Способ прогнозирования течения псориаза

 

Изобретение относится к иммунологии . Цель изобретения - повышение точности прогнозирования течения псориаза. Раствор эритроцитов барана смешивают с гемолитической сывороткой, инкубируют и отмывают при центрифугировании. Смешивают лимфоциты и сенсибилизированные эритроциты. В следующих 3 лунках для определения спонтанного разрушения эритроцитов смешивают раствор Хенкса с эритроцитами . Для определения максимального лизиса эритроциты смешивают с дистиллированной .водой, инкубируют, центрифугируют и снимают супернатант. К супернатанту добавляют раствор бензидина в ацетатном буфере и перекись водорода. При спектрофотометрии определяют интенсивность окрашивания. Затем определяют процент антителозависимой цитотоксичности. При цитотоксической активности лимфоцитов & в пределах до 23% прогнозируют затяжное (Л течение псориаза.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„5U„„1263250 (59 4 А 61 К 39/00, J 01 N ЗЗ/49

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3892500/28-14 (22) 1 1.05.85 (46) 15.10.86. Бюл. № 38 (71) Рижский медицинский институт (72) А. Я. Рубино, А. Л. Машкиллейсон, Х. М. Векслер, Ж. П..Граудиня и Л. Е. Полуэктова (53) 615.375 (088.8) (56) Рубинс А. Я. и др. Некоторые показатели неспецифической реактивности и иммунитета у больных псориазом. В кн: Активные вопросы дерматологии и венерологии, Рига, 1984, с. 15 — 18. (54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ

ТЕЧЕНИЯ ПСОРИАЗА (57) Изобретение относится к иммунологии. Цель изобретения — повышение точности прогнозирования течения псориаза, Раствор эритроцитов барана смешивают с гемолитической сывороткой, инкубируют и отмывают при центрифугировании. Смешивают лимфоциты и сенсибилизированные эритроциты. В следующих 3 лунках для определения спонтанного разрушения эритроцитов смешивают раствор Хенкса с эритроцитами. Для определения максимального лизиса эритроциты смешивают с дистиллированной .водой, инкубируют, центрифугируют и снимают супернатант. К супернатанту добавляют раствор бензидина в ацетатном буфере и перекись водорода. При спектрофотометрии определяют интенсивность окрашивания. Затем определяют процент антителозависимой цитотоксичности. При цитотоксической активности лимфоцитов в пределах до 23% прогнозируют затяжное течение псориаза.

1

Изобретение относится к медицине, касается вопросов прогнозирования течения заболевания кожи, в частности прогнозирования наступления ремиссии псориаза.

Целью изобретения является разработка повышения точности прогнозирования течения псориаза.

Способ осуществляется следующим образом.

Для определения антителозависимой цитотоксичности лимфоцитов (АЦЛ) периферической крови используют в качестве клеток-мишеней эритроциты барана, сенсибилизированные кроличьей антисывороткой к ним в субагглютинирующем титре. Для этого 1 мл 2,5о/о-ного раствора эритроцитов барана смешивают с 1 мл кроличьей гемолитической сыворотки в разведении 1:6401:1280. Инкубируют при 37 С 30 мин и затем отмывают 2 раза раствором Хенкса центрифугированием при 1500 об/мин в течение

5 — 7 мин. Сенсибилизированные эритроциты разводят до концентрации 1 10 —

2.10 кл/мл и используют в дальнейшем

Лимфоциты периферической крови, выделенные общепринятым способом на градиенте плотности фиколл — верографина (Ы = 1,078 г/см), отмывают 3 раза раствором Хенкса и доводят до концентрации

2 10 кл/мл. Затем в 96-луночных круглодонных планшетах для иммунологических исследований смешивают 0,1 мл лимфоцитов-эффекторов и 0,1 мл сенсибилизированных эритроцитов смешивают в 3 лунках (опыт) . 0,1 мл эритроцитов и 0,1 мл раствора Хенкса смешивают в следующих 3 лунках для определения спонтанного разрушения эритроцитов (СРЭ) .

Для определения максимального лизиса (мл) 0,1 мл эритроцитов смешивают с 0,1 мл дистиллированной воды. Плату инкубируют

3 ч при 37 С в атмосфере с избытком СО, центрифугируют 10 мин при 1350 об/мин и по 0,1 мл супернатанта снимают в микропробирки (V = 0,5 мл). Для определения цитолитической активности к исследуемым супернатантам добавляют по 0,2 мл 0,1о/оного раствора бензидина в ацетатном буфере (рН 4,6) и 0,2 мл Зо/о-ного раствора перекиси водорода.

Интенсивность появляющегося голубого окрашивания определяют на спектрофотометре СФ 26 при длине волны 765 мм в единицах экстинции.

Процент антителозависимой цитотоксичности определяют по формуле:

АЦЛ (/о) = Ол т ОР3100o/о

ЛЛ вЂ” СР где используют средние показатели 3-х параллельных определений оптической плотности супернатантов.

