Способ реверсии л-форм микобактерий туберкулеза

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

„„Я0„„1247419!

А!1 4 С 12 И /00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ ф, -1,.

ОПИСАниЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ 1„, и

Н АВТ0РСН0МУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ggQgQQ f6ÕË,(21 ) 381 9294/28- ) 4 (22) 06.12.84 (46) 30.07.86, Бюл. Р 28 (71) Семипалатинский зоотехническоветеринарный институт (72) В, С. Федосеев, И. Н, Рубцова, А. Байгазанов и Н. Г. Кириленко (53) 576.8.093.1(088 8) (56) Муратов В ° В. Изучение микобактериальной популяции методом биологического пассажа. — В сборнике трудов ЦНИИ. туберкулеза. М., т. 31, с. 115-119. (54)(57) СПОСОБ РЕВЕРСИИ Л-ФОРМ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА, включающий многократное пассирование суспензии

Л-форм микобактерий через живой организм с одновременным контролем путем высева культуры на плотные питательные среды и микроскопии мазков, отличающийся .тем, что, с целью ускорения способа, пассирование проводят с интервалом в одни .сутки через 7-дневные куриные эмбрионы, при этом суспензию Л-форм микобактерий используют в дозе 0,1-0,2 мп на куриный эмбрион, 12474)9

ВНИИПИ Заказ 4080/26 Тираж 490

Подписное

Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород„ ул. Проектная, 4

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к изучению изменчивости возбудителя туребкулеза, Целью изобретения является ускорение способа. 5

Способ осуществляют следующим обРазом °

Берут 7-дневные куриные эмбрионы, путем овоскопирования определяют место расположения зародыша. Затем с 10 соблюдением правил асептики производят заражение эмбрионов в желточный мешок культурами Л-форм микобактерий туберкулеза. Пастеровской пипеткой набирают культуру Л-форм с модифицированной срецы Нкольниковой и заправляют " òåð,èëüíûé шприц. IIocne чего скорлупу яйца с эмбрионом над воздушным пространством обрабатывают спиртом, в центре его прокалывают 20 отверстие и прозводят заражение 0,10,2 мл в желточный мешок, расположенный с противоположной стороны от зародыша. Затем отверстие в скорлупе заливают парафином и зараженные эмб- 25 рионы помещают в термостат с температурой 35-37 С и влажностью 60-65%.

По истечении одних суток отверстие над воздушной камерой вскрывают, . пастеровской пипеткой набирают часть желтка для приготовления мазков и окраски их по Циль-Нильсену,. а также высева на питательные среды Левенштейна-Иенсена. Этим же желтком заражают свежие 7-дневные эмбрионы, в той же дозе. И так в последующем до получения реверсии, которая наступает, начиная с 3-4-го пассажа. 0бнаруживают ее в окрашенных мазках, где выявляются кислотоустойчивые палочки. Рост типичн»гх колоний возбудителя появляется на 12-14-e сутки в зависимости от вида микобактерйй туберкулеза, Пример 1. Взята культура

Л-форм микобактерий, выращенная на полужидкой среде Школьниковой в модификации И. Р. Дорожковой, выделенная из материала от животных. При фазовоконтрастной микроскопии нативных препаратов обнаружены микроструктурные элементы Л-форм в виде скоплений сферических вакуолизированных элементов, шаровидных тЕл и однородной зернистой массы. С целью получения реверсии в жепточный "1ешок 7-дневных куриных эмбрионов вводят 0„1-0,2 мл Л-культуры. Заражение и пассаж производят по описанной методике. Через сутки из желтка зараженного эмбриона готовят rrpE парат и окрашивают по методу

Циль-Нильсена. Микроскопия препарата показывает наличие скоплений сферических вакуолизированных элементов и зернистьгх масс, окрашенных в синий цвет, При микроскопии мазка,:приготовленного из желтка эмбриона 2-го пассажа, просматриваются неккслотоустойчивые палочки различных размеров и форм, Встречаются также и скопления сферических элементов. Микроскопией мазка из эмбриона 3-го пассажа устанавливают наличие отдельных кислотоустойчивых палочек B смеси с некислотоустойчивыми. В препаратах 4-ro пассажа кислотоустойчивость хорошо выражена. Из желтка этого эмбриона производят высевы на среду ЛевенштейнаИенсена и через 14 сут наблюдают рост типичных колоний микобактерий, I p и м е р 2. Культурой Л-форм микобактерий, выделе пой из лимфатических узлов крупного рогатого скота., заражен 7-цневный куриньгй, эмбрион, В окрашенных препаратах первого пассажа просматривают кислотоустойчивую зернистую массу и скопления шаровидных тел, окрашенных в синий цвет.

При микроскопии препарата из эмбриона 2-гс пассажа наряду с кис Io rî c точивой зернистой массой обнаруживают некислотоустойчивые нити. При 3-м пассаже. обнаружены кислотоустойчизые палочки и нити в смеси с некислотоустойчивыми. IIpp,: 4-м пассаже у(ТВНоВ лено наличие кйслотоустойчивых бак— .ерий. При посеве желтка из эмбриона

4-го пассажа на 20 — е сутки получен рост типичных колоний микобактерий на пло..ньг средах.

Использование изобретения позволяет ускорить сроки получения ревертантов. 1-форм микобактерий туберкулеза,