Способ определения ионов кальция в мышечных волокнах

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А( (19) (!1) (584 С 0 И 28

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМ У СВИДЕТЕЛЬСТВУ.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3702723/28-14 (22) 17.02.84 (46) 07.08.87. Бюл. Ф 29 (71) Институт цитологии АН СССР и Институт токсикологии (72) В.Ф. Машанский, Н.В. Томилин, В.Г. Кузнецов, С,Е. Ли и Г.В. Сабинин (53) 616-0.88.8(088.8) (56) Самосудова Н.В., Людковская В.Г.

Взаияосвязь между поперечно-полосатой структурой мышцы и распределением в ней кальция. — Цитология, 1979, 21, 4, с. 391-396. (54) СПОСОБ ОПРЕДМЛЕНИЯ ИОНОВ КАЛЬЦИЯ В МЫШЕЧНЫХ BOJIOKHAX

I (57) Цель изобретения — повышение точности способа за счет полного выявления ионов кальция в митохондриях, саркоплазматическом ретикулуме и 1 и А зонах. Для этого ткань замораживают, помещают в ацетон, охлажденный до температуры твердой углекислоты.

Далее объект помещают в смесь ацетона аралдитом, концентрация которого постепенно повышалась до 100X.. Последний этап в чистом аралдите проводят в вакууме. Срезы окрашивают 2-2,5Х-ным. раствором пироантиманата калия. Ионы кальция определяют по наличию электронно-плотного осадка.

8731

В каждой смеси объект выдерживают в течение 2 ч. Последний этап в чистом аралдите проводят в вакуумной

Составитель М.Позняк

Техред A. Кравчук

Корректор А.Тяско

Редактор П.Гереши

Заказ 3479/47

Тираж 776 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

1 132

Изобретение относится к медицине, а именно к области цитохимических исследований для анализа распределения ионов кальция и других двухвалентных ионов при излучении быстро протекающих внутриклеточных процессов например, мышечных повреждений, вызванных действием фосфорорганических инсектицидов, а также процессов возбуждения нервных клеток и мьппечных волокон в норме.

Цель изобретения — повьппение точности способа за счет полного выявления ионов кальция в митохондриях, саркоплазматическом ретикулуме и 1 и А зонах путем пропитки срезов в вакууме и окрашивания их в 2-2,5Х-ном растворе пироантимоната калия.

Способ осуществляют следующим образом.

Металлическим стержнем, охлажденным до температуры жидкого азота, . проводят быстрое замораживание участка диафрагмальной мышцы крысы, наркотизированной гексеналом. Замороженный кусочек диафрагмы быстро помещают в ацетон, охлажденный до температуры твердой углекислоты, в котором выдерживают в течение 5 ч для замещения витрифицированной воды из объекта с последующим постепенным (в течение 1 ч) повышением температуры до комнатной. Далее объект помещают в смесь ацетона с аралдитом, концентрация которого постепенно повьппалась до 100Х по следующей схеме: 3 ч. ацетона на 1 ч аралдита, т.е. 3 1, далее 1:1; 1:3; чистый аралдит. камере (рабочий вакуум 10 торр).

Далее осуществляют полимеризацию при

60 С и резку на ультрамикротоме, в ванночку ножа которого заливают

2-2,57-ный раствор пироантимоната калия в дистиллированной воде. Просмотр срезов осуществляют в электронном микроскопе. Ионы кальция определяют по наличию электронно-плотного осадка.

Использование предлагаемого способа позволяет сохранить основные компоненты объекта в неизменном виде, закрепив в смоле исследуемые ионы до момента соприкосновения их с водными раствора, что создает условия более полного и точного выявления исходной локализации ионов в близком

2P K HBTHBHoMQ cocToHHHIo MTo MoK0T быть полезно при изучении динамики протекания различных патологических процессов в живом организме.

Формула изобретения

Способ определения ионов кальция в мьппечных волокнах, путем эамора30 живания ткани жидким азотом; обезвоживания в ацетоне охлажденном твер,цой углекислотой, пропитки в смолах и приготовления срезов, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью

35 повышения точности способа за счет полного выявления ионов кальция в митохондриях, саркоплазматическом ретикулуме н 1 и А зонах, пропитку проводят под вакуумом, а срезы окраши40 вают 2-2,57.-ным раствором пироантиманата калия, при этом ионы кальция определяют по наличию электронноплотного осадка.