Способ контроля насыщения биологической ткани жидким криопротектором

 

Изобретение относится к биолотии и медицине, предназначно для низкотемпературной консервации тканей с целью последующей их трансплантации . Цель изобретения - повышение чувствительности способа. Дпя этого ткань после определения ее исходной массы и влажности инкубируют в водном р-ре диметилсульфоксида (ДМСО) и после инкубации определяют изменение массы ткани, экстрагируют ДМСО хлороформом и определяют концентрацию ДМСО ИК-спектрофотометрией, рассчитьшают насьпцение ткани ДМСО по формуле С V. Сисх-ГСм-(И-К) (В.т):100+ -im, где V - объем инкубационной среды, взятый для анализа; С, - концентрация ДМСО в среде до инкубации; Схл - концентрация ДМСО- в хлороформе; К - коэффициент распределения ДМСО в системе вода - хлороформ; В - исходная влажность ткани; m - масса ткан до инкубации; um - изменение массы ткани после инкубации. 2 табл. с (Л

СОЮЗ СОНЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) . (51) 4 А Ol М 1/00, 1/02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

К д ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3985502/28-14 (22) 10.12.85 (46) 07.09.87. Бюл. 1Ф 33 (71) Институт проблем криобиологии и криомедицины АН УССР (72) Т.П. Линник, В.А.Чуйко, A.Н.Новиков, Л.Г.Карпенко и Л.А.Назарова (53) 612.015(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Ф 572252, кл. A 01 N 1/00, 1976..

I (54) СПОСОБ КОНТРОЛЯ НАСЫЩЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ТКАНИ ЖИДКИМ КРИОПРОТЕКТОРОМ (57) Изобретение относится к биологии и медицине, предназначно для низкотемпературной консервации тканей с целью последующей их трансплантации. Цель изобретения — повышение чувствительности способа. Для этого ткань после определения ее исходной массы и влажности инкубируют в водном р-ре диметилсульфоксида (ДМСО) и после инкубации определяют изменение массы ткани, экстрагируют ДМСО хлороформом и определяют концентрацию ДМСО

ИК-спектрофотометрией, рассчитывают насыщение ткани ДМСО по формуле С

=Ч (С „,„ — (С „„"(1+К)):K): ((В,m):100+

+Ьп1), где V — объем инкубационной среды, взятый для анализа; С„,„ — концентрация ДМСО в среде до инкубации;

C„ — концентрация ДМСО. в хлороформе;

К вЂ” коэффициент распределения ДМСО в системе вода — хлороформ;  — исход- а ф ная влажность ткани; m — масса ткани. до инкубации; am — изменение массы ткани после инкубации. 2 табл.

1335238

Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано при низкотемпературном консервировании тканей с целью последующей их .) трансплантации.

Цель изобретения — повышение чувствительности способа.

Поставленная цель достигается тем, что ткань после определения ее исходной массы и влажности инкубируют в водном растворе диметилсульфоксида (ДМСО) и после инкубации определяют изменение ее массы, экстрагируют ДМСО хлороформом и определяют в нем концентрацию ДМСО методом ИК-спектрофотометрии, после чего рассчитывают насыщение ткани ДМСО по формуле

С „(1+К) К (Сис

2С

4m

С—

В ° m

+ hm

100 где V — объем инкубационной среды, взятый для анализа, мм;

С„,„ — концентрация ДИСО в среде до инкубации,X

С„, — концентрация ДМСО в хлороформе,Х;

К вЂ” коэффициент распределения зу

ДМСО в системе вода — хлороформ, равный 0 058 — исходная влажность ткани,X: — масса ткани до инкубации,г; — изменение массы ткани после инкубации, r.

