Способ определения неспецифической антибактериальной реактивности у детей

 

Изобретение относится к педиатрии . Цель изобретения - повышение точности способа за счет определения содержания экзоцированных катионных белков. Берут из пальца 0,2 мл крови, смешивают с 0,05 мл гепарина

„SU„„1239549 А 1

СОЮЭ СОВЕ СКИХ

РЕСПУБЛИК рр 4 G 01 N 1/30; А 61 В 10/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ HSOEiPETEHHA И ОТКРЫТИЙ

«Ь

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ =, К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ „,,„,,1 „;,, ( (21) 3748955/28- t 4 (22) 11.06.84 (46) 23.06 ° 86. Вап,. Ф 23 (71) Научно-исследовательский институт педиатрии Министерства здравоохранения ГССР (72) М.Е. Виксман и Т.Я. Бабуцидзе (53) 616-0 ° 88.8(088 ° 8) (56) Flaherty I Showell Н, Seeker В.

Substances which aggregate neutroрМ1в. Am. E. Pathology. 1978, v.92, и. 1, р. 155.

Bentwood В., Henson P. The sequential release of .granule constituепв from human пеийгорМ1в I. Immuno» ., 1980, v. 124, и. 2, р. 855. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ .НЕСПЕЦИФИ»

ЧЕСКОЙ АНТИБАКТЕРИАЛЬНОЙ РЕАКТИВНОС-.

ТИ У ДЕТЕЙ

° (57) Изобретение относится к педиатрии. Цель изобретения — повышение точности способа за счет определе- ния содержания экзоцированных катионных белков. Берут из пальца 0,2 мл крови, смешивают с 0,05 мл гепарина (100 ед/мл) и переносят в две пробирки по 0,1 мл. В опытной пробе проводят стимуляцию опсонизированным зимозаном. Из контрольной и опытной проб готовят мазки и окрашивают

0,17.-ным раствором примулина. Затем определяют содержание экзоцированных катионных белков в нейтрьфилах. При содержании экзоцированных катионных белков в нейтрофилах от 0,45 до

1,31 ед определяют нормальную неспецифическую антибактериальную реактивность, а при снижении их от 0,44 ед и ниже определяют сниженную неспецифическую антибактериальную реактив. ность.

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии.

Целью изобретения является повышение точности способа за счет отсутствия влияния загрязненности другими форменными элементами крови на конечный результат определения экзоцитоза и отсутствие повреждения нейтрофилов, вызываемого их очисткой.

Способ осуществляют следующим образом.

При подозрении на нарушение .экзоцитоза нейтрофилов у исследуемого из пальца в микропипетку набирают

0,2 мл крови и переносят в пробирку с О, 05 мл гепарина, предварительно разведенного. до 100 ед./мп О, 1 М фосфатным буфером (рН-7,2), приготовленном на физиологическом растворе.(ФБч). Кровь смешивают с гепарином и переносят по .О, 1 мл в две силиконированные пробирки. В одну добавляют 0,1 мл ФБФ вЂ” контрольная проба, в другую - 0,1 мл опсонизированного знмоэана - опытная проба (стимулируют нейтрофилы) ° Заранее приготовленный замозан хранят при о

-20 С. Перед употреблением его опсонизируют пулом;свежей сыворотки при

37 С 30 мин. Отмывают в ФБФ и доводят этим же буфером до концентрации

4 иг/мп. Обе пробы тщательно перемешивают и помещают на 1 ч в термо- . стат при 37 С. Перемешивание повторяют через каждые 15 мин. После сти муляции нейтрофилов зимозаном иэ ,обеих проб готовят мазки крови, .высушивают на воздухе, фиксируют

1 мин 5Х-ным раствором сульфосалициловой кислоты. После фиксации тща- . тельно промывают дистиллированной водой и окрашивают 30 мин О, 1Х-ным .раствором примулина на 0,1 М боратном буфере (ББ) - рН - 8,2. Затем мазки промывают в трех сменах БВ по 1 мин в каждой, высушивают и помещают под иммерсионьый объектив люминесцентног6 микроскопа

Специфичность окраски неферментных катионных белков (HKS) в нейтрофилах выборочно контролируют после обработки мазков 0,02Х-ным раствором трипсина на 0,05 И ББ (рН-S,2) в течение 30 мин при 37 С. Исчезновение флюоресцирующих гранул цосле такой обработки подтверждает специфичность окраски.

