Способ отбора иммуномодуляторов

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (21) 3657085/28-14 (22) 26.10.83 (46) 15,02.86. Бюл. N б (71) Научно-исследовательский ордена Трудового Красного Знамени институт эпидемиологии и микро« биологии им. почетного академика

Н.Ф.Гамалеи (72) M,À.Òóìàíÿí и Г.Б.Кирилличева (53} 616.07 (088.8) (56) Мансурова И.Д., Стосман P,З.

К методике определения активности

5-нуклеотидазы в сыворотке крови.

Лабораторное дело, 1973, У 4, с.223229.

Захарова M.Ñ. О методе учета активности биологических агентов (методы Рида и Менча).- Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 1946, Ф 10, с. 71.

„Я0„„1210790 А

12) 4 A 61 В 10/00 A 61 К 39/00 (54) (57) СПОСОБ ОТБОРА ИММУНОМОДУ, ЛЯТОРОВ, включающий подкожное введение исследуемого препарата животным с последующим учетом результатов, о т л и ч а ю щ и и с я тем, .что, с целью ускорения способа, после введения исследуе . мого препарата у животных выделяют перитонеальные макрофаги, определяют в них 5-нуклеотидазную актив ность и при понижении уровня ее активности по сравнению с нормой препарат относят к.иммуностимуляторам, а при повышении к.иммуно депр ессантам.

Составитель В,Дроздов

Редактор М.Товтин Техред T,Äóáaa÷àê Корректор М.Максимишинец"

Заказ 569/6 Тираж 659 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал IIIIII "Патент", г.ужгород, ул. Проектная, 4

Ф, 12

Изобретение относится к иммуно логии, а именно к способу отбора иммуномодуляторов.

Цель изобретения - ускорение способа, Способ осуществляется следующим образом, Исслелуемпй препарат вводят подкожно беспородным мышам весом 1820 r. Через 24 ч мышей забивают и получают от них пернтонеапьный экссудат, иэ которого; выделяют макрофаги. В выделенных таким образом перитонеальных макрофагах определяют 5-нуклеотидазную активность, для чего к 0 5 мп клеточной суспензии (1 млн. в 0,5 мл) прибавляют 0,1 мл субстратного раствора, инкубируют при 37 в течение 1 ч.

После чего клетки охлаждают до 4 и центрифугируют при 6009. 3-5 мин, Отбирают 0,5 мл надосадочной жидкости, в которой определяют содержание фосфора, для чего предварительно в каждую пробирку добавляют 0,7 мп, молибденового реактива и 0,7 мп

0,2Ж ного раствора аскорбиновой кислоты. Через 20 мин производят измерение оптической плотности при, длине волны 630 мкм. В качестве субстрата применяют 6 m М 5-аденозин монофосфат в 0,05 М трис-HGE (рН 7,8), 10 m И ИЯСР, 150 m И NaCF.

Для определения не специфического гидролиза применяют 6 m M -глицерофосфат.- в тех же условиях. АктивЬ ность фермента выражают в мкг фосфора на 1 млн. клеток за время инкубации.

Пример 1. 10 беспородным мышам подкожно вводят по 100 мкг . сальмозана-полисахарида.Жсоматического антигена брюшногифозных

10790 2

Ъ бактерий, обладающего выраженными иммуностимулирующими свойствами.

Через 24 ч после введения препарата иэ перитонеального экссудата мышей выделяют макрофаги. В неразрушенных клетках определяют 5 нукле отидазу активность фермента выражают в мкг фосфора на 1 мпн. клеток за время инкубации при 37 С. В контроль10 ной группе инт актных бе спор одных мышей активность фермента равняется

6,55+0,223 у мышей, которым был введелн сальмозан - 2,408+0,544, что составляет 39Х от контрольного

l5 уровня.

Таким образом, введение сальмозана сопровождается снижением 5-нуклеотидазной активности в перитонеальных микрофагах .на 617 по сравнению с активностью фермента в клетках интактных животных, П р и.м е р 2. При введении беспородным мьппам иммунодепрессанта д циклофосфана в дозе по 400 мкг каждой мьппи через 24 ч в перитонеальных макрофагах активность 5-нуклеотидазы равняется 9,153 0,93 (в группе интактных животных 6,5М0,223), что составляет 148,8Х от контрольного уровня. Введение иммунодепрессанта сопровождается повьппением ферментативной активности к клетках перитонеального экссудата на 48,8Х по сравнению с активностью 5-нукле35 отидазы к клетках интактных животных.. с

Препараты, не обладающие иммуномодулирующими свойствами, не изме няют активность 5-нуклеотидазы в клетках. Время проведения анализа»

1 сут (в известном способе - 7 - 20 дней) .