Пример 1. Больной M. M„ 53 года, болеет псориазом 40 лет. На коже больного множество псориатических высыпаний (псориати263250

Зо

55 ческие папулы, чешуйки) в патологический процесс выявлен 60 /о кожного покрова.

На 19-й день при определении с помощью способа-прототипа содержание лизоцима в периферической крови было выявлено

2,5 мкг/мл, что указывает на затяжное течение или скорости рецидивов заболевания.

При определении К-клеток предложенным способом выявлено 28,8о/о, на основе чего прогнозировано наступление ремиссии. Дальнейшее наблюдение за больным подтвердило правильность прогноза, поскольку была отмечена регрессия высыпания, и с помощью общепринятой терапии был достигнут полный регресс патологического кожного процесса.

Таким образом, учитывая наступление ремиссии (по данным К-клеток), больного можно было выписать для амбулаторного лечения.

Пример 2. Больной С. А., 36 лет, мужчи на, болеет псориазом 4 мес.

На коже больного множество псориатических поражений (псориатические папулы, чешуйки и т.д.) в патологический процесс вовлечено 70о/о кожного покрова.

На 20 — и день с помощью прототипа выявлено содержание лизоцима 4 мкг/мл, что свидетельствует о затяжном течении псориаза. С помощью нового способа на

22-й день выявлено К-клеток 67,0о/о (при режиме 1.10 мл лимфоцитов, инкубации 3 ч и 36 С), что свидетельствует о наступлении ремиссии. Дальнейшее наблюдение полностью подтверждает правильность прогноза новым способом, так как у больного с общепринятыми средствами был достигнут полный регресс высыпаний, а дальнейшее наблюдение в течение 4 мес подтвердило прогноз, в частности не отмечены рецидивы.

Пример 3. Больная Ю. И., 41 год, болеет псориазом 21 год. Лечилась неоднократно стационарно. У больной поражено 90 /о кожного покрова, на котором имеются псориатические папулы и чешуйки, и т д., в процесс вовлечены и суставы (болезненность).

При обследовании больной на 24-й день стационарного лечения выявлено содержание лизоцима, что свидетельствует о неблагоприятном прогнозе — 5,0 мкг/мл.

В тот же день активность К-клеток крови была равна (при режиме 2.! 0 /мл лимфоцитов, инкубации 3,5 ч и 38 C) 0 /„, что также свидетельствует о неблагоприятности прогноза.

Дальнейшее наблюдение за больной подтвердило новый способ неблагоприятности прогноза заболевания — затяжное течение, так как, несмотря на длительное стационарное и амбулаторное лечение, спустя 4 мес после выписки из стационара развился рецидив (появление новых папул по всему телу, усилились боли в суставах) в связи с

1263250

Формула изобретения

Составитель Г. Крюкова

Техред И. Верес Корректор М. Самборская

Тираж 660 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

1 f3035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Редактор М. Келемеш

Заказ 5458/3 чем больная была госпитализирована повторно.

Пример 4. Больной П. С. (история болезни № 4514 от 19.11.84 r.) 54 г., болеет псориазом 20 лет, электросваршик. У больного 50о/в кожного покрова было покрыто псориатическими элементами (папулы, чешуйки) . Обострение процесса началось 2 мес назад. Лечился амбулаторно, но безуспешно. Был госпитализирован в кожное отделение.

При определении лизоцима выявлено

7,5 мкг/мл, что свидетельствует о затяжном течении. При определении К-клеток в периферической крови на 13-й день стационарного лечения их активность была 23,0 /о, что свидетельствует о затяжном течении псориаза. Дальнейшее лечение показало, что больной плохо поддавался терапии и улучшение наступило только на 34-й день стационарного лечения. С остаточными явлениями псориатических высыйаний был выписан из стационара. Однако через 3,5 мес после выписки из стационара развился следуюший рецидив болезни.

Таким образом, с помошью только нового способа был поставлен правильный прогноз болезни об его затяжном течении: дцЛ (o/0) = 0,026Т 100о/о = 23% о — 0,059

Применение изобретения обеспечивает повышение точности прогнозирования наступления ремиссии или развитие затяжного течения псориаза на 40о/о (по прототипу только в 40-60 /о удавалось точно поставить диагноз, а по предложенному способу в 100о/о случаев).

Способ прогнозирования течения псориаза путем исследования крови больного, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, из исследуемой крови выделяют лимфоциты, добавляют сенсибилизированные эритроциты барана и специфическую гемолитическую сыворотку кро20 лика, инкубируют 3 — 3,5 ч при 36 — 38 С, определяют цитотоксическую активность лимфоцитов по лизису бараньих эритроцитов и при активности лимфоцитов в пределах

28,8 — 67,0 /о прогнозируют ремиссию заболевания, а в пределах до 23о/о прогнозируют

25 затяжное течение псориаза.