Способ дифференциальной диагностики первичной пищевой аллергии от вторичной

 

Изобретение относится к медицине . Цель изобретения - повьшение точности способа за счет и спользования в качестве маркера субстрата белка меченного J. Больному дают 10 мл 0,01%-ного водного раствора сывороточного альбумина, меченного изотопом . Через 110-120 Мин берут пробы дуоденального содержимого. Пробы центрифугируют. Полученный супернатант подвергают колоночной хроматографии на сефарозе, конъюгиробанной с моноспецифическими антителами против введенного белка. Затем колонку отмывают фосфатным буфером. Элюируют связавшиеся с антителами меченые антигены 0,1 М глицин-HCl буфером. Подсчитывают их радиоактивность , соотносят ее с радиоактивностью материала, нанесенного на колонку . Выражают в процентик количество нерасщепленного белка, сохранившего антигенную специфичность. При значении полученного показателя 1-2% от количества введенного белка диагностируют первичную пищевую аллергию, 1 табл. (Л ISD 4аь Nd 00 to 00

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU,„, 124282

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1, ГОСУДАРСТ8ЕКНЫЙ КОМИТЕТ СССР по делАм изОБРетекий и ОткРытий (21) 3587396/28-14 (22) 29,04.83 (46) 07.07.86. Бюл. У 25 (71) Институт питания AMH СССР (72) В.К,Мазо, Г.P.Ïîêðîâñêàÿ, . С.Н.Зорин и Л.И,Ширина (53) 616. 07 (088. 8) (56).Gastroentегоlogy, 1979, 76, 1415-1421.

Ногаллер А.М. Инструментальные методы регистрации пищевой непереносимости. — В кн. Пищевая аллергия.

M.: Медицина, 1983, с. 119. (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ПЕРВИЧНОЙ ПИЩЕВОЙ АЛЛЕРГИИ ОТ

ВТОРИЧНОЙ

- (57) Изобретение относится к медицине. Цель изобретения — повышение точности способа за счет использования в качестве маркера субстрага лМ белкае, меченного J. Больному дают (51)4 G 01 N 33/48, А 61 К 49/02

10 мл 0,01Х-ного водного раствора сывороточного альбумина, меченного изотопом J. Через 110-120 мин бе4вч рут пробы дуоденального содержимого.

Пробы центрифугируют. Полученный супернатант подвергают колоночной хроматографии на сефарозе, конъюгированной с моноспецифическими антителами против введенного белка. Затем кблонку отмывают фосфатным буфером, Злюируют связавшиеся с антителами меченые антигены О, 1 М глицин-НС1, буфером. Подсчитывают их радиоактивность, соотносят ее с радиоактивностью материала, нанесенного на колонку. Выражают в процентах количест- 3 во нерасщепленного белка, сохранившего антигенную специфичность. При значении полученного показателя 1-2Х от количества введенного белка диагностируют первичную пищевую аллергию.

1 табл.

1242823

Изобретение относится к медицине, и может быть использовано при диаг" ностике заболеваний же.пудочно-кишечного траКта.

Цель изобретения — повышение точности за счет использования в качестве маркера и субстрата белка, меченного J.

Il

Способ осуществляется следующим образом.

Больному натощак дают выпить

10 мл 0,017-ного водного раствора человеческого сывороточного альбуми431 йа, меченного изотопам J общей радиоактивностью 1,5 10 срм (имп. в минуту). С помощью зонда отбирают пробы дуоденального содержимого через 30, 60, 90 и 120 мин после введения белка. Определяют их радиоак тивность, После этого проры центрифугируют. Полученный супернатант подвергают колоночной хроматографии на сефарозе, конък гированной с моноспецифическими антителами против введенного белка. Затем колонку отмывают 0,1 N фосфатным буфером рН 7,4-7,5, элюируют связавшиеся с антителами меченые антигены 0,1 М глицин-НС1 буфером рН 2„8-3„0, подсчитывают их радиоактивность, соотносят ее с радиоактивностью материала, нанесенного на колонку, и выражают количество нерасщепленного белка, сохранившего антигснную. специфичность, в процентах.

Для получения моноспецифических антител к данному антигену человеческого сывороточного альбумина (Reanal, BHP) готовят антисыворотку путем подкожной иммунизации кроликов с неполным адьювантом Фрейнда (Мясо, США). Моноспецифические антитела к человеческому сывороточному альбумину выделяют на соответствующем иммуносорбенте (ЧСА, иммобилизованный на BrCN — активированной сефароэе 4В, Pharmacia, Швеция), Затем антитела адсорбируют на протеин-А сефароэе (Pharmacia, Швеция) спедующим образом: на колонку с протеин-А сефарозой (объем геля* 1,0 мл) наносят

О,? мл 1Х-ного раствора антител в

0,1 N фосфатном буфере рН 7,4, после чего проводят элюцию 10 мл этого же буфера до полного удаления антител, не связавшихся с протеин-А сефарозой.