Пример. Образцы ткани щитовидной железы (15 х 4 х 2 мм) массой

0,2540, 0,2246 и 0,2799 r исходной влажностью 81,8Х (влажность определя- 4р ют по известной методике) заливают

2 мп 107-ного водного раствора ДМСО и инкубируют 15, 30 и б0 мин при

37 С. Затем от каждой пробы отбирают по 1,5 мл инкубационной среды и при- 45 бавляют по 1,5 мл хлороформа. После встряхивания в течение 25 мин и центрифугирования отбирают хлороформенный слой и определяют в нем концентрацию ДМСО спектрофотометрически по калибровочной кривой зависимости оптической плотности от концентрации (фиг.1).

Спектры снимают на ИК-спектрофотометре "Specord-75IR" в кюветах из

CaF толщиной слоя 0,08 см (в зависимости от концентрации она варьирует в пределах 0,08-5,0 см). В качестве рабочей принимают полосу поглощения валентных колебаний СН -группы (2980 ) в ИК-спектре ДМСО.

Кусочки ткани после инкубации промывают путем быстрого погружения в физиологический раствор и промывают фильтрованной бумагой. Затем взвешивают, определив изменение массы ткани после инкубации, и расчитывают процентное содержание ДМСО в ткани по формуле (1).

Результаты приведены в табл,1.

Из табл.1 видно, что через 15 мин инкубации в ткань проникает только

3,77. ДМСО, что недостаточно для консервирования, через 30 мин в ткани 9,0Х ДМСО, т.е. то количество, которое обеспечивает криозащитный эффект. При подготовке данной ткани к конвервированию ге необходимо инкубировать в растворе ДМСО не менее

30 мин.

В табл.2 представлены данные исследования способности щитовидной железы к аккумуляции радиоактивного йода после замораживания в зависимости от времени инкубации.

Из табл.2 видно, что ДМСО обеспечивает криозащитный эффект при

40 мин инкубации.

Предлагаемый способ позволяет определять концентрацию ДМСО в хлороформе до 10 м, что соответствует

-4 концентрации ДМСО в инкубационной среде 1,5 10 М (т.е. до О, 013),следовательно, чувствительность способа в 500.раэ выше, чем по известному способу, где чувствительность 5Х.

Формула изобретения

Способ контроля насыщения биологической ткани жидким криопротектором, включающий обработку ткани криопротектором с последующим определением его концентрации в растворе, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа при использовании диметилсульфоксида (ДМСО) в качестве криопротектора, ткань инкубируют. в растворе ДИСО, при этом определяют исходный уровень массы, влажность ткани, концентрацию ДМСО в инкубационной среде, объем инкубационной среды после инкубации определяют изменением массы ткани, далее в среду добавляют хлороформ, в хлороформенном экстракте определяют концентрацию ДМСО ме1335238

Сисх— хл

С „(1+К)

V (C — — " - — — — ) нсх.

В m — --+ Ьш

100

В ш дш

Таблица 1

Концентрация ДМСО в ткани, Ж

Концентрация ДМСО в в хлороформе,X

Исходная масса, ткани,г

Изменение массы ткаВремя инкубации, мин ни после инкубации, 7.

3,7

0 0542

0,0634 0,0744

0,2540

0,2246

0,2799

0,55

О, 5.1

9,0

10,6

0,46

Таблица 2

Содержание по отношению к контролю, 7

Условия эксперимента

Интактная щитовидная железа

0,169-0,011

0,078+0,006

Инкубация с 0,9Х NaC1

Инкубация с ДМСО в течение, мин:

0,058+ 0,009

0,099+0,008

0,141+0,14

О 171+0 015

Составитель Н.Литвиненко

Редактор Н.Рогулич Техред B.Кадар Корректор А, Обручар

Заказ 3993/6 Тираж 627 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие,г.Ужгород,ул.Проектная,4 тодом ИК-спектрофотометрии, а насыщение С ткани криопротектором определяют по формуле где V — объем инкубационной среды, взятый для анализа; концентрация ДМСО в среде до инкубации; концентрация ДМСО в хлороформе; коэффициент распределения

ДМСО в системе вода — хлороформ, равный 0,058; исходная влажность ткани; масса ткани до инкубации1 изменение массы ткани после инкубации .