Способ выявления иммуноактивных объектов

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

„„SU „„1250576

151) 4 С 12 Q 1/04, G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

Г10 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3694611/28-14 (22) 13.01.84 (46) 15.08,86. Вюл. »" 30 (71) Всесоюзный научно-исследовательский и конструкторский институт медицинской лабораторной техники (72) Н.Н.Князьков и В.Е.Курочкин (53) 576.8.077.3(088 ° 8) (56) Авторское свидетельство СССР

Ф 1208916, кл, С 12 Q 1/04, 1983, (54) (57) С1зОСОВ В11ЯВЛЕНИЯ И11МУНОАКТИВНЬ1Х ОБЪЕКТОВ, путем создания ультразвукового поля в камере исследования и последовательного заполнения ее суспензией иммуносорбентов, пробой исследуемой жидкости, буферным раствором, раствором иммуноглобулина и второй порцией буферного раствора и регистрации сигнала излучения иммуноактивного объекта после прекращен»»я действия ультразвукового поля, о т л и ч а ю ш и и с я тем, что, с целью снижения расхода имму»»оглобулинов и иммуносорбентов и сокраи :»»я времени проведения исследования, после заполнения раствором

»»ммуноглобу ",íà камеры исследования протекание раствора останавливают на 1-3 ми»», создают в камере возвратно-поступательное движение раствора иммуноглобулина с амплитудой движения, равной 0,5 длины волны ультразвукового поля, а после восстановления протекания раствора и введения второй порции буферного раствора дважды проводят регистрацию сигнала излучения иммуноактивного объекта при воздействии ультразвукового поля и после прекра»цения действия ультразвукового поля и осаждения иммуносорбентов.

1О

25

Изобретение относится к технике выявления иммуноактинных объектов на иммуносорбентах с помощью иммуногпобулинов, конъюгированных с метчиками, и может быть использовано н медицине, микробиологии, экологии для экспресс-выявления иммуноактивных объектов.

Цель изобретения — снижение расхода иммуноглобулинов и иммуносорбентон и сокращение времени проведения исследования, На чертеже представлена схема, реализующая способ.

Способ основан на постановке серологической реакции на иммуносорбентах в ультразвуковом поле и выявлении иммуноактинных объектов путем регистрации сигнала от связанных с выявляемыми объектами меченньгх иммуноглобулинов, Способ осуществляется следующим образом.

Создают ультразвуковое поле и в поток жидкой среды пропускают через него суспенэию иммуносорбентов, При том иммуносорбент под действием силы радиационного давления ультразвуK;I удерживается н слоях в ультразвуковом поле, Затем пропускают через ультразвуковое поле исследуемую пробу. Выявляемые иммуноактивные объекты с потоком жидкой среды проходят через слои, образонанные иммуносорбентом в ультразвуковом поле, и вступают с иммуносорбентом в серологическую реакцию.

Далее через ультразвуковое поле пропускают буферный раствор, который вытесняет иs ультразвукового поля жидкую среду исследуемой пробы, После этого в ультразвуковое поле подают раствор меченных иммуноглобулинов, После того, как растнор меченных иммуноглобулинов вытеснит иэ ультразнукового поля буферный раствор поток жидкой среды остананливают и выдерживают смесь иммуносорбентов и меченных иммуноглобулинов !-3 мин.

В процессе выдержки циклически, возвратно-поступательно перемещают раствор меченных иммуноглобулинов на 0,5 длины ультразвуковой волны.

Поскольку ультразвуковое поле удерживает иммуносорбент в слоях, отстоящих друг от друга на 0,5 длины ультразвуковой волны, то заданное перемещение растнг ра мс ч нных иммуноглобулинон достато иго для полного омывания иммуносорбентон раствором, В процесcе выдержки меченные иммуноглобулины вступают в серологическую реакцию с выявляемыми иммуноактивными объектами, фиксированными на иммуносорбентах. После выдержки пропускают через угп,тразяуконое поле буферный раствор, который пымывает меченные иммуноглобулины, не вступившие в серологическую реакцию.

Затем вначале регистрируется информативный сигнал, не включая ультразвуковое поле, а повторную регистрацию проводят после включения ультразвукового слоя и осаждениИ иммуносорбентов на нижнюю поверхность полости камеры исследования.

