Способ выделения @ @

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для изучения экспериментальной хламидиальной инфекции клеток эпителия. Цель изобретения - упрощение и ускорение способа за счет использования чувствительной клеточной культуры. Пробы подвергают гомогенизации и центрифугируют. Каждую пробу делят на две равные части и прививают на клетки Мак-Коя и Mus musculus cas- taneous (MMC-E). В качестве контроля используют пробы, привитые на буфер с сахарозой и фосфатом. Затем клетки инкубируют, после чего питательную среду удаляют из культуральных трубок . В каждую трубку добавляют метанол и выдержибают в течение 10 мин. После этого метанол удаляют, добавляют раствор Люголя. Через 20 мин этот раствор удаляют и подсчитывают окрашенные включения. СО с ьо со О5 О см

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К flATEHTV

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (2 1) 3637905/28-14 (86) РСТ/ЕХ 82/00063 (15. 12.82) (22) 1?.08.83 (31) 814023 (32) 15. 12. 81 (33) FI (46) 07.03.87. Бюл. У 9 (71) Лабсистемз Ой (FI). (72) Йорма-Кески-Ойа, Поль Партанен и Осмо Суованиеми (FI) (53) 576.8.093. 1(088.8) (56) Gordon F.В., Dressier Н.R., Quan А.Ь., Mc Quilkin M.T. and

Thomas J,I, Effect of ionizing radiation on suscentibility of Mc Coy сеп cultures to Chlamydia trachomatis. — Appl. Microbiol, 1972, 23, р. 1? 3-129.

ÄÄSUÄÄ 1296011 A 5

t5D 4 С 12 Q 1/04, С 12 N 5/00//

/ (C 12 Я 1/04 С 12 R 1;90) (54) СПОСОБ ВЬЩЕЛЕНИЯ СНЬАМУВТА TKACH0MATIS (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для изучения экспериментальной хламидиальной инфекции клеток эпителия. Цель изобретения — упрощение и ускорение способа за счет использования чувствительной клеточной культуры. Пробы подвергают гомогенизации и центрифугируют. Каждую пробу делят на две равные части и прививают на клетки Мак-Коя и Mus musculus castaneous (MMC-Е). В качестве контроля используют пробы, привитые на буфер с сахарозой и фосфатом. Затем клетки инкубируют, после чего питательную среду удаляют из культуральных трубок. В каждую трубку добавляют метанол и выдерживают в течение 10 мин.

После этого метанол удаляют, добавляют раствор Люголя. Через 20 мин этот раствор удаляют и подсчитывают окрашенные включения.

ВНИИПИ Заказ 631/64 Тираж 500

Подписное

Произв.-полигр, пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

1 12960

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для выделения Chlamydia

trachomatis и изучения экспериментальной хламидиальной инфекции клеток эпителия.

Цель изобретения вЂ,упрощение и ускорение способа эа счет использования чувствительной клеточной культуры, не требующей дополнительной под- 10 готовки перед заражением.

Краткая характеристика чувствительной к Chlamydia trachomatis клеточной культуры эпителия эмбриона мьппи Mus musculus castaneous (ИМС-Е).

В ИИС-Е- культуре обнаруживаются плотные сочленения и десмосомные структуры, небольшое количество фибронектипа на поверхности клеток, нити

20 кератина. Клетки МИС-Е це являются опухо леродными и на них выявляются значительные количества рецепторов эпидермального фактора роста.

Культура клеток NNC-Е известна и. может быть получена в Национальном

Институте рака, Фредерик, Nд. у доктора Раппа. Клетки MMC-Å восприимчивы к Ghlamydia trachomatis без допол- 3 нительной обработки перед заражением.

Пример 1. Клетки ИИС-Е выращивают на гибких тканевых пластинках в ВНК-среде, содержащей 10Х фетальной телячьей плазмы и 50 ug гентамицина на 1 мл среды. Высевают 3x)0 клеток в 10 мл питательной среды в широкую пластиковую трубку с плоским дном, имеющую покровное стекло диаметром

13 мм, к которому прекрепляются выращиваемые клетки. Трубки инкубируют при 35 С в 57-ном Со и используют для инркуляции через 1-2 дня, когда количество клеток составляет 10 на

5 покровное стекло.

Клетки Мак-Коя выращивают так же, как и клетки ИКС-Е. Пластиковые трубки с клетками Иак-Коя подвергают облучению до 4500 раз от Со-источни60 ка. Питательная среда заменяется све- 50 жей и клетки инкубируют пру 37 С 72 ч.

Затем их рассеивают в пластиковые трубки в количестве 10 клеток на трубку. После инкубирования в течение

24 ч отбирают жизнеспособные клетки 55 для выделения Chlamydia trachomatis

11 2

Пример 2. В качестве исследу- . емого материала используют пробы из мочеиспускательного канала и из шейки матки пациентов, проходящих амбулаторное лечение. Пробы оттаивают, если они были заморожены, и подвергают гомогенизации при перемешивании в течение 20 с, центрифугируют со скоростью 3000 и в течение 1 ч при о

37 С. Каждая проба делится на две равные части и прививается на клетки

Мак-Коя и МИС-E. В качестве контроля используются пробы, привитые на буфер, содержащий 0,2 N сахарозу и

0,02 И фосфат. Затем клетки инкубируют в течение двух дней при 37 С, после чего питательную среду удаляют из культуральных трубок, в каждую трубку добавляют 1 мл метанола и выдерживают клетки 10 мин при комнатной температуре. После этого метанол удаляют, добавляют 1 мл раствора Люголя и клетки оставляют на 20 мин при комнатной температуре. После этого Люголь удаляют и производят подсчет окрашенных включений на покровном стекле под микроскопом. Включения в клетках

NNC-E имеют размер, соответствующий включениям в клетках Иак-Коя и легко обнарул(иваются. Однако точные размеры включений не определяются из-за их неправильной формы.

Использование клеток ИИС-Е вместо облученных клеток Мак-Коя позволяет ускорить выделение Chlamydia trachoшае1s от 4-5 до 1-2 дней и значительно упростить способ„ так как используемая культура клеток не требует предварительного облучения или обработки другими физико-химическими факторами.

Формула изобретения

Способ выделения Chlamydia trachoma Ы путем заражения исслецуемым

"Ф материалом клеточной культуры с последующим инкубированием, окрашиванием препаратов и учетом включений

Chlamydia trachomatis в клетках ткани, отличающийся тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, исследуемым материалом заражают клетки эпителия эмбриона мьш и

Nius musculus castaneous (NNC-Е) непосредственно после их получения.