Способ определения этилового эфира бензоил- @ -аргинина

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU,12 (5Ц 4 r, 01 И 33/4Ц, С 12 q 1/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ / ... /

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21 ) 3682382/28-14 (22) 28.12.83 (46) 15,01 86. Бюл. У 2 (71) Институт биологической физики

АН СССР (72) В.Н.Морозов (53) 547.466(088.8) (56) Mosbach К. Denielson В . An engipue fhernui for Brochem 0tophys Ac-, ta. 1974 ч. 364, 9 1, р. 140. (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭТИЛОВОГО

ЭФИРА БЕНЗОИЛ-L-АРГИНИНА путем использования иммобилизованного фермента, отличающийся тем, что, с целью сохранения исследуемого вещества и упрощения способа, в качестве фермента используют папани, инактивированный сулемой, а концентрацию этилового эфира бензоил-1.-аргинина определяют по величине де формации или механического напряжения пленки-носителя.

Ю

Ю

Яд

4Р

i 205015

Изобретение относится к области биохимического анализа, а именно к анализу содержания в растворе эфиров аминокислот, являющихся субстратами протеолитических ферментов. 5

Цель изобретения — сохранение исСледуемого вещества и упрощение способа.

Пример. В качестве чувствительного элемента для определения этилового эфира бенэоил-Ь-аргинина (ВАЕЕ) используют пленку из инактивированного сулемой папаина, Для ее изготовления раствор 20 мг лиофильного порошка папаина (I"luka AG, 6000 ед/г) 15 растворяют в 0,1 мл 10 MM раствора

НрС1 . Раствор выливают на поверхность стеклянной пластинки 20х30 мм и быстро сушат при пониженном давлении (" 20 мм рт,ст.), затем эту 29 пластинку вместе с высохшей бепковой пленкой помещают при комнатной температуре в пары 25%-ного раствора глутарового альдегида на 10 ч, После этого пленку отмывают большим коли-" 25 чеством воды от остатков жутарового альдегида, отделяют от стекла и хранят в сухом состоянии в холодильнике до использования.

Для измерений вырезают полоску щ

700 х 20 мкм длиной и толщиной 3l0 мкм из приготовленной указанным способом пленки. Концы полоски зажимают в пинцеты, один из которых закрепляют неподвижно, а другой присоединяют к датчику силы емкостного типа с жесткостью 71 мг/мкм. Концы пинцетов вместе с полоской погружают в каплю исследуемого раствора.

Вся измерительная установка термоАР д статируется, Калибровку датчика в отношении различных концентраций ВАЕЕ и все последующие измерения производят в

0,1 М К-фосфатном буфере рН 7,5.при о

t=25 С, Перед началом работы пленку растягивают на ч,5% от исходной величины и все измерения проводят в изометрическом режиме.

Погружая полоску последовательно в каплю буфера, "îäåðæàùåãî различные концентрации ВАЕЕ, регистрируют изменение изометрического натяжения < F. Эта величина, отнесенная к площади поперечного сечения Б, не зависит от геометрических размеров полоски и является более удобной характеристикой, Изменение изо» метрического напряжения 11 = ЛР/S в зависимости от концентрации BAKE полученное таким образом линейно в области концентраций 0-20 мМ ВАЕЕ.

В табл.1 представлена калибровочная зависимость величины изометрической силы (I ), развиваемой пленкой

Hp-папаина (ширина 20 мкм, толщина

10 мкм) и изометрического напряжения в пленке.(IV) от концентрации этилового эфира бензоил-1,-аргинина (Б) . Пленка растянута на 6,5% от ее длины в отсутствие силы в буфере

В табл.2 представлена калибровочнаяя э ав исимо с ть деформации (A L/1 о ) пленки Ня-папаина от концентрации этилового эфира бензоил-1.-аргинина

i3 изотоническом режиме измерения, напряжение в пленке постоянно

11„ = 2,6 кг/см

Пример расчета концентрации эти,лового эфира бензоил-,L, — àðãèíèíà в растворе по изотонической деформации пленки Hg-папаина. Величина изотонической деформации (IVО = 2,6 кг/см ) пленки (йL/ >), при трех различных погружениях в определяемый раствор составила 3,77, 3,68 и 3,75%, Среднее значение 3,73 + 0,03% соответствует по приведенной выше калибровке Б = 5,05 + 0,16 мМ. Точное значение концентрации указанного раствора составляет 5,00 мМ, 12050!5

Та блица 1

l0 мМ 0

l0,0

8,5

7,6

6,63

F,мг 5,2 5,56 5,84

N,êã/см 2,6 2,78 2,92

5,0

4,14

3,84

3,42

Та блица

S, м1"1

I0 (AL/Ьа), Ж 4 5

4,34

4,23

3,46

3,88

3,07

2,41

Заказ 8520/44 Тираж 896 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раущская наб,, д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r.Óæãoðoä, ул.Проектная,4

Составитель Н.Гуляева

Редактор С,Лисина Техред А.Бойко Корректор Т.Колб,