Способ определения стрессового состояния животного

 

Изобретение относится к области биологии , медицины и ветеринарии. Цель изобретения - повышение точности определения путем учета иммунологического состояния животного и сокращение времени определения . Способ определения стрессового состояния животного включает создание стрессовой ситуации и исследование периферической крови. Из периферической крови выделяют фракцию лимфоцитов, определяют их электрофоретическую подвижность, устанавливают соотнощенне низкоэлектрофоретически подвижных клеток (НЭП) к высокоэлектрофоретически подвижным клеткам (ВЭП) и при значениях соотношения НЭП/ВЭП ниже нормы определяют нахождение животного в состоянии стресса. 1 ил. 3 табл. (Л со to со

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3935937/28-13 (22) 12.07.85 (46) 15.08.87. Бюл. № 30 (71) Иркутский государственный медицинский институт (72) P. Г. Скворцова, В. В. Малышев и А. В. Знамировская (53) 591.1 (088.8) (56) Эндорфины, М.: Мир. 1981, с. 366.

Методические рекомендации по определению возникновения и развития стрессов у поросят с помощbe эозинофильного теста.

Дубровицы, 1978.

„„SU„„1329719 А 1 дд 4 А 01 К 67/02, G 01 N 33 48 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТРЕССОВОГО СОСТОЯНИЯ ЖИВОТНОГО (57) Изобретение относится к области биологии, медицины и ветеринарии. Цель изобретения — повышение точности определения путем учета иммунологического состояния животного и сокращение времени определения. Способ определения стрессового состояния животного включает создание стрессовой ситуации и исследование периферической крови. Из периферической крови выделяют фракцию лимфоцитов, определяют их электрофоретическую подвижность, устанавливают соотношение низкоэлектрофоретически подвижных клеток (НЭП) к высокоэлектрофоретически подвижным клеткам (ВЭП) и при значениях соотношения

НЭП/ВЭП ниже нормы определяют нахождение животного в состоянии стресса. 1 ил.

3 табл.

1329719

Изобретение относится к области биологии,медицины и ветеринарии, а именно к физиолонии, и может быть использовано для определения реактивности организма на стрессорную ситуацию.

Целью изобретения является повышение точности определения стрессового состояния

Ж И l30T НОГО.

Характеристикой стрессового состояния организма является уменьшение соотношения низкоэлектрофоретически подвижных (НЭП, и высокоэлектрофоретически подвижных (ВЭГ1) клеток по сравнению с нормой, характерной для данного вида животных.

Определение соотношения НЭП/ВЭП проводят с Il() 1()II(1 K) электрофоретического ми кроо кон(1 «11()рх)ок))ант 2» в I> BT()M HTIIческом режиме, ITo >н>зволяет быстро и точно Охарактеризовать иммунологпческое состояние организма животного, являющегося важным показателем его физиологического состояния в целом.

На чертеже приведены гистограммы распределения популяции лимфоцитов крыс по

ЭГ! в норме (А) и при иммобилизацион ом стрессе (Б. В).

Пример. Для проведения эксперимента

3(споль:)у)oT две группы лабораторных животных: белые беспородные крысы -- самцы (20 жвиотных) весом 200--210 г и кролики— самцы (43 животных) весом 3 — 3 5 кг.

После недельной выдержки в условиях вивария часть животных используют в качестве контроля, а,другую часть подвергают иммобилизационному стрессу — кроликов 60-минутному, крыс — 6-часовому (фиксация на спине). После стресса у кроликов из ушной вены забирают 3 мл. крови, а у крыс забор крови проводят декапитацией. Таким же образом забирают кровь и у контрольных животных. Выделение лимфоцитов проводят на градиенте плотности фиколл-верографина ((l= 1,077 -1,078), ЭП полученной взвеси определяют с помон)ью электрофоретического измерительного микроскопа «Пармоквант» — 2 в автоматическом режиме.

Получс нные гистограммы распределения ЭП характеризуются наличием двух ников (объем популяций лимфоцитов). Шаг прибора 0,05 10 "м- с В . Распределение по возрастающей ЭП соответствует В- и

T-лимфоцитам. T-лимфоциты находятся во фракциях с высокой ЭП (ВЭГ1), а В-клетки— во фракции с низкой ЭП (НЭП). Разделение гистограмм на две области ВЭП и НЭП— при стрессе и в контроле в трехкратном повторении опытов дает идентичные результа. ты для (>бонх видов животных: наблюдается явное снижение соотношения объема популяций НЭП/ВЭП лимфоцитов.

На чертеже показано характерное изменение гистограмм ЭГ! лимфоцитов периферической крови в контроле и после дейст10 В табл. приведены результаты опыта.

Для подтверждения стрессового состояния у животного одновременно проводят опре деление содержания кортикостерона в плазме крови кроликов и в плазме и надпочечниках х крыс.

