Способ оценки токсичности стоматологических сплавов

 

Изобретение относится к медицине , а именно к стоматологии, предназначено для оценки токсичности новых стоматологических сплавов. Цель изобретения - повышение точности оценки токсичности стоматологического сплава. Для этого проводят эксперименты . Берут 3 группы подопытньрс животных (крыс) по 10 особей с массой по 3000 г: 1 контрольную, 2 группу , принимавшую смыв со сплава КХС 3 группу, принимавшую смыв со сплава хромированной КХС. В поилку экспериментальных групп напивают воду для питья и опускают в нее изготовленный образец сплава. По истечении . определенного времени наливают свежую воду в том же количестве, а в конце рабочего дня наливают воду для питья в нерабочее время суток. В контрольной группе крысы пьют обычную водопроводную воду. Затравку животных ведут 9 сут. Начиная с 10-х суток животных каждой группы декапитируют, вьделяют из печени митохондрии . Сос тав среды вьвделения, моль: сахароза 0,1; КС1 0,1 и трис-буфер 2 -10 . Состав среды инкубации, в которой исследуют дыхание митохондрий: 0,1 моль сахарозы, 0,1 моль КС1, 2 ммоль трис-буфера, 1 -10 моль фосфата , ротенон 0,5 мкг/мг белка, белок митохондрий 6-8 мг/мл среды инкубации . Степень сопряжения дыхания с фосфорилированием АТФ из АДФ и Ф(ДК) рассчитывают по отношению скорости окисления янтарной кислоты без АДФ в среде инкубации к скорости окисления янтарной кислоты после добавления АДФ. Скорость дыхания митохондрий измеряют полярографически по скорости убьши кислорода в полярографической ячейке в белка в 1 мин. Если скорость дыхания митохондрий и(или) степень сопряжения дыхания с фосфорилированием опытной группы ниже, а ДК не отличается от контрольной группы, сплав считают токсичным . 3 табл. (Л со со

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1 (19) (11) (51)4А 61 В 10 00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOIVIY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

l1O ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 36739 73/28-14 (22) 15. 12.83 (46) 15.05.87. Бюл. )(- 18 (7 1) Одесский научно-исследовательский институт стоматологии (72) Л.В.Пешкова, О.Э.Кнава и В.А.Лабунец (53) 616. 7 (088. 8) (56) Голубничий А.П,Самотвердеющая пластмасса протакрил для приготовления базисов съемных протезов.

Автореф. дисс. канд. мед. наук. Киев, 1982, с. 6-9. (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ ТОКСИЧНОСТИ СТО—

МАТОЛОГИЧЕСКИХ СПЛАВОВ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, предназначено для оценки токсичности новых стоматологических сплавов. Цель изобретения — повышение точности оценки токсичности стоматологического сплава. Для этого проводят эксперименты. Берут 3 группы подопытных животных (крыс) по 10 особей с массой по 3000 r: 1 контрольную, 2 группу, принимавшую смыв со сплава КХС, 3 группу, принимавшую смыв со сплава хромированной КХС ° В поилку экспериментальных групп наливают воду для питья и опускают в нее изготовленный образец сплава. По истечении . определенного времени наливают свежую воду в том же количестве, а в конце рабочего дня наливают воду для питья в нерабочее время суток. В контрольной группе крысы пьют обычную водопроводную воду. Затравку животных ведут 9 сут. Начиьая с 10 — х суток животных каждой группы декапитируют, выделяют из печени митохондрии. Состав среды выделения, моль: сахароза О, 1; КС1 0,1 и трис †буф

2 10 . Состав среды инкубации, в которой исследуют дыхание митохонд рий: 0,1 моль сахарозы, 0,1 моль КС1, 2 ммоль трис-буфера, 1 ° 10 моль фосфата, ротенон 0,5 мкг/мг белка, белок митохондрий 6-8 мг/мл среды инкубации. Степень сопряжения дыхания с фосфорилированием АТФ из АДФ и

Ф(ДК) рассчитывают по отношению скорости окисления янтарной кислоты без

АДФ в среде инкубации к скорости окисления янтарной кислоты после добавления АДФ. Скорость дыхания митохондрий измеряют полярографически по скорости убыли кислорода в полярографической ячейке в МО /мг белка в

1 мин. Если скорость дыхания митохондрий и(или) степень сопряжения дыхания с фосфорилированием опытной группы ниже, а ДК не отличается от контрольной группы, сплав считают токсичным. 3 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно стоматологии, и может быть использовано при оценке токсичности новых стоматологических сплавов.

