Способ фиксации образцов биологических тканей для гистологического исследования

 

Изобретение относится к гистологии . Цель изобретения - улучшение качества фиксации тканей. Образцы биологических тканей обрабатывают жидкостью, содержащей формалин, ледяную уксусную кислоту, этиловый спирт и галаскорбин. Затем осуществляют обработку материала по известным методикам. Способ позволяет лучше сохранить ряд микроструктур и повышает сродство к красителям.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (5D 4 С 01 N 1 28

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

flO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3822723/28-14 (22) 05.12.84 (46) 30.05.87. Бюл. У 20 (71) Запорожский государственный медицинский институт (72) В, А. Шаврин и Ю. Ф. Полковников (53) 615.475(088.8) (56) Лилли P. Натогистологическая техника и практическая гистохимия, 1969, с, 40-645. (54) СПОСОБ ФИКСАЦИИ ОБРАЗЦОВ БИОЛОГИЧЕСКИХ ТКАНЕЙ ДЛЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ (57) Изобретение относится к гистологии. Цель изобретения — улучшение качества фиксации тканей, Образцы биологических тканей обрабатывают жидкостью, содержащей формалин, ледяную уксусную кислоту, этиловый спирт и галаскорбин. Затем осуществляют обработку материала по известным методикам. Способ позволяет лучше сохранить ряд микроструктур и повышает Сродство к красителям.

3-5

1 13

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии.

Цель изобретения — улучшение качества фиксации тканей.

Способ осуществляют путем обработки образцов биологических тканей в течение !-5 сут при 15-25 С жидкостью, содержащей формалин, ледяную уксусную кислоту и 967.-ный этиловый спирт, а также галаскорбин при следующем соотношении компонентов, мас.7:

Галаскорбин 3-5

Формалин

Этиловый спирт

967 32-52

Ледяная уксусная кислота Остальное

По окончании фиксации материал обрабатывают по известным методикам— обезвоживают в 967-ном и 1007-ном спирте, заключают в парафин, изготавливают срезы, окрашивают известными. методами окраски, Дополнительное улучшение окраски достигают обработкой полученных после указанной фиксации гистологических срезов 1-2 -ным водным раствором четырехокиси осмия в течение 5 мин при 15-25 С, после чего окрашивают па известным методикам.

Пример ° Кусочки органов и тканей толщиной 0,3-0,5 см фиксиру— ют в течение 1-5 сут при 15-25 С методом погружения в фиксирующей жидкости, приготовленной следующим образом, 4 г галаскорбина растворяют в

47,5 мл ледяной уксусной кислоты до полного растворения, добавляют

3,6 мл концентрированного формалина и 52 мл 967-ного этилового спирта. .Объем фиксатора должен в 7-10 раз превышать объем фиксируемого материала, Оптимальный срок фиксации

3 сут, Фиксацию проводят в плотно закрывающихся емкостях. Хорошо профиксированные кусочки приобретают коричневый оттенок в связи с подкрашивающим эффектом галаскорбина.

Повторно фиксатор не используют. После фиксации кусочки, не промывая н воде, обезноживают в двух порциях этилового спирта в течение суток, заключают в парафин и приготавливают срезы толщиной 3-!О мк па известным методикам.

Окраску депарафинираванных срезов проводят па известным методикам, 1425) 2

5

50 например гематоксилином и эозином, азур-эазином, крезил-виолетам по

Нисслю, галлоцианином по Эйнарсону, железным гематоксилином по Гейденгайну, с сокращением сроков выдержки в красителях н 2 — 10 раз и более раз по сравнению с принятыми, контролируя визуально достаточность прокрашивания, или после депарафиниронания и промынки в воде срезы вначале обрабатывают 1-27-ным водным раствором четырехокиси осмия в течение 5 мин при 15-25 С, промывают в воде 1 мин и затем окрашивают по известным методикам, При окраске

IIpoTpGBHblMH красителями предпочтительно использовать 27-ный раствор четырехакиси осмия, при окраске другиии красителями — 17-ный.

Сравнительное исследование проводили на образцах тканей толщиной

0,3 — 0,5 см из головного мозга, ( сердца, печени, почек и легких. Образцы из каждого органа обрабатывали раздельно по известному и предлагаемому способам фиксации. Все последующие этапы подготовки материала к исследованию проводились тождественна.

Варианты фиксатора, в которых соотношения ингредиентов выходят за пределы предлагаемого диапазона, дают менее эффективные результаты, В частности, увеличение концентрации галаскорбина приводит к грубозернистой фиксации.

Предлагаемый способ в более пол- ном объеме обеспечивает стабилизацию и сохранение в тканях белков и нуклеиновых кислот, эффектиннее предохраняет ткани от возникновения артефактов, связанных с заключением образцов в парафин (н частности, разрывов ткани), лучше сохраняет некоторые легка разрушающиеся микрастуртуры, например щетачную каемку эпителия извитых канальцев почки, повышает сродство к красителям, что позволяет сокращать время окраски в 210 и более раз, понышает прочность связывания тканеных структур с красителями, что препятствует быстрому ныцветанию срезов, а также позволяет выявлять с помощью обычных общегисталагических окрасок (гематоксилином и эозином, азур-эазинам) ряд микроструктур, которые при фиксации по известному способу выявляются только при использовании специальных

1314251 методов окрасок, например тигроид нервных клеток и поперечную исчерченность кардиомиоцитов, Составитель А. Рыбина

Редактор А, Лежнина Техред Л.Сердюкова Корректор. А. Тяско

Заказ 2207/45 Тираж 777 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Формула и з о б р е т е н и я

Способ фиксации образцов биологических тканей для гистологического исследования путем обработки их жидкостью, содержащей формалин, ледяную уксусную кислоту и спирт этиловый, о т.л и ч а ю шийся тем, что, с целью улучшения качества фиксации тканей, фиксатор дополнительно содержит галаскорбин при следующих соотношениях компонентов, мас.Х:

Галаскорбин 3-5

Формалин 3-5

Спирт этиловый 967 32-52

Ледяная уксусная кислота Остальное

>О при этом фиксацию проводят в течение

1-5 сут при 15-25 С.