х выживаемость животных по сравнению с контрольной группой (неиммунизированные мыши), где была отмечена IOOX гибель животных в первые сутки наблюдения.