Способ получения @ -изолейцина
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИН,.SU.. 1206305 (51)4 С 12 P 13 06
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТЫ
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ н авТОРСКОМУ СВИДЕТВЪФТВУ с @,-с „ (21) 3788552/28-13 (22) 20.07.84 (46) 23.01.86. Бюл. ¹ 3 (71) Казанский ордена Трудового Крас. ного Знамени химико-технологический институт им.С.M.Êèðoâà и Фрунзенский завод антибиотиков (72) 0;А.Решетник, Э.С.Вернер, Д.Г.Победимский, Л.А.Музыченко, З.Ш.Мингалеева, Г.В.Ставинская, Л.А.Хабарова и В.А.Сотников (53) 668. 475 (088. 8) (56) Авторское свидетельство СССР № 943282, кл. С 12 P 13/08, 1982.
Primary Products of Metabolism.
Ed Ъу А.Н.Коке, G.Amino. Acid Ecomonic Microbiology, 1978, 2, р.232. (54) (57) 1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ Ь-ИЗОЛЕИЦИНА путем культивирования продуцирующих его микроорганизмов Brevi bacterium blavum в условиях аэрации на питательной среде, содержащей / углеводы, источник азота, минеральные соли и стимулятор роста, о т— л и ч а ю шийся тем, что, с целью повьппения выхода L-изолейцина, в качестве стимулятора роста используют дезоксирибонуклеазу.
2. Способ по п.1, о т л и ч а ю— ,шийся тем, что дезоксирибонуклеазу вносят в питательную среду в.. количестве 1 10 -1-10 мг/мл.
12063
Изобретение относится к микробиологической промышленности, к производству:аминокислот, а именно к способам получения L-изолейцина.
Цель изобретения — повышение выхо- 5 да L-изолейцина.
Введение в качестве стимулятора роста деэоксирибонуклеазы в концентрациях, близких-к концентрации ферментов, находящихся в живой клет- 1О ке, приводит к ускорению синтеза ДНК и связанного с этим процессом деления клеток, что положительным образом сказывается на росте и развитии всей клеточной популяции микроорганизма 15 продуцента и синтезе аминокислоты.
Пример 1. Односуточную куль. туру штамма Brevibacterium flavum
ВНИИГенетика 10-89, выращенную на косяках с агаром Хоттингера, переме" щают в колбы Зрленмейера емкостью ,750 мл, содержащие 100 мл питательной среды следующего состава, г/л:, Содержание Ь-иэолейцина в культуральной жидкости определяют методом тонкослойной хроматографии на пластинах Silufol после раэгонки в течение 40 мин в системе растворителей: изопропанол, ацетон, 28%-ный водный раствор аммиака, вода в соотношении
25 50:50:12,8, и обработки 1%-ным раст.вором нингидрина в ацетоне.
Полученные данные приведены в таблице .
Л
Как видно из таблицы, оптимальными являются концентрации дезоксирибонуклеазы 1 10 -1 ° 10 мг/мл сре- ды. При внесении в ферментационную среду стимулятора в этих концентрациях наблюдается увеличение концентрации L-изолейцина на 25-29% по
-сравнению с контролем, по сравнению с известным способом наблюдается увеличение выхода аминокислоты на
3,9 г/л (по известному способу
®О получено 14,5 г/л L-изолейцина, по предлагаемому 18, 1 г/л).
Концентрация ДНК-аэы, мг/мл
10
10 3
Контроль
Показатели .
Концентрация изолейцина на 72 ч роста, г/л
14,0
14,6
18,1
14,8
14,0
Стимуляция к контролю, %
5, 7 25,7 29,3
4,3
Меласса 30
Кукурузный экстракт ЗО
ИН, С1 4
Водопроводная вода Остальное
I г рН "реды доводят 40%-ным раствором
NaOH до 7,3-7,5.
Колбы вместе со средой предварительно стерилизуют в автоклаве при 1,0 атм в течение 40 мин.
После засева культуры колбы устанавливают на круговую качалку со скоростью 200-220 об/мин и выращивают посевной материал 16-18 ч при 30 С.
Готовый посевной материал вносят в количестве 6,6% (по объему) в кол05 2 бы Эрленмейера емкостью 750 мл, содержащие 30 мп ферментационной среды, содержащей сахар кубинский, (NEQ) SO
KHqPO MgSOg"7Н О, мел, дестибиотйн, тиамин и водопроводную воду". Ферментационную среду стерилизуют, одновременно с инокулятом в ферментационную среду вносят дезоксирибонуклеазу в концентрациях 1 10 з1 10 мг/мл. Ферментацию проводят, на круговой качалке со скоростью
200-220 об/мин при 30 С в течение
72 ч. Контролем служат клетки Brevi""
bacterium flavum 10-89, культивируемые в аналогичных условиях без добавления деэоксирибонуклеазы.
1206305
Поодолжение таблицы
Концентрация ДНК-азы, мг/мл
10
Показатели
Контроль
0,0863 0,0822
Стимуляция к контролю, 7
4,1
1,2
6,3 12,3
5,03
Коэффициент конверсии,Ж
17,6
16,1
18,9
16,3
15 3
5,2 15,7 23,5
6 5
Составитель Н.Афанасьева
Редактор Н.Яцола Техред З.Палий Корректор С. Шекмар
Заказ 8651/26 Тираж 490 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5
Средняя удельная скорость роста культуры, ч "(О22 ч роста) Стимуляция к контролю до коэффициенту конверсии, X
0,0856 0,0832 0,0874 0,0922
Филиал ППП "Патент", г,ужгород, ул.Проектная, 4
