Способ получения пептидной фракции кумыса,обладающей иммуностимулирующим действием

 

Изобретение относится ft медицине , в частности к способам получения биологически активных веществ. Цель изобретения - получение пептидной фракции кумыса, обладающей стимулирующим действием. Кумыс Из коровьего молока и подсырной сыворотки центрифугируют . Надосадочную жидкость хроматографируют на геле Molselect G-75. Элюируют 0,9%-ным раствором NaCl. Детекцию -пептидной фракции проводят сп ектрофотометрически. Собирают пептидную фракцию и упаривают на вакуумном испарителе. Выделенная пептидная (Ьракция имеет следующий состав,%: С 37,74; Н 5,69; N 2,30; Р 7,14; О остальное. Максимумы поглощения в УФ- спектре при 226 и 280 нм. Молекулярная масса пептидной фракции 500-4000. Вещество дает положительную реакцию на биурет и нингидрин. О) ю со ел Q1

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСН ИХ

РЕСПУБЛИН

А1 (1% ПП

gy g А 61 К 37/02

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

fl0 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (46) 30.03.89. Бюл. N - 12 (21) 3750875/28-14 (22) 05.06 ° 84 (71) Кубанский государственный университет (72) А.Я.Шурыгин, Э.И.Злищева, М.А.Тынянова, Е.Ф.Чернушенко, Ж.Г.Расулов и Л.В.Шурыгина (53) 613.. 287. 6: 615. 45 (088 ° 8) (56) Авторское свидетельство СССР

В 571267, кл. A 61 К 35(78, 1977. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДНОЙ ФРАКЦИИ КУМЫСА, ОБЛАДАКЩЕЙ ИММУНОСТИМУЛИРУМФМ ДЕЙСТВИЕМ (57) Изобретение относится к медицине, в частности к способам получения биологически активных веществ. Цель изобретения — получение пептидной фракции кумыса, обладающей стимулирующим действием. Кумыс из коровьего молока и подсырной сыворотки центрифугируют. Надосадочную жидкость хрома-. тографируют на геле Molseleet G-75.

Элюируют 0,9Х-ным раствором NaCl.

Детекцию -пептидной фракции проводят спектрофотометрически. Собирают пептндную фракцию и упаривают на вакуумном испарителе. Выделенная пептидная дракция имеет следующий состав,Х:

С 37 74; H 5 69; И 2 30; Р 7 14; О остальное. Максимумы поглощения в УФспектре при 226 и 280 нм. Молекулярная масса пептидной фракции 500-4000, Вещество дает положительную реакцию на биурет и нингидрин, 1 129555

Изобретение относится к медицийе, в частности к способам получения биологически активных веществ, обладающих иммуностимулирующим действием.

Способ осуществляется следующим образом.

Пример 1. 50 мл кумыса из коровьего молока и отходов сыродельческой промышленности — подсырной сыворотки центрифугируют при 10000 об/мин 10 (6500 g) в течение 10 мин. Затем надэсаяочную жидкость хроматографируют на геле Molselect 6-75 (BHP) (колонка 0,8 м х 0,05 мл, 450 мл геля). Элюируют 0,9 -ным раствором NaCl. Детек- 15 цию пептидной фракции проводят спектрофотометрически при 280 нм. Собирают

400 мл пептидной фракции и упаривают при пониженном давлении на вакуумном о испарителе при 30-40 С до объема . 20

15 мл. Выделенная пептидная фракция представляет собой опалесцирующую жидкость желтоватого цвета и имеет элементный состав, Ж: С 37,74; Н 5,691

N 2,30; Р 7. 14; О остальное. Основные

«\ полосы ИК спектра, см, раствор в диметилсульфоксиде: 3400 с, 3000 ср, 2950 ср, 2150 сл, 1680 с, 1259 сл.

Максимумы поглощения в УФ-области при.226 и 280 нм (в водном растворе), Молекулярная масса пептидной фракции 500-4000. Вещество дает положительную реакцию на биурет и нингидрин.