Удел ная емкость полученного иммуно25

55 сорбента составляет 5 мг ЧСА на 1 мл геля.

Пример 1. Больная Л-а Л.E °

43 года, госпитализирована в связи с приступообразными болями в разных участках живота, склонностью к поносам, общей слабостью, Иэ анамнеза выяснено, что считает себя больной с

1969 г, после перенесенной пищевой интоксикации. Периодически отмечает ноющие боли по всему животу, перехо- . дящие по временам в сваткообраэные, жидкии стул 3-5 раз в день, прогрессирующую потерю в весе. Дифференциальный диагноз проводился между хроническим энтороколитом и дискинезией тонкого кишечника по гипермотррному типу, При пассаже по тонкой кишке рентгенологических признаков органического поражения кишечника не выявлено„ При холецистографии — функционирующий желчный пузырь. Копрологическое исследование: мышечные волокна, переваренные в умеренном коли" честве, крахмал — значительное колйчество, жирные кислоты — немного, нейтральный жир — незначительное количество„ Активность ферментов поджелудочной железы в сыворотке крови: трипсина 4,6 Мед, ингибитора трипси- на 466 Мер.липазы 27,7 ммоль/мл, амилаэы 315 ед, В дуоденальном содержимом: трипсина 346 Мед> ингибитора трипсина 56 Мед, липаэы 473 ммоль/мл, амилазы 782 ед.

Таким образом, применяемые в клинических условиях диагностические методы, характеризующие функциональ.ное состояние кишечника, не давали указаний на органическое поражение тонкой кишки. Для уточнения диагнос-. тики с помощью выявления нарушений протеолитической активности желудочно-кишечного тракта применен предлагаемый способ.

Для получения химуса из проксимальных отделов тощей кишки используют 4-канальный зонд с латексным баллоном, расположенным дистальнее эспирационного отверстия. Зонд вводится больному натощак под рентгенологическим контролем с таким расчетом, чтобы окклюэия кишки путем наполнения баллона. воздухом производилась на уровне 20-25 см ниже трейцевой связки. Как правило, для полного перекрытия кишки достаточно

20 мл воздуха, вводимого в баллон с

1242823 помощью шприца. Надежность окклюзии контролируется путем аспирации содержимого кишки ниже баллона. После установления зонда на нужном уровне и раздувания баллона больному натощак перорально вводят человеческий сывороточный альбумин, меченный 3, в количестве 10 мл 0,01 -ного водного раствора. Пробы кишечного содержимого получают через 30, 60, 90 и 1О

120 мин после введения препарата.

Для определения J человеческого сывороточного альбумина, сохранившего специфичность в дуоденальном содержимом, применяют метод иммуно- 15 сорбции на колонках. В качестве иммуносорбента используют протеин-А-4В сефарозу с иммобилизованными на ней антителами против человеческого сывороточного альбумина (см. методику 20 получения иммуносорбентов). Перед нанесением образцов кишечного химуса на иммуносорбент в пробах, полученных через 30, 60, 90 и 120 мин, определяют радиоактивность на колодез. ном гамма-счетчике NZ-138 .САММА (Венгрия). Затем пробы объединяют,отбирают 10-15 мл и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин. <

После этого 1,0 мл супернатанта наносят на колонку с иммуносорбентом (объем геля — 0,5 мл, удельная емкость 5 мг ЧСА на 1 мл геля). Колонку отмывают 20 мл О, 1 И фосфатного буфера рН 7,4-7,5, а затем элюируют. связавшиеся с антителами меченые антигены 5 мл 0,1М глицин- НС2 буфером рН 3,0. Радиоактивность элюантов определяют аналогично описанному.

В химуее, полученном из прокси40 мальных отделов тонкой кишки больной

Л-ой Л.Е., обнаружено до 82Х человеческого сывороточного альбумина с антигенной активностью исходного белка. При этом рН желудочного содер45 жимого 7,8, протеолитическая активность желудочного сока 7,2 ед. Отсутствие у ббльной изменений ферментативной активности поджелудочной железы позволяет считать, что наруше 50 ние протеолиза обусловлено органическим поражением тонкой кишки и служит подтверждением диагноза хронического энтерита.

Пример 2. Больная А-А Л.П.

41 год, поступила в клинику в связи с пищевой аллергией, проявляющейся рецидивирующей крапивницей, отеками

Кв инке.

