Способ получения вещества,специфически связывающего ракоэмбриональный антиген опухолей толстого кишечника человека

 

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано для вьщеления вещества, спехщфически связывающего раковоэмбриональный антиген (РЭА), Цель изобретения - повьшение специфической активности вещества путем его дополнительной очистки на РЭА-сефарозе и гель-хроматографии. РЭА-сефарозу используют в качестве аффинного сорбент.а, ее готовят иммобилизацией очищенного РЭА на бромциансефарозе. На колонку с РЭА-сефарозой, уравновешенную буфером

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (SD 4

Л„.

° ааат т тт °, "-.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3783598/28-14 (22) 24.08,84 (46 ) 15, 1 0.87 . Бюл. №- 38 (71 ) Тихоокеанский институт биоорганической химии Дальневосточного научного центра AH СССР (72) А,В,Курика, А.Ф.Павленко, И.А,Коржиков, И.В,Чикаловец и 10.С.Оводов (53) 6I5.373(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

¹ 1077090, кл. А 61 К 37/02, А 61 К 39/00, 1983. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, СПЕЦИФИЧЕСКИ СВЯЗЫВА10ЩЕГО РАКОВОЭМБРИOHAJ1bHbIA AHTE1 EH OII7XOJIEA TOJICTOI 0

КИШЕЧНИКА ЧЕЛОВЕКА (57 ) Изобретение относится к биохимии и может быть использовано для выделения вещества, специфически связывающего раковоэмбриональный антиген (РЭА), Цель изобретения — повышение специфической активности вещества путем его дополнительной очистки на

РЭА-сефарозе и гель-хроматографии.

РЭА-сефарозу используют в качестве

„.SU, 1287 О А1 аффинного сорбента, ее готовят иммобилизацией очищенного РЭА на бромциансефарозе. На колонку с РЭА-сефарозой, уравновешенную буфером (0,05 M трис-НСI с 0,15 M NaCI, 5 мИ CaCIg и MgClg), наносят раствор экстракта ткани рака-отшельника, содержащего РЭА-связывающее вещество с титром 10 мкг/мг вещества, После нанесения раствора лиофилизата колонку дополнительно промывают уравновешивающим буфером. Связывающееся с сорбентом вещество элюируют 0,090,15 M раствором лактозы на том же буфере. Элюант концентрируют на мембране "Рипор-3", Сконцентрированное вещество хроматографируют на колонке с биогелем Ц-100. Затем элюируют с линейным градиентом лактозы 0-0,5 M.

Собирают фракции с мол.мас. 3600046000 дальтон. Затем концентрируют их ультрафильтрацией на мембране

"Рипор-3", диализуют против дистилФ ® лированной воды и лиофилизуют. Получают химически и иммунохимически го-, могенное вещество, Q0

1287880

Составитель М.Васильев

Техред N. Ходанич Корректор С. Черни

Редактор Е,Папп

Заказ 4938

Тираж 594 Подписное

ВНИИ% Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д,4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r Óæãîðîä, ул.Проектная,4

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано для выделения вещества, специфически связывающего раковоэмбриональный антиген (РЭА) человека.

Цель изобретения — повышение специфической активности вещества за счет его дополнительной очистки на

РЗА-сефарозе и гельхроматографии.

Пример 1, РЭА — сефарозу, ко—

-торую используют в качестве аффинного сорбента, готовят иммобилизацией очи.щенного РЭА на бромциансефарозе (Фармация, Швеция) в соответствии с методикой фирмы-изготовителя. Очищенный препарат РЭА выделяют по известной методике.

На колонку (1,4 х 3,0 см ), заполненную РЭА-сефарозой и уравновешенную буфером (0,05 М трис-НС1 и

0,15 М ИаС1, 5 мМ СаС1 и МяС1, рН ?,2), наносят со скоростью 7,5мл/ч

l2 мл раствор экстракта ткани ракаотшельника, содержащего 400 мг РЗАсвязывающего вещества с титром

10 мкг/1 мг вещества, После завершений нанесения раствора лиофилизата колонку дополнительно промывают уравновешивающим буфером до исчезновения поглощения при 280 нм, пропуская в ,общем случае 30-60 мл буфера через колонку. Связавшееся с сорбентом вещество элюируют 0,09 М раствором лактозы на том же буфере. Элюант концентрируют до объема 1 2-13 мл ультрафильтрацией на мембране "Рипор-3" .

Сконцентрированное вещество хромато— гравируют на колонке (2,6 х 90 см) с биогелем П-100 (50-100 меш. ) . Элюцию проводят буфером (0,05 М трис-HCl с 0,15 М ИаС1, 5 мМ СаС1 и ЯдС1 рН 7,2) со скоростью 20 мл/ч. Собирают фракции с относительной мол.массой 4100+5000, концентрируют их ульт1g рафильтрацией на мембране Рипор-3 до объема 10-15 мл; диализуют против дистиллированной воды и лиофилизуют.

Получают 33 мг химически и иммунохимически гомогенного вещества.

15 Пример 2. Ведут выделение вещества как в примере 1, но осуществляют О 15 М раствором лактозы. Получают 35 мг гомогенного вещества.

20 формула изобретения

Способ получения вещества, специфически связывающего раковоэмбриональный антиген опухолей толстого ки26 шечника человека, путем гомогенизации ткани рака отшельника Paturus pri—

cLeauxii, диализа и лиофилизации экстракта, отличающийся тем, что, с целью повышения специфической

30 активности вещества, лиофилизированHbIH экстракт хроматографируют на РЭАсефарозе, проводят элюциа линейным градиентом лактозы 0-0,5 М, отбирают фракцию, содержащуюся в 0,09-0, 5 М растворе лактозы, далее проводят гельхроматографию и собирают целевой процукт с мол.мас. 36000-46000 дальтон.