Подсчитывают по 100 нейтрофилов в обоих мазках (иэ контрольной и опытОхА+ 1хБ+2хВ+ЗхГ+4хД

100 где А — отсутствие гранул, Б — единичные гранулы,  — гранулы занимают до половины цнтоплазмы нейтрофила, à — гранулы занимают большую часть цитоплазмы, Д вЂ” плотноупакованные гранулы занимают всю цитоплазму нейтрофила. Затем вычисляют разность между ЦИ контрольной и опытной пробами. Если она заключена в интервале от 0,45 до 1,31 ед. определяют нормальную неспецифическую антибактери- альную реактивность, а при содержании экзоцированных катионных белков в нейтрофнлах от 0,44 и ниже определяют сниженную неспецифическую анти10

1S

20 бактериальную реактивность.

Пример 1. Больной. Возраст 9 мес. Диагноз: острый обструктивный бронхит, экссудативный диатез.

Перинатальная гипоксия. Рахит I ст.

Из пальца берут 0,2 мл капиллярной крови, смешивают с 0,05 мл гепарина (100 ед./мл) и переносят в две силиконированные пробирки по О, 1 мп: (опытная и контрольная пробы). В опытной пробе проводят стимуляцию опсонизированным знмозаном. Из контрольной и опытной проб готовят мазки и окрашивают О,!Х-ным раствором примулина. В 100 нейтрофилах обоих мазков (контрольного и опытного) под иммерснонным объективом.люминесцентного микроскопа определяют содержание НКБ.

После стимуляции количество НКБ составляет 1,85, и его уменьшение против содержания катионных белков в контрольной пробе (2,30) составляет

0,45 ед., т.е. функция экзоцитоза в данном случае не нарушена. Нормальный экзоцитоз нейтрофилов сопровождается острым началом заболеваний, высокой лихорадкой, карднореспираторными расстройствами. В.крови наблюдается лейкоцитоз без нейтрофилеза, СОЭ вЂ” 26. Лечение антибиотиками сно-мь собствует быстрой нормализации клинических и лабораторных показателей.

Ребенок выписан через 17 дней в удов40

45 летворительном состоянии.

239549 ной проб), учитывают 4 степени содержания НКБ и их отсутствие, затем вычисляют цитохимический индекс (ЦИ)среднее содержание НКБ на один нейтро" фнл по формуле з 12395

Очевидно, нормальная функция экзоцитоза нейтрофилов способствовала благоприятному течению заболевания.

Пример 2. Больной. Возраст

6 мес. Диагноз: острый обструктивный бронхит.

Иэ пальца берут 0,2 мн капиллярной крови, смешивают с 0,05 мл гена« рина (100 ед./мл) и переносят в две силиконированные пробирки по О, 1 мл !О (опытная и контрольная. пробы). В опытной пробе проводят стимуляцию опсонизированным зимозаном. Из контрольной и опытной проб готовят мазки и окрашивают 0,1Х-ным раствором примулина. В 100 нейтрофилах обоих мазков (контрольного и опытного) под иммерсионным объективом люминесцентного микроскопа определяют содержание

НКБ. 20

После стимуляции количество НКТ составляет 1,37, и его уменьшение против содержания катионных белков в контрольной пробе (2,71) составляет 1,31 ед., что является максималь- 25 ным пограничным показателем при изучении экзотоза предлагаемым способом.

На фоне высокого экзоцитоза нейтрофилов заболевание протекает остро, с высокой лихорадкой, лейкоцитозом, нейтрофилезом, СОЭ вЂ” 28. Лечение антибиотиками в течение 7 дней приводят к полному выздоровлению на

10-е сутки после поступления. Высокая способность к экзоцитозу нейтрофилов этого больного, по-видимому, была важны фактором,,который способствовал эффективной борьбе:с бактериями в участках воспаления, быстрому разрешению воспаления и выздоров- 4О лению ребенка.