Пример !. Выявляют риккетсии D. sibiricus В камере (объемом

0,025 см ) создают ультразвуковое поле (частота ультразвуковых колебаний 2,6 мГц, средняя плотность энергии поля 3 Дж/м и последовательно пропускают через ультраэнуковое поле !07.-ную суспензию сефароэного иммуносорбента, суспензию риккстсий Р. sibiricus фосфатный буферный раствор, а затем подают в камеру флуоресцирующие иммуноглобулины, гомологичные к D, sibiricus, останавливают поток жидкой среды и в течение трех минут циклически, возвратно-поступательно перемещают раствор по камере на 0,5 длины ультразвуковой волны. После этого прог|ускают через камеру буферный раствор и регистрируют специфическую флуоресценцию от иммуносорбентов, находящихся н ультразвуковом поле.

Время выявления 6 мин, Расход

3 ингредиентов, см : сефарозный иммуносорбент 0,05; суспензия риккетский 0,2, флуоресцирующие иммуноглобулины 0,03, фосфатный буферный раствор 0,3 °

Пример 2, Выявляют антигены

Fr. tularence.

В камере (объемом 0,026 см ) создают ультразвуковое поле (частота

УЗ колебаний 2,6 мГц, средняя плотность энергии поля 3 Дж/м ) и последонательно пропускают через ультразвуковое поле !07-ную суспензию сефароэного иммуносорбента, антигены, фосфатно-буферный раствор, а затем

15<).. 7

25 подают н камеру флуоресцирующие иммуноглобулины, гомологичные к Рг.

tularencp, огтлнлн.пи««лют поток жидкой среды и в течение 3 мин перемеп«ают иммуносорбенты в камере ltл

О, 5 длины ультразвуковой но«пп«, путем колебания границы рлэделл флз жидкость — воздух н открытом конце кожуха.

После этого пропугклют через кл- lð меру буферный рлгтнор и регистрируют спепифическук ф.<уорсгпе«п«ию от иммуносорбентон, нлходящихгя н ультразвуковом поле, Получают. Время нь«янле «ия 8 м«ш.

Расход ингре iupll Tntl, гм : сефлроэный иммуносорбент 0,05; с угпгпэия антигенон Рг. tulnren«. (),2; фпуореспирующие иммуноглобул«1«п,« 0,01; фосфатно-буфер ый р;«створ 0,3.

П р I! м е р 3. Выян.<яют бруце.«леэHb1e антитела н к poл1««1 < Й cl «Роро rKp, В камере (объемом 0,025 с < ) создают ультразвуковое по 1е 1 «л(тотл ультрл звуковых коле блгп<й 2, 6 м! It, средняя плотность . нс ргии поля 6

Дж/м ) и пocJIprtoнлте.«ьHO пропуск l«T через ультрлэну«<оное по..«е 3 -ную суспенэию эритроцит зp«t

35 на 0,5 длины упьтрлэ!«уконо«1 волны.

После э гого пропус кают «ерс з камеру буфернь«й раствор и регистрируют специфическую флуорггцспцию от эритро40 цитарных сорбентон, нлходящп ся в

3 лк г«!нных объектов, зависит от Knl«ttPHтрлпии пробы и объема, н котором ,льтрлзвуковым п<«лен удержинлютгя пммуносорбенты (оГ ъемл кnt

1«pоГ ы отногитeльно $ казанной Вeлl!

«l1HlI приводит к повышению чувствитель««ости способа, тлк клк при пропускании исследуемой пробь« иммуп«активные объеKTbl концентрируются

1«Л !«эВЕШЛННЫХ Н УЛЬтРЛЗНУКОНОМ ЛОЛЕ пмм„посорбенглх. Однако увеличение

< бъгм<« пробы увеличивает и время вы«

В примерах соотноп«ение объемов пр< 6 к объему клмеры гостанляет со»..нетстненно 8; 8; 4. При этом исполl,зонались пробы с концентрацией пммуполктинных объектов нл пределе

« нгтнительности.

1 уферный раствор используется для

I

Г;<1<ер«««го рлгтнорл зависит от объема и r гэметрии камеры (нллг«чия в клмере

".<лс тойных" зон) и составляет 3-1 5 объс мон камеры.

Объем раствора иммуноглобулина

Jto.<; .eH превышать объем клмеры не меи< е, чем на величину объемл раствора, »,«с(няемого из камеры при перемешинс«1«ии в процессе ныдержки

V Ч +V

11 ультразвуковом поле, Получают, Время выянлеьп!я 9 «гин

Расход ингредиентов, см : суспензии эритроцитарного диагностикума 0,05;

45 кроличьей сыворотки 0,1; флуоресцирующих антикроличьих иммуноглобулинов 0,03; фосфатно-буферного раствора 0,3, В примерах скорость расхода сус- 50 пензии определяется экспериментлль-g л но и равна: пример 1-5 10 м /с; пример 2 — 3 10 м /с; пример 3

2.10 м /с, Соответственно время пропускания суспензии иммуносорбентов 55 составляет: 10 с, 17 с и 25 с.