Учитывая полиморфизм этиопатогенетических механизмов пищевой аллергии, требовалось уточнить их характер. В первую очередь было необходимо оценить ферментативную активность желудочно-кишечного тракта. Наличие у больной ожирения Р! степени как будто бы исключало возможность фер.ментативной недостаточности. Действительно, при исследовании функции поджелудочной железы не выявлялось патологических сдвигов. Активность.ферментов поджелудочной железы в сыворотке крови была представлена следую-. щими показателями: трипсина 3,8 Мед, ингибитора трипсина 484 Мед, липаэы

15 ммоль/мл, амилазы 280 ед, в дуоденальном содержимом: трипсина .

392 Мед, ингибитора трипсина 484 Мед, липаэы 15 ммоль/мл, амилаэы 902 ед.

По методике примера i проведено количественное определение степени гидролиза белка, В полученных образцах дуоденального содержимого больной А-вой Л,П. было выявлено до 357 белка с исходной антигенной активностью. Обнаружение столь значительного количества антигенного материала в просвете тонкой кишки рассматривается как одна из причин развития пищевой аллергии и позволяет провести целенаправленную коррекцию выявленных нарушений пищеварения с помощью медикаментоз" ных средств (ферментных препаратов), Пример 3. Больной 3-р Ф.М., 36 лет, поступил с жалобами на приступообраэные интенсивные опоясывающие боли в верхней половине живота, сопровождающиеся рвотой, расстройством стула (плохо оформленный стул

1-2 раза в день). Из анамнеза выяснено, что с 1980 г, у больного наблюдаются приступы абдоминальных болей описанного характера. При обследовании обнаружено резкое повышение секреторной функции желудка, при рентгеноскопии желудка — выраженная деформация луковицы 12-перстной кишки (что позволило констатировать наличие язвенной болезни), при холецистографии — камни желчноro пузыря. При неоднократном исследовании панкреатических ферментов определялось повышение их концентрации в крови и моче.

Сканирование $е-75 селенметионином

124? 823

Продолжение таблицы.

2 l

Пищевая аллергия с сопутствующими заболеваниями желудочно-кишечного тракта

Хронический гастрит с секреторной недостаточностью

4-7

Хронический панкреатит

Хронический энтерит

Контингент исследованных больных и здоровых лиц

Количество нерасщепленного

4М

J-ЧСА, сохранившего антигенную специфичность, .7

50 Здоровые лица

1-2

Пищевая аллергия без поражения желудочно-кишечного тракта

1,6-2,0 показало неравномерное снижение фиксации изотопа в поджелудочной железе

Несмотря на констатируемую у больного нормальную активность ферментов поджелудочной железы в сыворотке крови, их нормальную концентрацию в дуоденальных образцах и наличие избыточной массы тела удалось выявить патологическое отклоне- 10 ние в гндролизе белка пищеварительного тракта (количество нерасщепленного

Ч1:А в дуоденальном содержимом 177) .

Приведенные результаты обследования позволили установить диагноз калькулезного холецистита с реактивным панкреатитом, язвенной болезни

12-перстной кишки в фазе ремиссии.

Из сопутствующих заболеваний у больного имелось ожирение II-III степе- 20 ни обменно-элиментарной формы.

Как следует иэ приведенных примеров, исследования показателей протеолитической активности желудочно-кишечного тракта (активность пепсина, 25 трипсина, ингибитора трипсина, рН желудочного сока и др.) дают представление о нарушениях лишь в отдельных звеньях цепи переваривания белка.

Предлагаемый способ является принци- зр пиально новым, поскольку дает интегральную оценку эффективности протеиназ в желудке и тонком кишечнике, основанную на анализе продуктов переваривания белка.

Результаты исследования с помощью предлагаемого метода больных с различной патологией желудочно-кишечного тракта пищевой аллергией и эдоровых лиц представлены в таблице, Проведенные исследования в клинических условиях продемонстрировали простоту предлагаемого метода, его доступность и относительную безопасность, поскольку общая радиоактивность вводимого белка не превьппает количеств, допустимых санитарными нормами для клинических условий.

Наиболее .сложным в предлагаемом методе является иммунологический анализ полученного материала. Однако до-. статочно высокая оснащенность современных клиник и диагностических лабораторий делает его, тем не менее, вполне доступным для практического здравоохранения.

Формула и з о б р е т е н и я

Способ дифференциальной диагностики первичной пищевой аллергии от вторичной путем клинического исследования больного, о т л и ч а ю щ И йс я тем, что, с целью повьппения точности способа, больному вводят человеческий сывороточный альбумин, меченный " О, через 110-120 мин после введения альбумина производят забор содержимого из проксимального отдела тонкого кишечника и определяют в нем содержание экзогенного альбумина сохранившего антигенные детерминанты, и при значении полученного показателя 1-27. от количества введенного белка диагностируют первичную пищевую аллергию.