Питательная среда для дифференциации энтеробактерий

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть применено при бактериологической диагностике дисбактериоза. Цель изобретения - усиление дифференцирующих свойств среды. Для этого питательная среда для дифференциации знтеробактерий содержит, г/л: в качестве питательной основы сухой триптичес1 ий гидролизат белкознна 6,0-9,0, сухой экстракт кормовых дрожжей 0,4-0,6, агар 15,6-23,4, в качестве поверхностно-активного вещества - алкилбензолсульфонат натрия 0,6-0,75, в качестве индикатора - нейтральный красный-О,025-0,036, натрий виннокислый кислый 0,9-1,1, лактозу 10,0 - 12,0, натрий углекислый 0,5 - 1,0, воду дистиллированную - остальное . Среду кипятят 2-3. мин, фильтруют , разливают в стерильные чашки Петри . Затем чашки со средой подсушивают в термостате. Среда гот.ова для использования . 1 табл. Q S сл N3 (Г) 00 ю Ni;; сл

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5g 4 . С 12 /04

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H АВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3934968/28 — 14 (22) 12.07. 85 (46) 23,03.87.Бюл. М- 11 (71) Научно-исследовательский институт по производству питательных сред (72) B.Ñ.Áàëàêëååö, П.Ш.Гашимова, М.М.Меджидов, Х.М.Алиева, Э.Б.Ома рова и JI.Г,Перепелица (53) 576,8.093,1 (088.8) (56) Прямухина Н,С., Гивенталь Н.И, и др. Использование элетивно-дифференциальа ой среды ВШС в диагностике дизентерии и других острых кишечных инфекций. - 3N3H 9 6 1976, с.66-70, (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ЭНТЕРОБАКТЕРИИ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть применено при бактериологической диагностике дисбактериоза. Цель изоб„„SU„„1298245 А 1 ретения — усиление дифференцирующих свойств среды, Для этого питательная среда для дифференциации энтеробактерий содержит, г/л: в качестве питательной основы сухой триптичес .ий гидролизат белкознна 6,0-9,0, сухой экстракт кормовых дрожжей 0 ° 4-0,6, агар 15,6-23,4, в качестве поверхностно-активного вещества — алкилбензолсульфонат натрия 0,6-0,75, в качестве индикатора — нейтральный красный.0,025-0,036, натрий виннокислый кислый 0,9-1,1, лактозу

10,0 — 12,0, натрий углекислый 0,51,0, воду дистиллированную — остальное, Среду кипятят 2-3.мин, фильтруют, разливают в стерильные чашки Петри, Затем чашки со средой подсушивают в термостате. Среда готова для использования, 1 табл.

45 2 го. Смесь перемешивают в течение

45 мин, Навеску вещества 40 r (она содержит оптимальное количество указанных ингредиентов) вносят в 1000 мл воды, кипятят 2-3 мин, фильтруют, разливают по 25 мл в чашки Петри, Аналогично получают препараты с содержанием минимальных и максимальных концентраций ингредиентов. При этом навеска составляет 3,4 и 4,8 г соответственно на 1 л среды.

Среду используют следующим образом.

Пример 5. Для приготовления микробных взвесей суточные культуры тест-штаммов выращенные на скоо шенном питательном агаре при 37 С, смывают 0,9Х-ным изотоническим раствором хлористого натрия, доводят взвеси до 10 ед. по оптическому стандарту мутности что соответству9 ет 10 микробных клеток в 1 мл.

Затем серийными десятикратньпы разведениями доводят до содержания

10 тыс. (1О ), 1 тыс. (IÎ ) и (10 ), 100 микробных клеток в 1 мл взвеси, Готовят также смесь культур путем о смешивания лактозоотрицательных штаммов (шигелл, сальмонелл, протея) с лактоэоположйтельной кишечной палочкой из разведения 10 в соотношении 1:1, что соответствует 5 тыс, микробных клеток каждой культуры в

1 мл.

-а -7

Иэ разведений 10 и 10 каждой взвеси монокультур, за исключением стафилококка, который высевается иэ разведения 10 (100 мпн. микробных клеток в 1 мп), и смеси культур высевают по 0,1 мл на чашки с предпагаемой и известными средами.

Средами сравнения служат: среда

ВШС и среда Левина.

Учет результатов проводят через о

18-20 ч инкубации посевов при 37 С.

Чувствительность, стабильно сть исходных биологических свойств.и скорость роста испытуемых тест-штаммов на опытной и известных средах одного порядка: отмечается рост .тестштаммов (S. flexneri !! 8516, S.sonnei, S-форма, S. dysent. I, S.typhi H90l» Е.cali 3912/41) при посеве

10 микробных клеток (10 ).