П р и и е р 2. 50 мл кумыса, полученного из коровьего молока и отходов сыродельческой промышленности подсырной сыворотки центрифугируют в течение 12 мин при 10000 o6/мин (6500 g) . 45 мл надосадочной жидкости хроматографируют на гене Molseleet

С-75, элюируют 0,9 .-ным раствором

NaCl Получение химически чистого продукта достигается за счет того„ что на хроматографическую колонку на45 носят 45 ил надосадочной жидкости, полученной после центрифугирования

50 мл кумыса.

При хроматографнровании в результате размывания хроматографической зоны, получают 400 мл пептидной фракции, содержащей смесь пептидов с приведенными характеристиками.

Выход пептндных фракций детектируют спектрофотометрически, сбор фрак55

7 2

30-40 С до объема 15 ип. Выделенная пептидная фракция представляет собой опалесцирующую жидкость желтоватого цвета и имеет элементный состав, .:

С 33,64; Н 6,01; N 2,80; P 8,56;

О остальное,. Основные полосы ИК-спект- ра, см, раствор в диметилмульфоксиде: 3400 с, 3000 ср, 2950 ср, 2150 сл, 1680 с, 1250 сл, в УФ-спектре: 226 и 280 нм в водном растворе.

Молекулярная масса 500-4000. Вещество дает положительную реакцию на нингидрин и биурет. !

При исследовании влияния пептидной фракции на пролиферативную активность лимфоцитов периферической крови у морских свинок берут 1 мл крови из сердца в стерильные пробирки беэ

KoHGeðâàíòa. 0,3 мл крови культивируют в пробирках иэ нейтрального стекла в общем объеме 5 мл на среде Игла

М3М с добавлением 20% сыворотки крупного рогатого скота. Кровь культивируют в трех вариантах: 1) нестимулированнал контрольная группа; 2) культура с неспецифическим стимулятором

/ фитогемагглютинином фирмы Reanal (Венгрия) в концентрагии 40 мкг/мл;

3) культура, стимулированная пептидной фракцией., полученной иэ кумыса * в концентрации 40 мкг/мл. Череэ 72 ч снимают надосадочную жидкость, встряхивают осадок и в каждую пробирку ! добавляют по 10 мл 10 -ной уксусной кислоты для гемолиза эритроцитов. 3атем центрифугируют в течение 10 мин при 3000-4000 об/мин, снимают надосадочную жидкость, добавляют 5-6 капель фиксатора (этанола), ресуспендируют осадок н переносят на предметное стекло. Мазки. высушивают, окрашивают и проводят подсчет содержания бластов на 300"400 клеток. Анализ показывает, что пролиферативная активность лимфоцитов при стимуляции пептидной фракции в 1,3 раза выше, чем при стимуляции, например,. фитогемагглютинином.

При стимуляции фитогемагглютинином количество бластов 19,9+0,269, а при стимуляции пептндной фракций 25,01 0,527.

Формула изобретения (roe Ve

V — свободный о упаривают при

Ve ции начинают при о объем элюци и фр а к ции; объем колонки). Затеи

Способ получения пептидной фракции кумыса, обладающей иммуностимулирующим действием, включающий центрифугиСоставитель Л.Шилина

Редактор Л.Волкова Техред И.Попович Корректор И. Эрдейи

Заказ 1859

Тираж 644 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная, 4

129555 рование пробы в течение 10-12 мин при

6500 g, хроматографию на геле Molse$ect С-75, элюцию физиологическим раствором и получение целевого продукта в объеме элюции с максимумом по7 4 глощения в УФ-спектре 226 н 280 нм с молекулярной массой 500-4000 и имею-, щего следующий элементный состав.Х:

С 34,50; -0,96; Н 6,00 0,40, К 2 ° !3 f

+0,43; P 7,84+0, 75; 0 остальное.