Пример 3. Больной. Возраст

1 год 8 мес. Диагноз: затяжной бронхит, анемия.

Из пальца берут 0,2 мл капилляр45 ной крови, смешивают с 0,05 мл гепарина (100 ед/мл) и переносят в две силиконированные пробирки по 0,1 мп (опытная и контрольная пробы). В опытной пробе проводят стимуляцию опсонизированным зимозаном. Иэ конт, рольной и опытной проб готовят Мазки и окрашивают 0,1Х-ным раствором примулина. В 100 .нейтрофилах обоих мазков (контрольного и опытного) под иммерсионным объективом люминесцентного микроскопа определяют содержание НКБ.

49 4

После стимуляции НКБ составляет

2,54 ед., и его уменьшение против содержания катионных белков в контрольной пробе (2,60) составляет

0,06 ед.

Функция экзоцитоза полностью нарушена. Практически отсутствует раз.ница между содержанием НКБ в нейтрофилах контрольной пробы и после стимуляции известяюм инициатором экзоцитоза.

У этого больного заболевание началось остро, но затем перешло в затяжное течение после проведенного курса антибиотикотерапии. Через неделю после отмены антибиотиков вновь наблюдалось обострение с высокой лихорадкой, высоким СОЭ, лейкоцитозом У 14800, но нормальными показателями формулы крови. Назначение антибиотиков вновь не привело к выздоровлению, а только к уменьшению клинических проявлений заболевания с сохранением диффузных изменений в легких. Отсутствие экзоцитоэа нейтрофилов, очевидно, обусловило малую эффективность действия нейтрофнлав в воспалительных очагах против бактериальной флоры.

l ю

Пример 4. Больной возраст

1.0 мес. Диагноз: острый обструктивных бронхит.

Из пальца берут 0,2 мп капиллярной крови, смешивают с 0 05 мл гепарина (100 ед./мл) и переносят в две силиконированные пробирки по 0,1 мн (опытная и контрольная пробы). В опытной пробе проводят стимуляцию опсонизированным зимозаном. Иэ контрольной и опытной проб готовят мазки и окрашивают 0,1Х-ным раствором примулина. В 100 нейтрофнлах обоих мазков.(контрольного и опытного) под иммерсионным объективом люминесцентного микроскопа определяют содержа.ние НКБ.

После стимуляции количество 8KB составляет 1,96, и его уменьшение против содержания катионных белков в контрольной пробе (2,58) составляет 0,62 ед. Экзоцитоз нейтрофилов у этого ребенка был близок к средним показателям, найденным у здоровых детей.

При этом заболевание протекает остро, с лейкоцитозом, нейтрофилезом, кардиореспираторным синдромом.

Назначение антибиотиков, анальгети1239549

Формула изобретения

Способ определения неспецифической антибактериальной реактивности

Составитель М;. Позняк

Редактор В. Иванова . Техред И.Попович Корректор С. Черни

Заказ 3387/41 Тираж 778 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, )K-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 ков, антигистаминных препаратов при. водит к быстрой нормализации клини-. ческих и лабораторных показателей и выздоровлению.

По-видимому, нормальный зкэоцитоз нейтрофылов способствовал благоприятному течению заболевания.

Диагностика нарушений защитных реакций организма ребенка предлагаемым способом позволила в 863 случаев прогнозировать затяжное течение заболевания, в то время как при использовании известных способов не выше, чем в 603 случаев. у детей путем исследования нейтрофилов крови, их стимуляции опсонизированным зимозаном, о т л и.ч а ющ и и с я тем, что, с целью. повышения точности способа, в нейтрофилах определяют содержание экэоцированных катионных белков, при этом после стимуляции нейтрофилов зимозаном

1р готовят мазки и окрашивают их

0„1X-ным раствором примулина, при содержании экзоцированных катионных белков в нейтрофилах от 0,45 до

1,31 ед. определяют нормальную неспе15 цифическую антибактериальную реактивность, а при содержании экэоцированных катионных белков в нейтрофилах от 0,44 ед. и ниже определяют сниженную неспецифическую антибактериальную реактивность..