Ферментационный способ получения l-лизина

 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для производства L-лизина. Для осуществления способа используют ДНК, кодирующую дигидродипиколинатсинтазу из Escherichia, десенсибилизированную к ингибированию по типу обратной связи L-лизином и имеющую аминокислотную последовательность, приведенную в тексте описания, и которой трансформируют бактерию рода Escherichia. Бактерия также несет аспартокиназу, десенсибилизированную к ингибированию по типу обратной связи L-лизином, что может быть осуществлено введением в бактерию ДНК, кодирующей аспартокиназу III из Escherichia. Такую бактерию культивируют в подходящей среде и собирают L-лизин из культуры. Использование трасформированных бактерий рода Escherichia в качестве продуцента позволяет повысить продуктивность L-лизина. 2 с. и 8 з.п.ф-лы, 24 ил., 22 табл.

Текст описания в факсимильном виде (см. чертежи) Т Тм

Формула изобретения

1. ДНК, кодирующая дигидродипиколинатсинтазу, происходящую из бактерий рода Escherichia, десенсибилизированную к ингибированию по типу обратной связи L-лизином и имеющую аминокислотную последовательность, содержащую мутацию, выбранную из группы, состоящей из мутаций из замен: 81-го остатка аланина остатком валина, 118-го остатка гистидина остатком тирозина, 81-го остатка аланина остатком валина и 118-го остатка гиститида остатком тирозина, считая от N-конца аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:4.

2. Способ получения L-лизина, отличающийся тем, что культивируют бактерию рода Escherichia в подходящей среде для продуцирования и накопления L-лизина в культуре и собирают L-лизин из культуры, при этом бактерия несет дигидродипиколинатсинтазу, происходящую из бактерии рода Escherichia, содержащую мутацию, обуславливающую десенсибилизацию к ингибированию по типу обратной связи L-лизином, в результате введения в клетку бактерии ДНК по п.1, и аспартокиназу, ингибирование которой по типу обратной связи L-лизином также десенсибилизировано.

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что бактерия несет аспартокиназу, ингибирование которой по типу обратной связи L-лизином десенсибилизировано введением в ее клетку ДНК, кодирующей аспартокиназу III, происходящую из бактерии рода Escherichia, имеющую мутацию, обуславливающую десенсибилизацию к ингибированию по типу обратной связи L-лизином.

4. Способ по п.3, отличающийся тем, что мутация, обуславливающая десенсибилизацию к ингибированию аспартокиназы III L-лизином по типу обратной связи, выбрана из группы, состоящей из мутаций для замен: 323-го остатка глицина остатком аспарагиновой кислоты, 323-го остатка глицина остатком аспарагиновой кислоты и 408-го остатка глицина остатком аспарагиновой кислоты, 34-го остатка аргинина остатком цистеина и 323-го остатка глицина остатком аспарагиновой кислоты, 325-го остатка лейцина остатком фенилаланина, 318-го остатка метионина остатком изолейцина, 318-го остатка метионина остатком изолейцина и 349-го остатка валина остатком метионина, 345-го остатка серина остатком лейцина, 347-го остатка валина остатком метионина, 352-го остатка треонина остатком изолейцина, 352-го остатка треонина остатком изолейцина и 369-го остатка серина остатком фенилаланина, 164-го остатка глутаминовой кислоты остатком лизина и 417-го остатка метионина остатком изолейцина и 419-го остатка цистеина остатком тирозина, считая от N-конца аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:8.

5. Способ по любому из пп.2-4, отличающийся тем, что в бактерии усилена экспрессия гена дигидродипиколинатредуктазы.

6. Способ по п.5, отличающийся тем, что бактерия трансформирована рекомбинантной ДНК, сконструированной лигированием гена, кодирующего дигидродипиколинатредуктазу, с вектором, автономно реплицируемым в клетках бактерии рода Escherichia.

7. Способ по п.5 или 6, отличающийся тем, что в бактерии усилена экспрессия гена диаминопимелатдегидрогеназы.

8. Способ по п.7, отличающийся тем, что бактерия трансформирована рекомбинантной ДНК, сконструированной лигированием гена диаминопимелатдегидрогеназы с вектором, автономно реплицируемым в клетках бактерии рода Escherichia.

9. Способ по п.5 или 6, отличающийся тем, что в бактерии усилена экспрессия генов тетрагидродипиколинатсукцинилазы и сукцинилдиаминопимелатдеацилазы.

10. Способ по п.9, отличающийся тем, что бактерия трансформирована одной или двумя рекомбинантными ДНК, сконструированными лигированием генов тетрагидродипиколинатсукцинилазы и сукцинилдиаминопимелатдеацилазы с одним или различными векторами, автономно реплицируемыми в клетках бактерии рода Escherichia.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22, Рисунок 23, Рисунок 24, Рисунок 25, Рисунок 26, Рисунок 27, Рисунок 28, Рисунок 29, Рисунок 30, Рисунок 31, Рисунок 32, Рисунок 33, Рисунок 34, Рисунок 35, Рисунок 36, Рисунок 37, Рисунок 38, Рисунок 39, Рисунок 40, Рисунок 41, Рисунок 42, Рисунок 43, Рисунок 44, Рисунок 45, Рисунок 46, Рисунок 47, Рисунок 48, Рисунок 49, Рисунок 50, Рисунок 51, Рисунок 52, Рисунок 53, Рисунок 54, Рисунок 55, Рисунок 56, Рисунок 57, Рисунок 58, Рисунок 59, Рисунок 60, Рисунок 61, Рисунок 62, Рисунок 63, Рисунок 64, Рисунок 65, Рисунок 66, Рисунок 67, Рисунок 68, Рисунок 69, Рисунок 70, Рисунок 71, Рисунок 72, Рисунок 73, Рисунок 74, Рисунок 75, Рисунок 76, Рисунок 77, Рисунок 78, Рисунок 79, Рисунок 80, Рисунок 81, Рисунок 82, Рисунок 83, Рисунок 84, Рисунок 85, Рисунок 86, Рисунок 87, Рисунок 88, Рисунок 89, Рисунок 90, Рисунок 91, Рисунок 92, Рисунок 93, Рисунок 94, Рисунок 95, Рисунок 96, Рисунок 97, Рисунок 98, Рисунок 99, Рисунок 100, Рисунок 101, Рисунок 102, Рисунок 103, Рисунок 104, Рисунок 105, Рисунок 106, Рисунок 107, Рисунок 108, Рисунок 109, Рисунок 110, Рисунок 111, Рисунок 112, Рисунок 113, Рисунок 114, Рисунок 115, Рисунок 116, Рисунок 117, Рисунок 118, Рисунок 119, Рисунок 120, Рисунок 121, Рисунок 122, Рисунок 123, Рисунок 124, Рисунок 125, Рисунок 126, Рисунок 127, Рисунок 128, Рисунок 129, Рисунок 130