Щтамм бактерий lisтеriа моnосyтоgеnеs, используемый для изготовления антигена для диагностики листериоза
Штамм бактерий Listeria пюпо- cytogenes ВГНКИ № Д/7-3, используемый для изготовления антигена для диагностики листериоэа. со сх ю со ее
СОЮЗ СОВЕТСКИ К
СОЦИАЛИСТИЧЕСИИХ
РЕСПУБЛИК
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ
И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУД АРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OYHPbfAO (46) 2.3. 02. 93. Г)юп. Р 7 (21) 3623293/15 (22) 29.04.83 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии (72) И.А. Бакулов, В.Д. Саввэ, В.М. Котляров и Л.Ф. Николайчук (56) Николайчук Л.Ф. Диссертация на соиск. уч. степени канд. биологических наук. Покров, 1974, с. 64, 71-.72.
Авторское свидетельство СССР
В 754859, кл. А 61 К 39/02, 1980.
„„SU„„1238293 А1 (51)5 А 61 К 39/02 С 12 М Р (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ LISTERIA HONOCYT0GENFS ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ АНТИГЕНА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ЛИСТЕРИОЗА, (57) Штамм бактерий Listeri.a monocytogenes ВГНКИ В Д/7-3, используемый для изготовления антигена для диагностики листериоза.
1238
2 3 3 свинки вь зынает кератсжонъюнктиннт на 2-4 сут.
Антигенная структура: О-У, У1;
H-А,В,С.
Антигенная формула штамма 1.isteria monocytogenes ВГНКИ М Д/7-3 широко представлена в природных штам мах второй серологической группы, на которые вырабатываются противолис териозные 7 8- и 19 S-антитела в сыворотке крови. Полученный из данного штамма листериозный инактиниронан ный антиген обладает в реакции агглютинации высокой активностью, серогрупповой специфичностью, а также позволяет дифференцировать постинфекционные антитела от поствакцинальных, что весьма важно при диаг- . ностике листериоза.
Пример 1. Для изготовления антигена штамма Listeria monocytogenes ВГНКИ Ф Д/7-3 высевают и колбу с мясо-пептонным бульоном и инкубируют при 37 С н течение 18-20 ч °
Затем чистой, не содержащей посторонней микрофлоры бульонной культурой засевают матрасы с 2„5%-ным мясопептонным агаром, которые помещают (агаром вниз) н термостат при 37 С на 18-20 ч для получения обильного роста бактерий. Выросшую биомассу смывают стерильным физиологическим раствором. Полученную взвесь бактерий автоклавируют 30-45 мин при
1-1,5 атм. Затем антиген трижды центрифугируют в физиологическом . растворе в течение 30 мин при
5000 G и готовят концентрацию
200 млрд микробных тел н 1 мл, используя оптический стандарт мутности ГИСК им. Л.A. Тарасевича, после чего антиген лиофильно высушивают.
Пример 2. Антигены, полученные аналогично примеру 1, использовали для постановки PA с целью диагностики листериоэа. Содержимое ампул (лиофилизированный антиген) растворяют в 100 мл физиологического раствора, при этом антигены приобретают вид белой или слегка желтоватой суспенэии. Концентрация антигенов после растворения составляет 5 млрд микробных тел в 1 мл.
PA проводят в 1 мп: н серологическую пробирку наливают 0,5 мл разведенной исследуемой сыворотки крови и добавляют 0,5 мп растворенного антигена. Содержимое пробирки тщательно
Изобретение относится к oáëaсти медицины и нетеринарни, а имеHHQ к микробиологии и иммунологии, выявлению специфических протнволистериоэных антител.
Пелью изобретения является штамм листерий ВГНКИ, обладающий высокой агглютинабельностью н серологической специфичностью, используемый для получения инактивированного антигена. 10
Штамм Listeria monocytogenes
У 634/20 получен путем селекции на питательной среде. Этот штамм депонирован в коллекции микроорганизмов
Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени государственного научноконтрольного института ветеринарных препаратов под У- Д/7-3.
Особенностью штамма является вы-. сокая агглютинабельность, серогруппоная специфичность, высокая потенция роста, способствующая получению большого количестна биомассы, используемой для изготовления антигена, что предопределяет рентабельное . 2
его производство.
Штамм Listeria monocytogenes
ВГИКИ Р Д/7-3 характеризуется следующими признаками.
Морфологические признаки: бактерии представляют. собой мелкие грамположительные подвижные палочки без спор и капсул; длина палочек 1
1,5 мк, ширина 0,5-0,7 мк; клетки с перитрихиально расположенными жгутиками.
Культуральные свойства: на мясопептонном агаре бактерии образуют нежные„ с голубоватым оттенком, колонии S-формы; н мясо-пептонном бульоне через 16-18 ч отмечается равно40 мерное помутнение среды, н дальнейшем бульон просветляется, на дне пробирки образуется. довольно плотный осадок„ ко тарый при встря)синанми поднимается в виде косички; на кровяном
arape с эритроцитами барана бактерии образуют Р-гемолиэ.
Ферментативные свойства: листерии сбражинают до кислоты беэ газа глюкозу, мальтоэу, рамнозу, салицнн, 50 трегалозу, эскулин и не разлагают дульцит, инулин„ раффиноэу; не образуют индол и сероводород, но обладают каталазной ферментативной активностью, SS
Вирулентные свойства: штамм нирулечтен для лабораторных животных, прн нанесении на конъюнктиву морской
1238? 93 пгремешиэяют помс .шают В термосTRт при 37 С на 18-20 ч. Затем нх оставляют при комнатной температуре в течение 1,5-2 ч, после чего учитывают результаты реакции. Реакция признает- ся положительной при обнаружении четко выраженного осадка на дне пробирки при полном просветлении жидкости над осадком, который прн встряхивании пробирки разбивается на крупные 10
Хлопья, комочки (агглютинация антигена).
Для сравнения исследовали антигены, полученные из штаммов листерий
634 и 634/20. Результаты исследования ц приведены в табл. 1 и 2.
Таблица 1
Сравнительное изучени активности антигенов 2-й серологической группы в реакции агглютинации 20
Таблица 2
Активность сывороток кроликов, гипериммунизированных различными антигенами 2-й серологнческой группы, в PA с гомологичшж
- антигеном
Кроличья сыворотка
Штамм листерий, используемый для иммуни зации
Титр антител в PA с антигеном штамма листерий
634/20
1: 160
1:80
1:80
634
АнтисыворотТитр антител в PA c антигеном, приготовленным из штаммов
Антисы1: 160 воротка серовара штам мов лис терий
1:40
634/20 ка
634
1: 1280
1:2560
1: 640
1:2560
1: 5120
1:40
1: 640
1: 1280
1: 1280
634/20
1:80
3 1:80
4 1:160
5 1:40
1:2560
1: 1280 35
4в
6 1:80
7 1:160
1:2560
1: 5120
Таким образом, результаты сравнительных исследований показали преищ. мущество антигена, полученного из штамма листерий 634/20.
8 1:160
1: 5120
Составитель В. Романова
Техред М. Ходанич
Редактор С. Рекова
Корректор И Эрдейи
Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Заказ 1099
Производственно-полиграфическое предприятие. г. Ужгород, ул. Проектная, 4
