Способ приготовления питательной среды для культивирования грибов-продуцентов ферментов

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ.

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

А1.„SU 242520 GO 4 С 12 N 9/00, 1/00//С 12 N 9/00, С 12 R 1:645

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Ц(Щй;: :4

К A BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

1 1О ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3636487/28-13 (22) 22о08.83 (46) 07.07.86. Бюл. № 25 (71) Всесоюзный научно-исследовательский биотехнический институт и Приволжский биохимический завод (72) Б.А. Величко, П.И. Соловьев, И.И. Фроловский и Т.В. Полянская (53) 577.15(088.8) (56) Иваницкая Л.П., Сингал Э.М., Водункова Л.Е. и др. Направленное вьщеление из природных субстратов грамотрицательных неспорообразующих бактерий.-Антибиотики, 1984, ¹ 10 с. 725-729.

Авторское свидетельство СССР № 1004472, кл. С t2 N t/20, 1982.

Авторское свидетельство СССР № 497836, кл. С 12 N 9/42, 1977.

Промьппленный регламент на производство Пектофоетидина, ГЗХ. Главмикробиопром, утв. 26. 12.80. (54)(57) 1. СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ

ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ

ГРИБОВ-ПРОДУЦЕНТОВ ФЕРМЕНТОВ, предусматривающий смешивание источников углерода, азота и минеральных солей в воде, отличающийся тем, что, с целью предотвращения развития кокковой инфекции в процессе культивирования продуцента, а также получения комплекса ферментов широкого спектра, в среду дополнительно вводят отход биомицинового производства в виде культуральной жидкости с остаточной активностью биомицина 40

50 ед./мл в количестве 3-25 об.X.

2. Способ по и. i, отличаюшийся тем, что для культивирования продуцентов амилолитических ферментов отход биомицинового производства вводят в количестве 10 — 25%.

3. Способ по и. 1, о т л и ч а юшийся тем, что для культивирования продуцентов целлюлолитических ферментов отход вносят в количестве

3-8Х.

4. Способ по и. 1, о т л и ч а юшийся тем, что для культивирования продуцентов пектолитических ферментов отход вносят в количестве 6

10Х.

124 0

1!эобретение относится к микроби— алогической промышленности, в част- ности к производству ферментов, и может быть использовано при получении амилолитических ферментов для спиртового производства целлюлолитических и пектолитических ферментов для сельского хозяйства.

Цель изобретения — предотвращение развития кокковой инфекции в процессе культивирования продуцентов ферментов, а также получение комплекса ферментов широкого спектра.

При производстве биомицина образуется значительное количество отходов в виде культуральной жидкос.ти с остаточной активностью биомицина 50

90 ед./мл, которые сбрасываются на очистные сооружения, что ингибирует микрофлору очистных сооружений и они с не справляются с очисткой технических сточных вод. Утилизация отходов биомициновога производства позволит улучшить условия очистки сточных вод за счет исключения процесса ингибирования микрофлоры очистных сооружений.

Сущность изобретения заключается в том, что в питательную среду для культивирования грибов-продуцентов ферментов, содержащую источник углерода, источник азота и м!гперальные компоненты, дополнительно вводят отход биомицинового производства в виде культуральной жидкости с остаточной активностью биомицина 40-50 ед./мл в количестве 3- 25 о6. 7..

Пример 1. Для культивирования продуцентов амилолитических ферментов готовят гидролизат ржанопшеничной муки и пшеничных отрубей, вводят кукурузный экстракт 0,5%. Отход биомицинового производства вво дят в количестве 107. от объема среды, доводят объем среды до 1 л водой.

Приготовленную таким образом среду стерилизуют, охлаждают и засевают

Aspergillus awamori F-122 — продуцентом амилолитических ферментов.

Культивируют при 28 С при аэрации 1 объем воздуха на 1 объем среды в течение 72 ч. Получают, глубинную культуру с активностями -амилазы

15,8 ед./мл и глюкаамилазы

31,3 ед. /мл.

При культивировании этого же штамма на среде указанного состава, на без добавления отхода биомицинового производства активность глубинной

Ь

15«

50 культуры: " -амилазы 18,4 ед./мл, глюкоамилазы 26,3 ед./мл .

