Синтетическая среда для определения сахаролитической активности бруцелл

Авторы патента:

C12Q1 - Способы измерения или испытания, использующие ферменты или микроорганизмы (устройства для измерения или испытания при работе с ферментами или микроорганизмами, например счетчики колоний C12M 1/34); составы для них; способы получения подобных составов

C12N1/20 - бактерии; питательные среды для них

СО103 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

0,50-0,60

До1л

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3567724/30-15 (22) 08.02.83 (46) 23.03.88. Бюл. N - 11 (71) Казанский ветеринарный институт им. Н,Э,Баумана (72) Н.З.Хазипов, К.М.Салмаков, А,М.Алимов и Н.П1.3айнеев (53) 576,8.093:576,851,42 (088,8) (56) Pickett М..1., Nelson Е.1 .

Speciation within the-gehus Brucella, IV. Fermentation of carbohydrates, I.Baunt, 69, 333, 1955. . Лабинская А.С. "Микробиология с техникой микробиологических исследований", изд. Медицина, 1968, с. 432. (54) (57) СИНТЕТИЧЕСКАЯ СРЕДА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ САХАРОЛИТИЧЕ СКОЙ АКТИВНОСТИ БРУЦЕЛЛ, содержащая хлорид натрия, индикатор бромтимоловый синий, уг" ц1) 4 С 12 И 1/20, С 12 Q 1/00 левод и дистиллированную воду, о тл и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью повышения чувствительности среды и ускорения определения активности бруцелл, дополнительно содержит двухзамещенный фосфорнокислый натрий и однозамещенный фосфорнокислый калий при следующем соотношении компонентов в r на 1 л:

Хлорид натрия 0,80-0,90

Индикатор бромтимоловый синий 0,005-0,006

Углевод 12,0-15,0

Двузамещенный фосфорнокислый натрий

Однозамещенный фосфорнокислый калий 0,20-0,25

Дистиллированная вода

1 1210453

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и касается синтетических питательныхсред дляопределения ферментативной активности бруцелля.

Цель изобретения вЂ” повышение чувствительности среды и ускорение определения активности бруцелл.

Пример 1, В 1 л дистиллированной воды растворяют натрий фосфор" нокислый двухзамещенный -0,50 г, калий фосфорнокислый одноэамещенный безводный вЂ” 0,20 r и натрий хлорис" тый вЂ” 8,00 г, К этому раствору добавляют 1,5 мл рабочего раствора индикатора бромтимолового синего, 3атем среду разливают в пробирки по

5 мл и стерилиэуют в автоклаве при

120 С в течение 30 мнн.

Перед использованием в каждую пробирку добавляют по 0,3 мл рабочего раствора углевода.

Приготовление рабочего раствора бромтимолового синего: к 100 мп дистиллированной воды добавляют 0,04 г бромтимолового синего.

Приготовление рабочего раствора углевода: в 50 мп дистиллированной воды растворяют 10 r глюкозы. Анало гично готовят растворы галактозы, ксилозы, рамнозы, фруктозы, рибозы, маннита, мальтозы, сахарозы„ лактозы, инозита.

Рабочие растворы углеводов стерилизуют фильтрованием через асбестовый фильтр.

Для определения сахаролитической активности используют 48 часовую культуру бруцелл, выращенных на печеночно-пептонном агаре, с добавлением 2% глицерина и 0,2% глюкозы, Смывание и двухкратное промывание бактериальных клеток производят стерильным забуференным физиологическим раствором хлорида натрия (рН

7,1-7,15). В каждую пробирку:вносят по O,i мл суспензии бруцелл с концентрацией микробных клеток 150 млрд, в 1 мл, Пробы инкубируют в термостате ри 37 С в течение 48-78 ч, Ставят следукяцие контроли .

1. Среда с углеводом + 0,1 мп стерильного физиологического раствора, 2, Среда беэ углевода + 0„1 мп суспензии бруцелл.

Реакцию оценивают по следующей шкале.

Оценка резуль- ОбознаЦвет среды татов реакции чение

Желтый

Интенсивное сбраживание

Зеленоватожелтый или зеленый

Слаб о е с бр аживание

Отсутствие сбраживання

Синий

В табл.1 приведены результаты изучения сахаролитической активности бруцелл штамма Вг.abortus !9.

Пример 2. В 1 л дистиллированной воды растворяют натрий фосфорнокислый двухзамещенный безводныйвЂ”

0,60 г, калий фосфорнокислый одноэамещенный безводный вЂ” 0,25 г и натрий хлористый вЂ” 9,00 r. К этому раствору добавляют 1,5 мп рабочего раст25 вора индикатора бромтимолового синего. Среду разливают по 5 мп в пробирки и стерилизуют в автоклаве при

1 20 С в течение 30 мин.

Перед использованием в каждую

ЗО среду (пробирку) добавляют по 0,3 мл раствора углевода.

Приготовление рабочего раствора бромтимолового синего: к 100 мл дистиллированной воды вносят 0,05 г бромтимолового синего.

Приготовление рабочих растворов углеводов." в 50 мл дистиллированной воды растворяют 12,5 г соответствующего углевода (ксилоза, маннит, мальтоза, сахароза, лактоэа, иноэит, глюкоза, рамноза, фруктоза). Рабочие

45 растворы стерилизуют фильтрованием через асбестовый фильтр.

Для определения сахаролитической активности используют 48 часовую5ц культуру бруцелл, выращенных на печеночно-пептонном агаре с добавлением 2% глицерина и 0,2% глюкозы. Смывание и двухкратное промывание бактериальных клеток производят стерильным забуференным физиологическим растворомхлорида натрия (pH 7,10-7,15),В каждую пробирку вносят по 0,1 мл суспенэии бруцелл с концентрацией

150 млрд, микробных тел в 1 мл.

1210453

Таблица 1

Цвет среды рН Оценка реакции

Субстрат

Арабиноэа

Желтый

Галактоэа

Желтый

Глюкоза

Синий

Инозит

Зеленый

Ксилоэа

Синий

Лактоза

Желтый

Мальтоза

Синий

Маннит

Синий

Сахароза

Сорбит

Фруктоза

Контроль 1

Контроль 2

Синий

Желтый

Синий

Таблица 2

Субстрат Цвет среды рН Оценка реакции

Арабиноэа Светло- 6,65 + желтый

Галактоза Желтый

6,61 +

6,74 +

Глюкоза Желтый

Пробы инкубируют в термостате при

37 С в течение 48-72 ч, Ставят следующие контроли: 5

1. Среда с углеводом + 0,1 мл стерильного физиологического раствора.

2, Среда без углевода + 0,1 мл суспензии бруцелл. 10

Реакцию оценивают с учетом изменения цве та ср еды.

В табл,2 приведены результаты изучения сахаролитической активности бруцелл штамма Br.abortus P-82.

Предлагаемая синтетическая среда для определения сахаролитической активности бруцелл позволяет в короткий срок (48-72 ч) выявить сахаролитические свойства бруцелл, что невозможно при использовании среды

Гисса из-эа выраженной дезаминазной активности этих микробов.

6)57 +

6)70 +

6,69 +

7,10 +

6,80 +

7,10

6,80 +

7,10

6,66 +

7,10

7 10