Количество исследуемой пробы, требуемое для выявления в ней иммуноI Ic 7„ — объем раствора иммуnoIJIo булинл; объем камеры; объем раствора, вытесняемый из камеры при его перемещении в процессе ныдержки.

Объем вытесняемого рлстнора при е«о перемещении на 0,5,) составит

V =$ ° 0,51, 1 где — объем вь«тегняемого рлствора;

S — площадь поперечного сечения камеры.

В примерах « =0,025 < и

<,, >

=0,002 СМ, „=0 03 см

1250576

Составитель Ф.Рогоданский

Редактор П.Авраменко Техред О.Гортвай Корректор F.. Ðîirrêî

Заказ 4377/21

Тираж 490 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва> Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проектная

Устройство содержит датчик 1 информативных сигналов, регистратор

2 сигнала и блок 3 измерений. Блок

Э состоит из генератора 4 ультразвуковых колебаний, средства 5 подачи и средства 6 приема реагентов и растворов, системы 7 термостатирования со средствами подачи и отбора охлаждающей жидкости и узел 8, 10 содержащий держатель 9 с ультразвуковым излучателем 10, кожух 11, камеру 12, сборник 13 охлаждающей жидкости и узел 14 возвратно-поступательного движения раствора, установ- 15 ленный перед входом камеры 12. Кожух

ll открыт с противоположного от держателя 9 торца и на нем установлена камера 12 так, что ее рабочий объем и зона чувствительности датчика 1 пространственно совмещены, а зона максимальной чувствительности датчика 1 совмещена с нижней поверхностью полости камеры 12, В качестве датчика 1 для индика- 25 ции и преобразования в электрический сигнал сигнала от иммуносорбентов используют люминесцентный микроскоп с фотометрической насадкой (при выявлении флуоресцентных метчиков), 30 датчик радиоактивного излучения (при выявлении радиоизотопных метчиков), колориметрический фотометр (при выявлении ферментных метчиков) и другие jIJIR регистрации электрическо- 5 го сигнала используется самописец, вольтметр или цифропечатающие устройства.

Ультразвуковая волна, возбуждаемая ичлучателем 10, распространя- 40 ется в охлаждающей жидкости, омывающей камеру 12 и в жидкости в камере 12. Достигнув мениска охлаждающей жидкости, ультразвуковая волна отражается от границы раздела фаз жид- 4 кость — воздух. Вследствие кривизны мениска отражение происходит под разными углами к падающей волне. В результате интерференции падающей и отраженной ультразвуковых волн, проходящих через камеру 12, в ней образуется поле стоячей ультразвуковой волны, Тепло, выделяемое излучателем 10 и ультразвуковым полем, отводится охлаждающей жидкостью, омывающей камеру 12, что позволяет ее термостатировать. Открытый торец кожуха ll позволяет попвести приемный элемент датчика 1 непосредственно к камере 12.

Устройство работает следующим образом, В кожух 11 с помощью системы 7 теомостатирования подают охлаждающую жидкость. Далее по мере поступления, охлаждающая жидкость переливается через край кожуха 11, попадает в сбор. ник 13 и выводится в систему, Включают генератор 4, возбуждающий ультразвуковые колебания излучателя !О. С помощью средств 5 и 6 подачи и приема — последовательно пропускают в потоке жидкости через камеру 12 суспензию иммуносорбентов, исследуемую пробу и буферный раствор, а затем в камеру 12 подают раствор меченных иммуноглобулинов и оста . навливают поток.

С помощью узла 14 движения раствора возвратно-поступательно перемешают по камере 12 раствор меченных иммуноглобулинов на 0,5 длины ультразвуковой волны, циклически подавая и выводя часть раствора из к- 12.

Через 1-3 мин узел 14 выключают и с помощью средств подачи пропускают через камеру 12 буферный раствор.

Останавливают поток жидкости и с помощью датчика 1 и регистратора 2 регистрируют информативный сигнал от иммуносорбентов, находящихся в камере 12 в ультразвуковом поле. Если концентрация иммупосорбентов мала, то снимают ультразвуковое поле и регистрируют информативный сигнал от иммуносорбентов, осевших на нижнюю поверхность полости камеры 12 °