Пример 2. Готовят среду, как описано в примере 1, но дополнительно вводят 257. отхода биомицинового производства. Засевают среду тем же штаммом -и культивируют его в описанных условиях.

Получают глубинную культуру с активностями: M -амилазы и глюкоамилазы соответственно 12,9 и 25,4 ед/мл.

Пример 3. Смешивают в воде

47. свекловичного жома, 1,87. солодовых ростков, 5% зерна-картофельной барды, (ИН,,), SO, 0,67; KH P0, 0,27;

М,,SO, 0,,06 .: .и 3% культуральной жидкости, являющейся отходом биомици1нового производства. Полученную среду стерилизуют, охлаждают и засевают

ТгicIEoderma viri

168

Целлюлазная активность по гидролизу фильтровальной бумаги 18,3 ед./мл

Э(5), При культивировании этого же штамма в описанных условиях на среде, приготовленной без отхода биомицинового производства, целлюлазная активность по гидролизу фильтровальной бумаги. составляет 18, 1 ед./мл.

Пример 4. Смешивают 37 свекловичного жома, 107. вытяжки солодовых ростков, 0,77, сернокислого аммония, 0 17 фосфорнокислого калия, 0,05% сернокислого магния и 77. отхода биомицинового производства в виде культуральной жидкости. Полученную таким образом среду стерилизуют, охлаждают до 28 С и засевают продуцентом пек:толитических ферментов Лзрегgilt.us foetidus.

Культивируют штамм при аэрации в течение 120 ч. ГГектолитическая активность в фильтрате культуральной жидкости составляет 4,2 ед./мл (интерферометрический метод).

В контрольном опыте (без добавления отхода биомицинового производства) пектолитическая активность

4,13 ед./мл.

Пример 5. Производят рассев на производственной среде, используемой при производстве амилолитического комплекса ферментов (по примеру !), содержащей ?,57. агара, выделение кокковой инфекции 8г.гергососсцз и накопление ее на той же производственной среде в течение 72-80 ч.!

2425

Антибиотик

АС, Начальныи Конечныи ед./мл титр кле- титр клеток ток

Дозировка, ГлА, ед./100 мл ед./мл

5 1,2xi0 0,95х10

Стрептомицин

1250

Отход производства биомицина в виде фильтрата (хлортетрациклин) 10 1, 2х10 О, 03х10

1250

Составитель Е. Воробьева

Техред О.Гортвай Корректор О. Луговая

Редактор В. Петраш

Тираж 490 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, Ж-35,Раушская наб., д. 4/5

Заказ 4092

Производственно-полиграфическое предприятие; г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Полученную культуральную жидкость с титром 1х10 млн/мл в количестве

5% засевают одновременно суспензией спор Aspergillus avamori F-122 в колбы объемом 700 мл, содержащие по

100 мл производственной питательной среды, используемой для получения амилолитического комплекса ферментов.

В четыре колбы вводят стрептомицин в количестве 1250 ед./100 мл, а в 10 другие четыре колбы — по 250 мл отхода биомицинового производства (хлортетрациклина) с остаточной активностью биомицина 50 ед. /мл (т.е. в 100 мл 1250 ед.), культивируют

72 ч, отбирают пробы и микроскопически определяют наличие кокковой инфекции.

Влияние антибиотиков на активность ферментов и титр кокковой инфекции. представлено в таблице.

20 Использование отхода производства биомицина в виде фильтрата с остаточной активностью 50 ед./мл в коли— честве 257. к объему питательной средь> позволяет снизить количество нежелательной кокковой инфекции, сохраняя при этом о — и глюкоамилазную активности и необходимое соотношение их в ферментном комплексе.

Таким образом, предлагаемый способ"позволяет исключить нестерильные процессы (кокковую инфекцию) при получении таких ферментов как Амилоглюкаваморин Гх, Пектофоетидин ГЗх, Целловиридин ГЗх, а также улучшить работу очистных сооружений, так как сброс в канализацию отхода, биомицинового производства ингибирует полезную микрофлору очистных сооружений, что приводит к снижению качества очистки сточных вод.