Дифференцирующие свойства: при посеве смеси культур на опытной среде отмечается четкая дифференциация

Пример 3. Готовят среду аналогично примеру 1, но в 1 л дистилли- щ рованной воды вносят .6,0 r сухого триптического гидролизата белкоэина, 0,4 r сухого экстракта кормовых дрожжей, 0,6 r алкилбенэолсульфоната натрия, 0,025 r нейгрального красного, 15,6 г агар-агара, 0,9 r натрия винно-кислого кислого, 10 r лактоэы и

«0,5 r натрия углекислого, Пример 4. Среду можно готовить в сухом виде, В шаровую мельницу емкостью в 1 кг загружают 75 г сухого триптического гидролиэата белкозина, 5 г сухого экстракта кормовых дрожжей, 6,5 г ал- 55 килбенэолсульфоната натрия, 0,3 r нейтрального красного, 195 г агарагара, 10 r натрия винно-кислого, 1!О г лактоэы, 3 r натрия углекисло! 12982

Изобретение относится к медицинс-. кой микробиологии н может быть использовано при бактериологической диагностике дисбактериоза.

Цель изобретения — усиление ди4т- 5 ференцирующих свойств среды.

Hp и м е р 1. 9 г сухого триптического гидролиэата белкозина, 0,6. F сухого экстракта кормовых дрожжей, 0,75 г влкилбензолсульфонат натрия, 0,036 г нейтрапьного красного, 23,4 r агар-агара, l,l r натрия винно-кислого кислого и 12,0 r лактозы растворяют в 1 л дистиллированной воды в колбе. Добавлением 1,0 натрия углекислого устанавливают рН 7,5 0,1.

Среду кипятят 2-3 мин, фильтруют и разливают по 25 ил в стерильные чашки Петри и оставляют на столе для застывания среды при закрытых крышках. Затем чашки со средой и крышки раздельно подсушивают в термостате до высыхания конденсациоиной влаги на KpMIKBx чашек ° после чего послед ние закрывают крышками и среда готова для использования. Цвет готовой среды бледно-розовый, Пример 2. Готовят среду в соответствии с примером 1, но в 1 л дистиллированной воды вносят 7,5 г сухого триптнческого гидролизата белкозина, 0,5 г сухого экстракта кормовых дрожжей, 0,65 г алкилбензолсульфоната натрия, 0,03 r нейтрального красного, 19,5 г агар-агара, I,Ь r 35 натрия винно-кислого кислого, 11,0 r лактозы и 0,8 r натрия углекислого.

1298245

0,4-0,6

15 ° 6-23,4

0,025-0,036

0,5-1 10 сутствие роста, Х

e rtpa

Дифференцирующие свойства

Среда ст кокк оры

Нейтрапв-! рот пактов вый агар

105 Четкие 9

8,6

105 5 14,2 30 28,5 Дифференциация 6 отсутствует в

14 22

3,8

Среда Левина

Составитель Г.Смирнова

Редактор Н,Рогулич Техред А.Кравчук Корректор И,Эрдейи

Заказ 862/26 Тираж 500 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д,4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная, 4 патогенных энтеро бактерий (сальмонелл, шигелл), не ферментирующих лактозу бесцветных колоний от кишечной палочки, ферментирующей лактозу и окрашенных в малиновый цвет.

Диффузного окрашивания среды, в том числе и в Месте скопления колоний кишечной папочки, не отмечается, что является положительным признаком качества среды, обеспечивающим выделение и дальнейшее изучение культур, На среде сравнения ВШС отмечается диффузное пожелтение среды, на фоне которого патогенные микроорганизмы отличаются от непатогенных лишь по степени прозрачности и диаметру колоний, но не по основному признаку, заложенному в среду - по окраске колоний, что значительно затрудняет выделение искомой культуры, Показатель ингибиции, определяемый при посеве стафилококка (10 млн микробных клеток) и вульгарного протея (1000 микробных клеток) на опытной среде и среде ВШС, равнсрначен: на обеих средах стафилококк не растет и протей не роится, На.среде Левина, взятой в качестве контроля, отмечается сливной рост стафилококка и феномен роения протея, Результаты апробации дифференциально-диагностической среды (нейтральрот лактозный агар, 1,2 3 сериисредние данные) на 11 эгапе (при исследовании испражнений) приведены в таблице, Формула изобретения

Питательная среда для дифференциации энтеробактерий „, содержащая

5 питательную основу, углевод, индикатор, поверхностно-активное вещество, агар, дистиллированную воду, о т л ич а ю щ а я с я теМ, что, с целью усиления дифференцирующих свойств, она дополнительно содержит натрий винно-кислый кислый и натрий углекислый, сухой экстракт кормовых дрожжей, в качестве питательной основы она содержит сухой триптический гидролизат белкозина в качестве углевода— лактозу, в качестве индикатора— нейтральный красный, в качестве поверхностно-активного вещества - ал,килбензолсульфонат натрия при следующем соотношении компонентов,г/л: .Сухой триптический гидролизат белкозина 6,0-9,0

Сухой экстракт кормовых дрожжей

Агар

Алкилбензолсульфонат натрия 0,6-0,75

Нейтральный красный

Натрий виннокислый кислый 0,9-3, 1

Лактоэа 10,0-12,0

Натрий углекислый

Дистиллированная вода Остальное