Цель изобретения — повьш ение точности оценки токсичности стоматологического сплава путем моделирования естественных условий введения пробы.

Способ осуществляется следующим образом. 10

Эксперименты проводились на белых крысах линии Вистар одного возраста.

Животных в количестве 30 особей для каждого параметра разбили на 3 группы по десять в каждой: 1) контрольную, 2) группу, принимавшей смыв со сплава КХС; 3) группу, принимавшей смыв со сплава хромированная КХС.

Вес всех животных в каждой группе в среднем составлял 3000 г. Были изготовлены образцы сплавов (КХС и хромированная КХС) с соответствующей площадью поверхности. В поилку экспериментальных групп наливают определенное количество воды, достаточ25 ное для питья в течение выбранного интервала времени, и опускают в нее изготовленный образец испытываемого сплава. По истечении этогс интервала времени наливают свежую порцию воды в том же количестве. В конце рабочего дня наливают воду, достаточную для питья в нерабочее время суток:. В контрольной группе животные получают в качестве питья обычную водопровод- 35 ную воду.

Затравку животных проводят в течение 9 сут. Все группы животных находятся на обычном пищевом режиме вивария.

Начиная с 10-х сут, животных каждой группы декапитируют, извлекают печень, вьделяют митохондрии (1). Состав среды вьделения, моль: сахароза

О, 1, КС1 О, 1; трис-буфер 2 10 . Сос- 4> тав среды инкубации, в которой исследуются дыхание митохондрий, следующий: О, 1 моль сахарозы, О, 1 моль

КС1, 2 ммоль трис-буфер, 1-10 фосфата, ротенон 0 5 мкг/мг белка, бе- 50 лок митохондрий 6-8 мг/мл среды инкубации, Исходные растворы ЛДФ (5« к10 моль),янтарной кислоты (5 10 моль) среды выделения и инкубации необходимо довести с помощью трис-буфера до 55 значений 7,5. Добавление АДФ и янтарной кислоты в инкубационную среду производят в ходе эксперимента до

1309962 2 концентрации 0,2 ° 10 моль ЛДФ и 5»

«10 моль янтарной кислоты.

Определение белка проводят по Лоури и (2) . Скорость дыхания митохондрий измеряют полярографическим методом и оценивают по скорости убыли кисло— рода в полярографической ячейке в

МО/мг белка мин. Степень сопряжения дыхания с фосфорилированием АТФ из АДФ и Ф(ДК) рассчитывают по отношению скорости окисления янтарной кислоты без ЛДФ в среде инкубации к скорости окисления янтарной кислоты после добавления ЛДФ (3).

Полученные данные для опытной и контрольной группы подвергают статистической обработке и оценивают достоверность отличий показаний опытной группы от контрольной.

Если скорость дыхания митохондрий и (или) степень сопряжения дыхания с фосфорилированием опытной группы достоверно ниже, а также если скорость дыхания ниже, а ДК не отличается от контрольной группы, сплав считают токсичным.

Примеры осуществления способа.

Пример 1. Площадь поверхности образцов сплавов составляла

90 мм (0,03 мм2/г веса). Свежую порцию воды наливали в поилки через каждые 10 мин в количестве 3,3 мл.

Как видно из табл. 1, у животных принимавших смывы с хромированной

КХС достоверно ниже дыхательный контроль по сравнению с животными контрольной группы, что свидетельствует о токсичности хромированной

КХС. Степень сопряжения дыхания с фосфорилированием у животных, принимавших смывы с КХС достоверно выше, чем в контрольной группе, что свидетельствует об отсутствии токсичности этого сплава.

Пример 2. Площадь поверхности образцов сплавов составляла

180 мм2 (0,06 мм /г веса) .Свежую порцию воды наливали в поилки через каждые 60 мин в количестве 20 мл.