В табл. 2 приведено влияние иммобилизационного стресса на содержание кортикостерона в плазме крови и надпочечниках животных.

55

45 вия иммобилизационного стресса, где А— гистограмма, характерная для нормального состояния животного. В пределах ЭГ1 от

0,75 до 1,00 (первый пик) находятся клетки типа В-лимфоцитов, в пределах от 1,00 до

l,65 — Т-лимфоцитов; на гистограммах Б и

В клетки с подвижностью до 1,00 либо отсутствуют, либо их очень мало, что трактуется как снижение относительного содержания лимфоцитов с НЭП.

При расчете доверительного интервала

B пределах +-lо, характеризующего границы нормы, установлено, что границы нормы для крыс (средние данные из трех опытов, п=30) соответствуют: ВЭП - 90,0+- 0,7 (86,2-93,8); НЭП вЂ” - 10,5+ 0,5 (13,2 — 7,8);

НЭП/ВЭП вЂ” 0,11+- 0,001 (0,12 -O, IO); для кроликов НЭП 21,3+- 0,7 (25,! - — 17,5);

ВЭП 79,!+- 0,8 (83,4 — 74,7); НЭП/ВЭП вЂ”вЂ”

0,26+ 0,001 (0,25 -0,27).

Как видно из данных табл. 2, снижение

11ЭГ!/ВЭ!1 кор рели рх к>т с Ii(>I) I>1«ie»«ev кортикостерона в крови и надпочечниках как у кроликов, так и у крыс. 11овышение

АКТГ в крови и надпочечниках, как известно, является признаком стрессиндрома.

В способе-прототипе использук>т стресс отъема поросят от матки в 26-дневном возрасте, в течение которого содержание эозинофилов снижается в среднем на 34_#_o.

В табл. 3 представлено изменение содержания эозинофилов в l мм крови поросят (п= 44) . Достоверные результаты получены в первые сутки после стресса при 1=3,6 и п= 44.

Как показали исследования, соотношение

НЭП/ВЭП для кроликов достоверно снижается на 60О",, для крыс на 75 5 /„ при

1= 5,91 и 5,90 соответственно и и= 22 и

10. Точность получаемых результатов увеличивается с увеличением числа клеток, у которых измеряется электрофоретическая подвижность, так как более четко происходит разделение лимфоцитов на субпопуляции

Формула изобретения

Способ определения стрессового состояния животного, включающий исследование периферической крови с последующей оценкой результата, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, из периферической крови выделяют фракцик) лимфоцитов, определяют их электрофоретическую

1329719 форетически подвижным клеткам и при его значении ниже нормы определяют стрессовое состояние животного. подвижность, а оценку результатов проводят по соотношению низкоэлектрофоретически подвижных клеток к высокоэлектроТаблица 1

Влияние иммобилизационного стресса на соотношение НЭП/ВЭП лимфоцитов у кроликов (п=22) и крыс (п=10;И+в) (Тип клеток по ЭП Контроль

L Опыт

Кролики

10,9 + 2,0 4,38

: 0,001 а 0,001

- 0,001

90,3 + 2,0 3,68

О, 12 + 0,02 5,91

0,3 + 0,03

Крысы

- 0,001 (О, 00)1 - О, 001

5,32

2,6+ 1,0

97,8 + 1,5

0,027 + 0,01

3,19

5,90

Та блица 2

Содержание кортикостерона, мкг/100 г

Объект исследования

Контроль

Опыт

Крысы

2,82

3,0+ 0,7

9,6 + 0,8

Плазма крови

395 + +96,0 1137,0+106,0

5,10

Надпочечники

Кролики

1, 9 + О, 19 3,8 + 0,3 (О, 001

5,58

Плазма крови

НЭП, 7.

ВЭП, 7. нэп/вэп

НЭП, 7.

ВЭП, 7 нэп/вэп

23,0 + 1,9

79,6 + 2,1

10,3 + 1,1

90,8 + 1,9

0,11 + 0,01

-0,001 а 0,001

1329719

Т а б л и ц а 3

Изменение по

M + m

Время иссравнению с периодом до отъема, X следований, дни

368 + 14

До отъема

После отъема

3,6

6,8

6,7

3,4

5,4

2,2

Iб

1ч

rz

rd

d б ч

z и

r4

1г я

d ч

Составитель И. Тареева

Редактор Л. Веселовская Техред И. Верес Корректор Г. Решетник

Заказ 3506/5 Тираж 627 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

1! 3035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

278 + 20

217 + 17

213 + 18

264 + 27

348 + 29

360 + 26

zu ю

rd

/ч

rz

ro

d б

4 г

24,5 — 41,0 — 42,1

28,3 (0,001

О, 001 (0» 001

О, 001