Как видно из табл. 2, у животных, принимавших смывы с хромированной

КХС, достоверно ниже дыхательный контроль по сравнению с контрольной группой, что свидетельствует о токсичности сплава, У животных, принимавших смывы с КХС, достоверно выше по сравнению с контрольной группой как скорость окисления янтарной

13099б2

Таблица 1

Контрольная группа

Группа, принимавшая смыв с КХС

Скорость дыхания

МО2/мин х х10 мг б. т

Скорость дыхания, M0 /ìèH х х10 мг б.

Степень сопряжения

Степень сопряжения

Степень сопряжения

Скорость дыхания, M0g MHH X х10 мг б. т

4,0+0,2 0,139+

0,02

P < 0 02 P > О 6

2,2 0,2 р а 0,02

О, 1522

0,010

3,1+0,3

О, 201+

0,034

P > 0,2 кислоты, так и степень сопряжения, что свидетельствует о нетоксичности сплава.

Пример 3. Площадь поверх— ности образцов сплавов составляла

270 мм (0,09 мм /г веса) . Свежая порция воды наливалась в поилки через каждые 120 мин в количестве 40 мл.

Как видно из табл. 3, у животных, 10 принимавших смывы с хромированной

КХС, достоверно ниже степень сопряжения фосфорилирования с окислением янтарной кислоты по сравнению с контрольной группой, что свидетельствует 15 о токсичности сплава.

При .данных параметрах способа, как и при двух предыдущих, у животных, принимавших смывы с КХС, достоверно выше по сравнению с контрольной груп-20 пой скорость окисления янтарной кислоты и степень сопряжения, что свидетельствует о нетоксичности сплава.

Оба эти сплава, как и другие из неблагородных металлов, применяются в стоматологии на протяжении многих лет при протезировании.

Существующие методы апробации, которыми они были испытаны на токсичность, прежде чем разрешены для ис- 30 пользования в медицинских целях, не показали отрицательных результатов.

Однако многие пациенты, протезированные неблагородными металлами, жалуются на неприятные ощущения во рту, в желудочно-кишечном тракте.

Известные методы испытания на токсичность стоматологических сплавов не столь чувствительны и информативны по сравнению с предлагаемым, так как предлагаемый способ указал на неблагоприятные воздействия хромированной КХС на процессы метаболизма клетки.

Время, необходимое для проведения исследований по предлагаемому способу, составляет 15-20 дней, что в

4-14 раз меньше по сравнению с существующими.

Формула изобретения

Способ оценки токсичности стоматологических сплавов путем введения пробы в организм животного и дальнейшей оценки скорости дыхания и степени сопряжения дыхания с фосфорилированием в митохондриях печени животного, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа за счет моделирования естественных условий введения пробы, животным в течение не менее 10 дней перорально вводят воду, в которую помещен испытуемый сплав, при этом поверхность сплава составляет 0,03-0,09 ми из расчета на 1 г массы животного, а смену воды осуществляют каждые 10-!20 мин.

Группа, принимавшая смыв с хромиров. КХС

1309962

Та блица 2

Контрольная группа

Группа, принимавшая смыв с КХС

Группа, принимавшая смыв с хромиров. КХС

Степень сопряжения

Степень сопряжения

Степень сопряжения

О, 171Ф

0,012

3,9+О, 2

Р с 0,05

2,310,2

Рс 0,05

Таблица 3

Контрольная группа

Группа, принимавшая смыв с КХС

Группа, принимавшая смыв с хромиров. КХС

Степень сопряжения

Степень сопряжения

Степень сопряжения

4,1+О 1

Р Ор02

О, 167+

0,013

2, 1+О, 1

P 0,01

3 3+0,2

Составитель Л.Артюшина

Редактор А.Долинич Техред A.Кравчук Корректор Л;Пилипенко

Заказ 1816/2 Тираж 596 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий . 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Скорость дыхания

МО /мин г тамг б. 10

Скорость дыхания, Ю,/ми

«мг б.. 10

Скорость дыхания

Мо / н мг б. 10

3,1 0,3 0,1961

0,021

P с0,05

Скорость дыхания, М02/мин мг б ° 10

0,231 — +

О, 027

Р «0,05

Скорость дыхания

МО /мин мг б. 10

О, 131+

0,0?0

P 0,3

Скорость дыхания, М0 /мин тамг б. 10

О, 142+

0,013

P >0,2